Способ диагностики хронической внутриутробной гипоксии плода

.о для диагностики внгипоксии плода, С целточности и ускорения ени опр посо ости деляют сиддис насачения акти еро тазы в эритрацитах упления родов, рассчитывают мг и 1 г гемоглобина соотнно и при одновременном сних на ветств в ении этихнормы диагнвнутриутробменение сповремя постаза и говыси до 957 показателеи остируют хр ную гипокси соба позвол новки диаг ть точность тносительно ССР985.ЕСКОЙ ническуюплода. Прит сократить оза в 2 рапредс ения го с целью оса который снижае ленин активнос эата добавляют форм в соотнош 1:О, 25:О, 15. ени оглоои области нической в опреде точно тности к кл едицины, в ча еринатологии,овано для диа нутриутробной Целью изобр)ть испольи м ничес остики хр ипоксик пл ения явля од тся ускоспособа. ания смеси е пе повышение точнос б осуществляют с ениеСп гемоглобин ый отделяю я при 120 5 мин, Акт сцветной н н выпадает путем 0 8 идующим оторовани ностьосадоц еб разводят ой водой гемолизат тиллирова ую часть раз биди определ 200 и затем азы.,Треть естве 0част ределеэто содержания гемолизату ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЬГГИЯУРИ ГК.Т СССР(56) Авторское свидетельство С Р 1142103, кл. А 61 В 10/00, 1 (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОЙИЧ ВНУТРИУТРОБНОЙ ГИ 11 ОКСИИ ПЛОДА (57) Изобретение относится к медици не, в частности к клинической перинатологии, и может быть использоваобретение относится разом.у рожениц до родов берут 1 мп крови на исследование активности супероксиддисмутазы (СОД) и ката- лазы. Эритроциты отделяют от плазмы и промывают 3-4 раза изотоническим раствором при повторном центрифугировании в течение 15 мин при 6000 я и 4 С.Отмытые эритроциты гемолизируют трис-НС 1 5 мМ (рН 7,4) в соотношении 1:10. В гемолизате определяют активность СОД и каталазы. Для этоВ процесс течение 15 ми в осадок, к центрифугир 40 С в течени определяют в ной жидкостиВтор и СОД, к части гемогэтанол (95 ) и хлоронии соответственно т активность ката 16512150,024 н. раствора аммиака и степеньинтенсивности окраски измеряют наспектрсфотометре при длине волны540 нм.Об активности СОД судят по снижению скорости процесса восстановления нитросинего тетразолия в присутствии НАДН и Феназинметасульдата.Состав инкубационной смеси: 1 мкм10ЕДТА, 1 мг желатины, 0,407 мм нитросинего тетразолия, 1,8 мкм ФеназинметасульФата и 0,1 мл 1 мМраствора НАДН. Обпнй объем доводится до 3 мл Фосйатным буФе1)ом 0,07 М (рН 7,8), В контрольнойпробе определяют степень восстановления нитросинего тетразолия послеинкубации в течение 10 мин при 2022 С в темноте и в аэробных условиях, 20В опытной пробе после добавления в инкубационную смесь 0,04-006 мп надосадочной жидкости определяют в техже условиях степень снижения процессавосстановления нитросинего тетразолия.25Линейная зависимость между объемомдобавленной надосадочной жидкостии скоростью Аерментативной реакциинаблюдалась при торможении процессавосстановления нитросинего тетразолия 30от 25." до 75 ь. Измерение степениокраски опытной и контрольной пробпроводили на спектроФотометре придлине волны 540 нм,Степень ингибирования определяютпо Формуле35Еж-ЕоТ=- -- 100,Егде Т - процент ингибирования процесса восстановления нитро 40синего тетразолия,Е - оптическая плотность раствоКра контрольной пробы;Е - оптическая плотность раствоора опытной группы.Активность СОД выражают в условных единицах. 503 ингибирования про-цесса восстановления нитросинего тетразолия по сравнению с контрольной пробой принято считать одной условной50единицейТА= ---100-Тфгде А - количество условных единицактивности Фермента в опытной пробе,55Т - процент ингибирования процесса восстановления нитросинеготетразолия СОД.(10 ммоль)Вода бидистиллированнаяГемолизат в 0,05 0,05 0,90 Оь 93 0,03 разведении1;2000 0,02 0,02Снижение оптической плотности в опытной пробе измеряли против контроля каждые 30 с в течение 3 мин при комнатной температуре на СФ(дгпна волны 230 нм)Скорость реакции линейная в первые 3-4 мик, При расчете активности каталазы использовали среднее значение изменения оптической плотности пробы за каждую минуту в течение 3 мин,Е-Е )+(Ел-Е)+(Е-Е з)Ср 3 где Е - начальный показатель отсчета; Активность Фермента выражают в условных единицах, отнесенных либо намг гемоглобина, либо на 1 мп эритроцитарной суспензии с учетом разведения гемолизата по Формулам0 02667А 0 14 АА, =- ---- ; АЕнЧ фЧгде А - активность Фермента,усл.ед./мг гемоглобина;А - активность Фермента,усл. ед./мл эритроцитов;Ч - объем добавленного супернатанта;Е н - оптическая плотность гемоглобина в растворе гемоли-.зата;0,14 - постоянный коэФФициент разведения гемолизата;0,02667 - постоянный коэФФициент,выведенный с учетом разведения гемолизата и постоянногокоэФФициента экстинции(190,5) 1 г гемоглобина в кювете 3 см при длине волны540 нм,Об активности каталазы в гемолизате эритроцитов судили по убью НОв тканях за 1 мин при длине волны230 нм,Состав инкубационной смеси, мл:Контроль- Опытнаяная проба проба(ПОЛ) у матери своевременно диагностировали внутриутробную хроническуюгипоксию плода по обнаруженному снижению активности ферментов. Последующие наблюдения подтвердили диагнозгипоксии плода, Новорожденный ребенокродился в состоянии асфиксии с оценкой по шкале Апгар 6/8 (патологииродового акта не отмечено), Активность Аерментов в пуповинной кровитакже низкая - 0,93 усл.ед./мг гемоглобина для СОД и 7,00 10 межд.ед./ггемоглобина для каталязы. В первыедни состояние ребенка средней тяжестик груди приложен на 4 день, отмечалась типичная патологическая неврологическая симптоматика, возникающаяу детей, перенесших длительную внутриутробную гикопсию,Таким образом, нормальные показатели ПОЛ в этом случае не позволилиустачовить диагноз внутриутробной хронической гипоксии плода, Изменения активности СОД и кяталазы эритроцитовточно отражали состояние плода и новорожценного.П р и м е р 2. Мать К. и ее новорожденный, Из анамнеза известно, чтобеременность у матери протекала благоприятноВ родах развилась первичнаяслабость родовой деятельности, проводилась родостимуляция, В эритроцнтахматери выявлено повышение скоростиПОЛ, при этом величина активности СОД1,79 усл. ед./мг гемоглобина и величина активности катялазы 21,0 к10 мелд,ед,/г гемоглобина соответ. фствовали нормальным показателям. Ребенок родился в удовлетворительном состоянии, с оценкой по шкале Апгар 9/10,в первые сутки приложен к груди. Придальнейшем наблюдении состояние оставалось вполне удовлетворительным,и на 6 день жизни он выписан из родильного дома домой. Активность СОДи каталазы в пуповинной крови не отличались от контрольной группы(1,28 усл, ед./мг гемоглобина и 12,0 Кх 104 межц,ед./г гемоглобина, соответственно), Нормальный уровень активности антиокислительных Ферментовхарактеризовал удовлетворительное сос"тояние плода и новорожденного, в товремя, как ускорение процессов ПОЛне отражало истинного его состояния. 16512 15 коэдхЬициент пересчета490 5 10( - - --- ), складывающийся0,071из учета разведения эритроцитов, молярного коэффициента экстинкции (190,5) 1 г гемоглобина в кювете 3 смз придлине волны 540 нм и коэАициенте молярнои экстинкции 35Н О (0071).При одновременном снижении активности СОД и каталазы в эритроцитах крови матери диагностируют хроническую внутриутробную гипоксию плода 40 (уровень активности Ферментов СОД и каталазы в эритроцитах у здоровых беременнь 1 х соответственно1,78 усл.ед./мг гемоглобина и 19 14 кФФ к 10 межд.ед. /г гемоглобина. 45 П р и м е р 1. Мать Б. и ее новорожденный. У матери по данным анамнеза с 30 недель беременности развился поздний токсикоз. Скорость перекис ного окисления липидов (по уровню диенкетонов и конъюгированных диенов) в эритроцитах не превышала величин в контрольной группе женщин. Активность СОД и каталазы была снижена(0,92 усл.ед,/мг гемоглобина и 13, 1 к55 я 10 межд.ед,/г гемоглобина соответственно). Несмотря на нормальные вели,чины перекисного окисления липидов Е., ЕЕ - оптические плотности пробы3через 1,2,и 3 мин с началаизмерения.Активность Аермента выражали в международных единицах по количеству разрушенного субстрата в ммолях и относили к количеству эритроцитарной взвеси в миллилитрах гемоглобина в граммах:Е мА= - - -0,071где А - количество ммоль Н 0, разрушенной в среднем зя 1 минпри взаимодействии с 0,02 млгемолизата;0,071 - коэициент молярной экстинкции НгОг.Ес 10 268 3 Е со 10А1 0,071Е дб где А - активность катялазы, межд.ед,/мл эритроцитарной взвеси;А - активность каталязы,межц,ед./г гемоглобина;268,3 кк 10 4 Применение способа в медицинскойпрактике позволит сократить время ди1651215 щ и й с я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, вэритроцитах крови рожениц опредепяютсодержание супероксиддисмутазы и каталазы и при одновременном сниженииэтих показателей относительно нормыдиагностируют хроническую внутриутробьую гипоксию плода. агностики в 2 раза и диагностироватьхроническую внутриутробную гипоксиюплода с точностью до 957,Формула изобретения Способ диагностики хроническойвнутриутробной гипоксии плода путемисследования крови, о т л и ч а ю -Составитель Ч. Ьалеева Редактор Н. Бобкова Техред М,Морг ентал Корректор М. СамборскаяЗаказ 1604 Тираж 419 ПодписноеВНЫИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производствсн и-цзаатеп ьскцш комбинатПатент", г .Ужгород ул . Гагарина, 101