Питательная среда для культивирования пыльников риса

.ч. ПИСАНИ АВТОРСКОМУ СВ ОБР Е ИДЕТЕЛ ЬСТВ 10/138991. Бюл. М 35юзный научно-исс овательски Харченко, Н,Е ин и М.Г.Вор 85,23(088.8) нко Р.Г. Куль физиология, физ внов О 1 ь Прируют наготовят по ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(21) 4741 (22) 27,09 (46) 23,09 (71) Всес институт (72) П.Н. Е.П.Алеш (53) 578.0 (56) Буте тканей и ний. - М бретение относится к биотехнолостности к культивированию и чтго х культур, преимущественно риса, и ыть использовано в растениеводстологии растений.ь изобретения - повышение интени образования каллуса из пыльниВ питательную среду, включающую азотнокислый кальций, азотнокислый калий, сернокислый магний, азотнокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, хлористый калий, сернокислый цинк, барную кислоту, сернокислый марганец, иодистый калий, этилендиамин-тетрацитат натрия (ЭДТА), сернокислое железо, тиамин, пиридоксин, никотиновую кислоту, глицин, сахарозу, агар-агар и 2,4- дихлорфеноксиуксусную кислоту, дополнительно вводят к резацин (трис-(2-оксиэтил)аммоний-метилфеноксиацетат) в качестве дедифференциатора при соотношении компонентов, мась, указанном в табл,1,Ы 1678256 А 1 51)5 А 01 Н 4/00, С 12 М 5/О Щ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПЫЛЬНИКОВ РИСА(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированиюп УФо зерновых культур, преимущественно риса, и может быть использовано в растениеводстве, физиологии растений. Целью изобретения является повышение интенсивности образования каллуса из пыльников. Питательная среда, согласно изобретению, включает в себя набор макро- и микроэлементов, при этом в качестве дедифференциатора в ней дополнительно содержится крезацин. 2 табл,Крезацин - биологически активное вещество, по химической природе являющееся трис-(2-оксиэтил)аммоний-метилфеноксиа - цетат Относится к классу трис-(2-оксиэтил)аммониевых солей ароксиуксусных кислот. По механизму действия имитирует природные ауксины, обладая, однако, гораздо более высокой активностью. Крезацин применяется в животноводстве для регулирования метаболических процессов в организме животных.Способ иллюстрируется следующими примерами.Для экспериментальной проверки питательной среды готовят шесть сред. Опыты с культивированием пыльников риса сорта Старт и гибрида Г 1 ВНИИриса 1588 хМна средах проводят в трехкратной повторности. е р 1. Пыльники риса культивиеде, известной ранее, которуюледующей технологии, 1678256В 800 мл дистиллированной воды добавляют 8000 мг агар-агара и путем кипячения готовят агаровый гель. Затем в него добавляют ингредиенты, мас. о: Са(ИОз)гх х 4 НгО 0,8500; КИОз 2,4403; МдЯ 04 7 НгО 0,0736; ИН 4 МОз 2,4496; КНгР 04 0,7323; КС 0,1676; 2 пЯ 04 7 НгО 0,0097; НзВОз 0,0051; МпЯ 04 4 НгО 0,0110; К 0,0119; ИаЭДТА 0,0981; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0689; тиамин НС 0,0002; пиридоксин НС 0,0005; никотиновая кислота 0,0016; глицин 0,0049; агар-агар 19,5867; сахароза 73,4978, вещество-дедифференциатор - 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-0) 0,0002. Общий объем приготовляемой среды доводят до 1000 мл добавлением дистиллированной воды. Затем среду тщательно перемешивают. Растворами НС и йаОН устанавливают рН среды 5,8,Горячую питательную среду разливают в 16 мм пробирки, которые закрывают ватно-марлевыми пробками и автоклавируют при 1 атм 25 мин. Пыльники риса высаживают нэ застывшую агаризованную поверхность в стерильных условиях, Пробирки с пыльниками померцают в термостат при 28 С, через 25 - 30 дней подсчитывают количество пыльников, давших каллус (табл .2).П р и м е р 2, Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в предлагаемой среде, мас.%, следующее; Са(ИОз)г 4 НгО 0,9935; ККОз 3,1001; МдЯ 04 х х 7 НгО 0,0701; КН 4 ИОз 2,0974; КНгРО 4 0,7102; КС 0,1438; 2 пЯ 04 7 НгО 0,0089; НЗВОз 0,0023; МпЯ 04 4 НгО 0,0197; К 3 0,0061; йэЭДТА 0,2064; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0811: тиамин НС 0,0008; пиридоксин НС 0,0008; никотиновая кислота 0,0019; глицин 0,0060; сахароза 75,1344; агар-агар 17,4162; 2,4- дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин 0,0001; сухого вещества в растворе 6,0 мас. О, остальное - вода.П р и м е р 3. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в предлагаемой среде, мас. , следующее, Са(ИОз)г 4 НгО 0,9741; КЙОз 3,0287; МдЯ 04 х х 7 НгО 0,0829; МН 4 МОз 2,1434; КНгР 04 0,7226: КС 0,1698; 2 пЯ 04 7 НгО О,9036; НЗВОз 0,0047; МпЯ 04 4 НгО 0,0120; К 3 0,0013; МаЭДТА 0,0920; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0651; тиамин НС 0,00005, пиридоксин НС 0,0005; никотиновая кислота 0,0018; глицин 0,0039; сахароза 74,1995; агар-агар 18,4938;2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 0,00005; крезацин 0,0002; сухого вещества в растворе 6,1 мас. Оо, остальное - вора.П р и м е р 4. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов .дпредлагаемой среде, мас,о, следующее: Са(ИОз)г 4 НгО 0,8499; КИОз 2,4594; МдЯ 04 7 НгО 0,0857; МН 4 МОз 2,4493; КНгР 04 0,7348; КС 0,1592; 2 пЯ 04 7 НгО 0,0039; НзВОз 0,0039; М и Я 04 4 НгО 0,01 08; К, 0,0019; КаЭДТА 0,0936; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0681; тиамин НС 0,0002; пиридоксин НС 0,0002; никотиновая кислота 0,0012; глицин 0,0049; сахароза 73,4797; агар-агар 19,5928; 2,4- дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0001; 5 10 крезацин 0,0004; сухого вещества в растворе 6,15 мас. О, остальное - вода,П р и м е р 5, Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но .содержание компонентов в предлагаемой среде, мас.о, следующее: Сэ(ИОз)г 0,7659; КИОз 2,1047; МдЯ 04 7 НгО 0,1001; Н 4 МОз 2,6594; КНгР 04 0,8324; КС 0,1490; 2 пЯО 4 7 НгО 0,0049; НзВОз 0,0028; 15 20 МпЯ 04 4 НгО 0,0101; КЛ 0,0022; МаЭДТА 0,1110; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0606; тиамин НС 0,0006; пиридоксин. НС 0,0003, никотиновая кислота 0,0010; глицин 0,0057; сахароза 72,9353; агар-агар 20,2431; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин 0,0006; сухого вещества в растворе 6,4 мас, О, остальное - вода П р и м е р 6, Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в 30 предлагаемой среде, мас.,ь, следующее: Са(ЙОз)г 0,7591; КМОэ 2,0984; МдЯ 04 7 НгО 0,1011; МН 4 КОз 2,6708; КНгРО 4 0,8397; КС 0,0001, пиридоксин НС 0,0001, никотиновая кислота 0,0008; глицин 0,0037; сахароза 71,3474; агар-агар 21,7241; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин 0,0008; сухого вещества в растворе 6,6 мас. О, остальное - вода.Результаты экспериментов представлены в табл. 2, где а - минимальное количествокомпонента в питательной среде, б - оптимальное, в - максимальное (согласно табл.1) 40 45 Как следует из экспериментальных данных, использование оптимального варианта питательной смеси обеспечивает увеличение каллусогенеза относительно известного способа на 67,5 О, Последнее очень важно, так как количество пыльников отдельных гибридов и других форм, получаемых в еди-. ничных экземплярах, недостаточно. Кроме того, повышение частоты каллусогенеза позволяет уменьшить обьем приготовления среды, количество повторностей, лабораторной техники и рабсчего времени. 50 55 0,2799; 2 пЯ 04 7 НгО 0,0034; НзВОз 0,0051;35 МпЯ 04 4 НгО 0,0099; КЛ 0,0010; йэЭДТА 0,0902; ЕеЯ 04 7 НгО 0,0642; тиамин НС1678256 Формула изобретенияПитательная среда для культивирования пыльников риса, включающая азотнокислый кальций, азотнокислый калий, сернокислый магний, азотнокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, хлористый калий. сернокислый цинк, 5 борную кислоту, сернокислый марганец, иодистый калий, этилендиамин-тетрацитат натрия, сернокислое железо, тиамин, пиридоксин, никотиновую кислоту, глицин, саха розу, агар-агар и 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту, дистиллированную воду, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышения интенсивности образования каллуса из пыльников, она дополнительно содержит креэацин 15 при следующем соотношении компонентов, мас.:Азотнокислый кальций 0,7659 - 0,9741 Азотнокислый калий 2,1047-3,0287 Сернокислый магний 0,0829-0,1001 20 Азотнокислый аммоний 2,1434-2,6594 Фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,7226-0,8324 )(лористый калий 0,1490-0,1698 Сернокислый цинк 0,0036 - 0,0049 Борная кислота 0,0028-0,0047 Сернокислый марганец 0,0101-0,0120 Иодистый калий 0,0013 - 0,0022 Этилендиамин-тетрацитат натрия0,0920-0,1110 Сернокислое железо 0,0651-0,0707 Тиамин 0,00095-0,0006 0,0003-0, 0005 0,0010 - 0,0018 0,0039-0,0057 72,9353-74,1995 18,4938-20,2431 ЯиридоксинНикотиновая кислотаГлицинСахарозаАгар-агар2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота 0,00005-0,0002Креэацин 0,002-0,0006Дистиллированная вода Остальное Таблица 1 Количество компонентов, мас,7. Компоненты оптималь- максимальминимальное ное ное 0,0006 0,0002 0,00040,0001Остальное 0,00020,00005 Са(ИО)4 Н ОКБОзМАМБО 7 НОН,йО,КН РОКС 1ЕпЯО 4 7 НОэ 3МпБО 4 Я ОК 3Ма ЭДТАГеЯО 7 Н, ОТиаминПиридоксинНикотиновая кислота ГлицинСахарозаАгар-агарДедифференциаторы: Крезацин2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота Дистиллированная вода 0,76592, 10470,08292, 14340,72260,1490О, 00360,00280,00010,00130,09200,06510,00005О, 0003О, 0010О, 003972,935318,4938 0,8499 2,45940,0857 2,4493 О,348 0,1592 0,0039 0,0039 0,0108 О, 0019 О, 0936 0,0681 0,0002 0,0002 О, 0012 О, 004973,4797 19,5928 0,9741 3,0287 0,1001 2,6594 0,8324 О, 1698 0,0049 0,0047 0,0120 0,0022 0,1110 0,0707 0,0006 0,0005 0,0018 0,0057 74, 1995 20,24311678256 Т а б л и ц а 2 Питательная среда Гибрид риса РВНИИР 1588 хМСорт риса Старт образоваликаллус,шт образоваликаллус,штпосаженопыльнипосаженопыльников,шт. ков, шт. ИзвестнаяПредлагаемаяб) (содержание крезацина 0,0001 мас.Ж)абвб (содержание крезацина 0,0008 мас.%) 270 570 19 270 270 270 270 48 52 57 54 570 570 570 570 29 31 34 33 50. 270 570 Составитель В,ДемкинТвхред М. Моргентэл Корректор Л.Бескид Редактор Е,Пэпп Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ю М Заказ 3154 Тираж 357 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5