Способ прогнозирования течения язвенной болезни

(19) 51)5 6 01 Й 33/ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМ ИДЕТЕЛ ЬСТВУ(21) 4821594/14 (22) 29.04,90 (46) 23.06,92, Бю (71) 1-й Московс им. И,М,Сечено (72) М.В,Неверо (53) 615,375 (088 (56) Тер,архив, 1 (54) СПОСОБ П НИЯ ЯЗВЕННО л,%23 кий медицинск ава и Д.В,Белокр 8)985, М 3, с.95 -РОГНОЗИРОВАЙ БОЛЕЗНИ институ иницк Я ТЕЧЕГед ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии,Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляется следующим образом.этап. Выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки. Кишечник недоношенного эмбриона отмывают от крови, осторожно отделяют слизистую оболочку и гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера с физиологическим раствором в соотношении 1:1. Измельченную ткань подвергают дообному центрифугированию. Супернатант центрифугируют в течение 1 ч при 105000 об/мин. Перевод антигена в растворимое состояние из клеточных мембран осуществляют с помощью папина, добавляемого из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта, Смесь выдерживают в термостате при 37 С в течение 1 ч. После центрифугирования при 88700 об/мин супернатант разгоняют на колонке с сефадексом 6 200 и отбирают фракции с максимальным содержанием белка (определяют по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракций антиген используется в концентрации 250 гам/мл.(57) Использование; в медицине, в частности в гастроэнтерологии для определения тяжести течения язвенной болезни, Сущность; к отдельным ",.робам взвеси лейкоцитов добавляют антигены. полученные из различных органов. определяют индекс миграции лейкоци ов и при значении его менее 0,8 и более 1,2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания, 3 табл,В реакции также используются антигены клеточных мембран кардиомиоцитов Я(кардиальный антиген) в концентрации ,"100 гам/мл и баэальные мембраны почеч- Мных клубочков (почечный антиген) в концы.трации 300 гам/мл,этап Подготовка агара,Заранее готовят 30/ь-ный агар "Дифко"на физиологическом растворе с 0,05 М трисНС буфером (рН 7,3) и хранят при 4"С. Вдень опыта к 5 мл расплавленного агара. остывшего до 50 - 54 С, прибавляют 10 млсмеси, состоящей из 9 мл среды 199,млъ. 1сыворотки крупного рогатого скота, 100 ЕД/мл -4пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. ЬЗонагретой до 37 С, Пластиковые чашки Петри,одноразового использования диаметром130 мм заливаю 1 приготовленной смесью.Чашки устанавливают строго горизонтально и наливают равные количества геля, чтобы толщина его составляла 2 мм. Взатвердевшем геле пробойником выбиваютлунки диаметром 2.5 мм,этап. Выделение лейкоцитов,В пластиковую пробирку поме:ают10 мл гепаринизированной крови (26 ед,;епарина на 1 мл крови) обследуемого. Кровьзабирают из локтевой вены натощак. В те 1 742725чение 1 ч пробирку выдерживают в термостате при 37 С, После отстаивания плазму осторожно переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. Примесь эритроцитов в клеточном осадке лизируют в гипотоническом растворе хлористого натрия, для чего к клеточному осадку добавляют 5,0 мл 0,35;-ного раствора МаС и осторожно пастеровской пипеткой ресуспендируют клетки, не допуская образования пены, в течение 35 - 40 с. После экспозиции к суспензии клеток немедленно добавляют 0,6 мл 5 -ного раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. В результате раствор становится изотоническим. Полученную взвесь лейкоцитов трижды отмывают средой 199.И этап. Постановка реакции торможения миграции лейкоцитов,Контрольные и опытные исследования проводят в четырех параллельных лунках, внося в каждую из них по 5 мкл ресуспензированной лейковзвеси (1,5 млн клеток) и 5 мкл раствора антигена или среды 199 (контроль). После инкубации чашек при 37 С в течение 24 ч агаровые блоки с целью фиксации клеток заливают 10 -ным раствором формалина. Через 4 ч слой агара осторожно удаляют, чашки промывают дистиллированой водой и высушивают. Результаты учитывают путем отбрасывания изображения полей миграции на бумагу с помощью проекционного аппарата "Микрофот" типа 5 ПО. Индекс миграции (ИМ) определяют по отношению средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле2 2О - ФО 2 - б 2 где 01 - средний диаметр четырех зон миграции в опыте;02 - средний диаметр четырех зон миграции в контроле;б - средний диаметр четырех центральных лунок в опыте;б 2 - средний диаметр четырех центральных лунок в контроле.Отработанные на 20 здоровых донорах нормы ИМ находятся в пределах 0,8 - 1,2,Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью желудка (ЯБЖ) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл.1. Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью 12-перстной кишки (ЯБДК) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл, 2. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Результаты РТМЛ у больных хроническим гастритом (ХГ) до и после леченияпредставлены в табл,3,Таким образом, видно, что положительные результаты РТМЛ с двумя и более антигенами характерны для тяжелого теченияЯБ.При значении ИМ в РТМЛ с двумя иболее тканевыми антигенами (помимо кишечного) менее 0,8 и более 1,2, полученному больных ЯБ в стадии обострения до началалечения, можно прогнозировать тяжелое течение заболевания.П р и ме р 1, Больной Г.,46 лет. Диагнозпри поступлении: язвенная болезнь желудка в стадии обострения, Объективно; состояние удовлетворительное, кожные покровыи слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа неувеличены, Над легкими дыхание везикулярное, Хрипов нет. ЧД 16/мин, Тоны сердца приглушены, ритм правильный, АД135/75 мм рт.ст., ЧСС 72 уд/мин, Животмягкий. болезненный при попытке пальпации в эпигастрии, Печень и селезенка непальпируются. перкугорно - не увеличены,Стул ежедневный, оформленный, обычнойокраски. При эзофагогастродуоденоскопии(ЭГДС) выявлена язва угла желудка диаметром 0,7 см, умеренная гиперемия в указанной зоне. Остается неясным дальнейшийпрогноз течения заболевания, При посгановке РТМЛ исходные, до начала лечения,величины ИМ составили с кишечным антигеном 0,47, с кардиальным 0,76, с почечным1,12, Таким образом, РТМЛ положительна сдвумя антигенами, один из которых кишечный. У данного больного прогнозируется тяжелое течение ЯБ. Действительно, убольного отмечается тяжелое течение заболевания (язвенный анамнез 15 лет) с ежегодными (2 - 3 раза в год) обострениями.П р и м е р 2, Больной К., 45 лет, Диагноз;язвенная болезнь двенадцатиперстнойкишки в стадии обострения. Жалобы: боли вэпигастрии сжимающего и сосущего характера, возникающие натощак, часо ночью.Из истории заболевания: язва выявленавпервые в амбулаторных условиях приЭГДС две недели назад - язва на заднейстенке луковицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см с периульцерозным отеком.Обьективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые обычнойокраски, Над легкими дыхание везикулярное, Тоны сердца звучные, ритм праеильн ый, АД 130/70 мм рт.стЧ С С 74 уд/ми н,Живот мягкий, болезненный при ггальпациив эпигастрии, Печень у нижнего края реберной дуги, селезенка не увеличена. Хотя у1742725 Таблица 1--- - т --миграции Количество положительньх реак- ций г - Группа больных Анти ген СтимуляцияЯБ)К легкого и средней тяжести; течения (12)КишечныйКардиальнь 0,78+0,07 0,85+ 0.08 0,88+0,04 1,06+0,051,10:0,07 ,10+О,О -очечный Я БЖ тяжелого течения (18)Кишечн 167г 0,41 =0,06 0,42+0,060,65 -0,03 0,71 -0,08 0,78+0.09 0,80+0.0Кардиальный Почечный 5 г данного больного язва выявлена впервые, однако данные клинико-инструментального обследования не позволяют с уверенностью говорить о дальнейшем течении ЯБДК,Результаты РТМЛ: ИМ с кишечным антигеном 0,76, с кардиальным 1,00, с почечным 1,12, РТМЛ положительна только с кишечным антигеном. У данного больного прогнозируется благоприятное течение заболевания. Действительно, в дальнейшем ЯБДК протекала достаточно благоприятно, обострения возникали 1 раз в 2 - 3 года, язвенный дефект успешно рубцевался под действием антацидов, холинолитиков, обволакивающих,П р и м е р 3, Больной Ф., 37 лет, Диагноз: язвенная болезнь 12-перстной кишки в стадии обострения, Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые бледные, чистые. Язык обложен густым белым налетом, Живот резко болезненный при попытке пальпации в эпигастрии справа. Печень и селезенка не пальпируются,ЭГДС: язва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см и на верхне-задней 0,4 см. Результаты РТМЛ: ИМ с кишечным антигеном 0,58, с кардиальным 0,92, с почечным 1,21, До начала лечения РТМЛ положительна с двумя тканевыми антигенами, что позволило прогнозировать тяжелое течение ЯБДК. Действительно, у данного 5 10 15 20 25 30 35 больного язвенный анамнез 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями,После окончания лечения РТМЛ также была положительна с двумя антигенами - кишечным (ИМ 0,59) и почечным (ИМ 1,21), Дальнейший прогноз ЯБДК неблагоприятен, необходима коррекция терапии либо хирургическое лечение.Таким образом, использование данного способа прогнозирования течения ЯБ позволяет уже при исходной - до начала лечения - постановке РТМЛ с несколькими, помимо кишечного, антигенами прогнозировать характер дальнейшего течения заболевания, индивидуально подбирать адекватную противоязвенную терапию и корректировать дальнейшее лечение. Указанные положения имеют принципиальное значение в лечении ЯБ. Точность указанного способа 67 О,Формула изобретения Способ прогнозирования течения язвенной болезни путем добавления к взвеси лейкоцитов больного тканевого антигена, проведение миграции лейкоцитов с последующей оценкой реакции, о т л и ч а ю - щ и й: я тем, что, с целью повышенил точнэст;, способа, к отдельным пробам взвеси лейкоцитов добавляют антигены, полученные из различных органов, определяют индекс мйграции лейкоцитов и при значении его менее 0,8 и более 1,2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания.1742725 Таблица 2 Таблица 3 лет) язвенным анамнезом, обострениями заболевания чаще 2 раз в год, чередованием обострений и неполных ремиссий,Составитель Г. КрюковаТехред М,Моргентал Корректор Т, Палий Редактор В. Петраш Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Заказ 2281 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва. Ж, Раушская наб., 4/5