Способ распознавания генотипов риса

(9 у И БРЕТЕНИ ОП ательскийямса Об иден- электромина,79, Мб,ЕНОТИАи От ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(56) Савич И.М., Перуанский Ю.В.тификации сортообразцов риса пофоретическим спектрам пролаВестник с/х науки Казахстана, 19(54) СПОСОБ РАСПОЗНАВАНИЯПОВ РИСА Изобретение относится к биотехнологии, в частности к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными учреждениями при изучении коллекции исходного материала, создания и паспортизации сортов риса.Целью изобретения является упрощение анализа и повышение его точности и надежности.Способ состоит в том, что проламины и определенная часть глютелинов (запасных белков эндосперма зерна) риса извлекается спиртовой мочевиной при нагревании, после электрофореза в полиакриламидном геле выявляются трихлоруксусной кислотой белковые компоненты, определяют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) каждого компонента по реперному компоненту В 50 и на основе спектра составляют белковую формулу сорта (генотипа) риса,П р и м е р 1. Зерна сортообраэца рисаст В размалывают до тонкого порошка, вешивают 500 мг муки, заливают ее 3 мл(57) Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве в селекционно-генетических исследованиях. Целью изобретения является упрощение анализа, повышение его точности и надежности. Способ состоит в том, что предлагают новые режимы экстракции запасных белков, изменяют процесс получения электрофореграмм и осуществляют их анализ, группируя компоненты в субфракции относительного реперного компонента В 5 о, после чего составляют белковые формулы, специфические для каждого сор-тообразцэ, 2 табл. 700 ь-ного этанола, содержащего 2 М моче- вины, перемешивают и инкубируют смесь 1/2 ч при комнатной температуре, а затем в течение 1 ч при 60 С. После центрифугирования при 10000 ц в течение 15 мин надоса. дочную жидкость собирают и упаривают до 1/8 - 1/10 объема, добавляют сахарозу до концентрации 200 ь и используют для электрофореза.Полиакриламидный гель, содержащий 7,5акриламидэ, 0,3 М уксусной кислоты и 8 М мочевины, полимеризуют в стеклянных трубках размером 110 х 5 мм с использованием в качестве катализирующей системы; сернокислого закисного железа, аскорбиновой кислоты и пероксида водорода. На трубку наносят 50 - 100 мкл раствора белка и электрофорез ведут первые 30 мин при силе тока 2 мА на трубку, а затем 1 ч при сиЛе тока 4 мА на трубку, После завершения электрофореза гели извлекают из трубки и помещают в пробирки с 10-ным раствором трихлоруксусной кислоты. Через 30 мин появляются белые полосы белковых компо1604274 Таблица 1 С б ак ии ОбразеЦ А 40 . 50 40 50 40 50 В 12 12 12 Аист ВАист А (ВС 5) Аист А (ВС 6) Прикубанский В Прикубанский А (ВС 5) Прикубанский А(ВС 6)Пластик В ПластикА(ВС 6) ВНИИР 1390 В ВНИИР 1390 А (ВС 5) ВНИИР 1390 А ВС 6 15 15 15 16 16 17 19; 21 22 58 58 58 55 55 55 21 27 40 50 29 58 55 50.40 58 55 40 43 40 40 50 50 50 50 55 55 55 55 58 58 58 58 11 12 40 50 40 50 29 58 55 58 55 нентов, замеряют ОЭП их и составляют белковые формулы. Спектр делится на ясно различимые 4 субфракции: А(ОЭП 0-38); В (39- 59); С(60 - 76) и Р (77 - 100).Исследования также показали, что при концентрации мочевины ниже 1,5 М и этанола ниже 65 ф число компонентов снижается из-за ухудшения извлечения запасного белка и соответственно уменьшается разрешающая способность способа (так для сорта Аист В остаются только наиболее интенсивные компоненты субфракции В). При использовании этанола в концентрации выше .,75 и мочевины выше 2,5 М наблюдается частичная клейстеризация крахмала эндосперма, что впоследствии препятствует эффективному концентрированию белкового раствора. В связи с этим белковые компоненты теряют четкость, а наиболее близко- расположенные сливаются в одна целое, нарушая электрофоретическую картину.При этом их количество также снижается. В этой связи признано целесообразным использовать мочевину в концентрации 1,5 - 2,5 М в растворе этанола 65 - 756-ной концентрации (табл.2).П р и м е р ы 2 - 11 осуществляютаналогично, но в исследования вовлечены другие сортообразцы. Результаты представлены в табл,1.Предлагаемый способ надежен, объективен, экспрессен, позволяет распознавать и паспортизировать близкие по происхождению генотипы риса, закладывать в памятьЭВМ белковые формулы этих генотипов,5 формула изобретения Способ распознавания генотипов риса, включающий экстракцию из зерна запасных белков, их электрофоретическое 10 разделение и анализ полученных электрофореграмм, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения анализа и повышения его точности и надежности, экстракцию белков проводят 1,5-2,5 М мочевиной, раство ренной в 65 - 750/,-ном этаноле принагревании, электрофоретическое разделение белков осуществляют в цилиндрических гелях, при этом в качестве каталитической системы полимеризации геля используют 20 закисное сернокислое железо, аскорбиновую кислоту и пероксид водорода, электрофореграммы получают путем фиксации белковых компонентов трихлоруксусной кислотой без дополнительной окраски и в 25 результате анализа электрофореграмм проводят распознавание генотипов, определяя относительную электрофоретическую подвижность каждого компонента относител ьно реперного В 5 о. группируя их в 30 субфракции в соответствии с их мобильностью, с последующим составлением специфических для генотипов белковых формул.(ВСь)ВНИИР1390 АВСв Сб ак ии Продолжение табл 1