Способ экспресс-диагностики сифилиса

(54) СПОСОБ ЭКСИФИЛИСА М 7й государственный мед А.Версютина и А.Х,КаСССР для реакции миксифилис от 20.10,78 г.Р ЕСС-ДИАГНОСТИКИ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБР РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС Изобретение относится к иммунологии и касается серологических способов исследования.8 последние годы возросла потребность в более широком охвате населения серологическими исследованиями на сифилис при профосмотрах, массовом обследовании доноров, беременных, больных инфекционными заболеваниями в стационарах, в гематологической и хирургической практике, Так, большое распространение за рубежом получили микроосадочные реакции с кардиолипиновым антигеном и сыворотной крови больного - тест ДР 1 и его модификации касались сыворотки и крови больных - активная или инэктивная сыворотка, плазма крови, нативная кровь из пальца, но при всех модификациях в качестве антигена использован кардиолипин.Начиная с 1978 года, при массовых обследованиях на сифилис больших групп населения в нашей стране все чаше используется микрореэкция с кардиолипиновым антигеном. Однако общепризнано, что микрореация чаще, чем другие реакции на сифили(57) Изобретение относится к медицине и может бцть использовано в диагностике сифилиса. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. В реакции микропреципитации на стекле используют озвученный трепанемный антиген, эмульгированный в масле, и при выявлении преципитации диагностируют сифилис, По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа, достигается экономичность метода. может давать ложноположительные резул ьтаты, В связи с этим она и называется ориентировочным (отборочным) тестом.Наиболее близким (прототип) по своей сущности к предлагаемому изобретению является кардиолипиновый антиген, утвержденный МЗ СССР для реакции микропреципитации на предметном стекле для серологического обследования на сифилис, представляющий собой раствор липи- О дов и холестерина в абсолютном этаноле,Однако данный антиген является неспе- С 3 цифическим, в связи с чем он дает опреде- ( ленное количество неспецифических срезультатов.цель предлагаемого изобретения - по. ьть вцшение чувствительности способа.Способ осуществляют следующим обрэзом.Готовят масляный специфический антиген из озвученного культурального трепонемного антигена (Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток) для РСК по методике приготовления масляного антигена для реакции агломерации - одной из реакций мо 1797067. Адсорбентом специфического антигенэ служат частицы масляной эмульсии, полученныеиз оливкового масла(или подсолнечного) Разбавителем является физиологический раствор поваренной соли (0,85,), в качествеэмульгатора используется 5-ный р-р буры.Для этих целей в колбу с 20 мл физраствора добавляют 1,3 мл оливкового масла и3-5 капель 5-ного раствора буры, Смесьэнергично встряхивают руками в течение 10мин, Полученную мелкодисперсную эмульсию используют в дальнейшей работе,Для проведения сенсибилизации к Юмг сухого коммерческого трепонемного озвученного антигена (во флаконе) добавляют5 мл физиологического раствора, встряхивают до полного растворения и оставляют на5 мин при комнатной температуре, Затемравные объемы приготовленной маслянойэмульсии и растворенного трепонемНогоозвученного антигена в физиологическомрастворе. смешивают встряхиванием в пробирке в течение 2-3 мин. Приготовленнаясмесь выдерживается при комнатной температуре до 30 мин; После этого энтигениспользуют в реакции,Масляный трепонемный озвученный- антиген не теряет своих свойств при хранении в холодильнике (при 3-5 С) в течение 10дней (срок наблюдения),В реакции микропреципитации на стекле используют инактивированную сыворотку крови людей в разведении 1:5,На предметное стекло с лунками илиполистироловую пластинку "опыт" и "контроль" наносят по 1 капле масляного трепонемного озвученного антигена, В опытнуюлунку добавляют 1 каплю исследуемой сыворотки (1:5) и перемешивают стекляннойпалочкой; в контрольную лунку 1 каплю физиологического раствора или 1 каплю сыворотки крови донора (заведомоотрицательную) в-разведении 1:5 и такжесразу перемешивают стеклянной палочкой,Через 3-5 минут учитывэВт реакцию, Длялучшей видимости преципитации можно испольэовать черный фон.Положительной реакцией (опыт) считают образование четко ограниченного преципитата в центре капли; по перифериикапли наблюдается просветление,При отрицательной реакции (контроль)капля остается гомогенно-мутной,Возможность использования в диагностическом тесте (ДТ) нэ сифилис масляноготрепонемного озвученного антигена поясняется в примерах исследования сыворотоккрови людей больных сифилисом, обследующихся на сифилис больных другими заболеваниями несифилитической этиологии ипрактически здоровых людей - доноров,Результаты ДТ сравнивали с микрореакцией на стекле с кардиолипиновым энтигеном,5 применяющимся для экспресс-диагностикисифилиса (ЭДС), с результатами стандартногокомплекса серологических реакций на сифилис (КСР) и реакции иммунофлуоресценции(РИФ, непрямой метод), которую ставили для10 уточнения результатов исследования некоторых сывороток.Способ поясняют следующими примерами,П р и м е р 1, 100 сывороток крови15 людей с установленным диагнозом различных форм сифилиса инактивировали на водяной бане при 56 С в течение 30 мин. Длякаждой испытуемой сыворотки готовилиразведение 15 в пробирке (такое разведе 20 ние сыворотки используется для постановки РСК). На предметное стекло наносили 1каплю готового масляного трепонемногоантигена и 1 каплю исследуемой сывороткибольного (" Опыт" ), Рядом, для "Контроля",25 к 1 капле масляного трепонемного антигенадобавляли 1 каплю физиологического раствора. Стеклянной палочкой тщательно перемешивали капли,Через 3-5 мин учитывали реакцию. Для30 лучшей видимости преципитации можно использовать черный фон, Положительная реакция появилась образованием ограниченногопреципитата в центре капли; по перифериикапли наблюдалось просветление. В "Контро 35 ле" капля осталась гомогенно-мутной,Положительные результаты в ДТ получены с 91 сывороткой, в ЭДС с кардиолипиновым с 86, в КСР - с 87. Рлсхождения врезультатах исследования сывороток этой40 группы составили 5 сывороток в пользу ДТ.Эти сыворотки принадлежали людям с установленным диагнозом сифилиса.П р и и ер 2. Исследование группы. сывороток от людей, обследующихся нэ си 45 филис по различным причинам (для снятияс учета после проведенного лечения, контактные люди, подозрение на сифилис ввиду наличия клинических признаков и т,д,) вколичестве 58, проводили по предложенной50 методике; на предметном стекле 1 каплюмасляного трепонемного антигена тщательно смешивали с 1 каплей исследуемой сыворотки стеклянной палочкой; контролемслужила капля масляного трепонемного ан 55 тигена и капля физиологического раствора.Учет результатов проводили через 3-5 минут. Положительные результаты в диагностическом тесте с масляным трепонемнымантигеном получены с 37 сыворотками, вэкспресс-диагностике с кардиолипиновым1797067 5 10 15 20 25 40 50 антигеном - с 26, в КСР - с 26, Расхождения в результатах исследования по разным серологическим тестам были получены с 11 сыворотками. В ЭДС и КСР. У шести больных с клиническими проявлениями, сыворотки которых входят в группу давших расхождения в результатах исследования, в дальнейшем (по клиническим данным эрозивный твердый шанкр) установлен диагноз первичного активного и вторичного рецидивного сифилиса и в РИФ был получен положительный результат.С тремя сыворотками людей, больных сифилисом, прошедших курс лечения и снимающихся с учета, получены положительные результаты не только в диагностическом тесте с масляным трепонемным антигеном, но и в РИФ, при отрицательных результатах КСР и ЭДС. Учитывая чувствительность и специфичность РИФ, можно. положительные результаты с ДТ вышеуказанными сыворотками считать подтверждающими чувствительность масляного трепонемного антигена,Больные, с сыворотками которых получены положительные результаты только в ДТ с масляным трепонемным антигеном при отрицательных результатах в других серо- логических тестах, требуют более глубокого обследования и дальнейшего наблюдения.П р и м е р 3, С сывороткой больного А-ва А.М. с диагнозом: "эрозивный беланопостит" получены отрицательные результаты и в комплексе серологических реакций и в ЭДС с кардиолипиновым антигеном. В диагностическом тесте на стекле с масляным трепонемным антигеном и в РИФ был получен положительный результат. В дальнейшем данному больному был поставлен диагноз первичного активного сифилиса.П р и м е р 4. Сыворотка больного М-ва С,Н, с диагнозом первичного активного сифилиса, прошедшего курсы лечения и снимающегося с учета, дала положительный результат в ДТ с масляным трепонемным антигеном и в РИФ при отрицательных результатах в КСР и ЭДС с кардиолипиновым. П р и м е р 5, Исследование сывороток крови людей с заболеваниями несифилитической этиологии (гонорея, кожные болезни и др.) в количестве 24 в диагностическом тесте на стекле выявляет достаточную специфичность масляного трепонемного анти- гена: с 22 сыворотками получены отрицательные результаты, с 2-мя - положи-. тельные. В КСР все сыворотки дали отрицательный результат, в ЭДСс кардиолипиновым - 23 отрицательных результата и один положительный, Две сыворотки с положительным результатом в реакции преципитации на стекле с масляным трепонемным антигеном, принадлежали людям с хронической гонореей; РИФ с ними - отрицательна. Поэтому, эти два результата можно оценить как неспецифические, Т.к. предлагаемый тест является отборочным, полученные положительные результаты требуют дальнейшего клинического обследования и наблюдения за больными для установления окончательного диагноза.П р и м е р 6. Группа сывороток крови доноров (56) во всех серологических тестах - КСР, ЭДС, с кардиолипином и ДТ с трепонемным масляным антигеном дала отрицательные результаты. Это свидетельствует о выраженной специфической реакции с масляным трепонемным антигеном.Проведенные исследования сывороток крови больных сифилисом и здоровых людей подтвердили большую специфичность и чувствительность диагностического теста с масляным трепонемным антигеном в сравнении с кардиолипином в аналогичной реакции преципитации на стекле, Т.о,предлагаемый отборочный тест позволяет при простоте постановки и учета реакции повысить надежность получаемых результатов при массовых обследованиях больших групп людей на сифилис.Для получения масляного трепонемного культурального озвученного антигена для отборочной реакции на сифилис не требуется отдельного производства, т.к. он готовится на основе коммерческого трепонемного озвученного антигена для РСК В данном диагностическом тесте используется специфический антиген, что по 45 зволяет повысить надежность получаемых результатов при исследовании сывороток для выявления больных сифилисом людей сравнительно с кардиолипиновым антигеном,Масляный трепонемный озвученный антиген, как приготовленный для реакции, так и недоиспользованный, сохраняет свою работоспособность в,течение 10 дней (срокнаблюдения).1797067 Составитель В.ЕгороваТехред М.Моргентэл Корректор Л,Пилипенко Редактор Заказ 651 Гирэж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/б Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Ф ор мул а и зо 6 ретен ияСпособ экспресс-диагностики сифилиса, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее со специфическим антигеном и при появлении микропреципитата диагностируют сифилис, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве специфического антигена используют энтиген из разрушенных ультразвуком культурэльных трепэнем, змульгированный в масле.