Способ отбора эндоспермовых мутантов кукурузы

,170119 цз А 01 Н 1/ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ арственный соединения и Т.С.РодиВ. Приклад, т, 20,ОВЫХ иотехнолоиям зернобиотехнолониям зерноользовано в тбора эндосздания перс- озяйственно ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ОТБОРА ЭНДОСПМУТАНТОВ КУКУРУЗЫ(57) Изобретение относится кгии, к генетическим исследован Изобретение относится к гии, к генетическим исследов вых культур и может быть ис селекционной практике для о пермовых мутантов с целью со пективных форм кукурузы с ценными признаками. Одним из перспективных направлений улучшения биологической ценности зерна кукурузы является создание новых мутантных форм с применением генетических приемов. Селекционно-генетические исследования, включающие использование целого набора генов, которые улучшают отдельные показатели биологической ценности зерна, создают проблему разработки эффективных способов отбора эндоспермовых культур и может быть использовано в селекционной практике для отбора эндоспермовых мутантов для создания перспективных форм кукурузы с хозяйственно ценными признаками, Целью изобретения является ускорение отбора и повышение его достоверности. Способ состоит в том, что из образца кукурузы исходной и мутантной форм экстрагируют зеины, получают спектр экстракта в ультрафиолетовой области, по которому находят значение оптической плотности в максимумах при 285-295 и 310 - 315 нм, и рассчитывают соотношение оптических плотностей, по уменьшению которого идентифицируют мутанты. 1 табл. вых мутантов с комплексом хозяиственно ценных признаков.Целью изобретения является ускорение отбора и повышение его достоверности.Способ осуществляется следующим образом.Размалывают зерно кукурузы с различным генотипом и экстракцией 70;4 эталоном выделяют зеины. Проводят очистку раствора от примесей центрифугированием и фильтрованием. Раствор белкового препарата анализируют путем получения спектра в ультрафиолетовой области. По полученному спектру находят значение оптической плотности в максимумах при 205-295 и 310- 315 нм и рассчитывают соотношение оптических плотностей. По полученным ланным проводят отбор эндоспермовых мутантов, 1701194которые характеризуются меньшими знэче"ниями показателя по сравнению с исходными аналогами.Определение проводят параллельно,используя спектры поглощения зеинов ис- Бходных и мутантных форм кукурузы линияА 619).П р и м е р 1 вины экстрагируют пятикратным обьемом 70 эталона и обезжиренной эфиром муки кукурузы после 10отделения водо- и солерастворимых белков.Экстракцию проводят параллельно для исходного и исследуемого образца в течение1 ч при комнат-ОЙ темпеозтур"-, Растворбелка Очищэ ат от примесел центрифугированием в течение 5 мин при 3500 об/мин ифильтруют Измерл 1 О 1 УФ-спектр в Области220 - 350 нм на спектрофотометре СпекордМв 0,2 см кварцевой кювете, По полученному спектру находят значения оптической плотности в максимумах при 285-295 20и 310 - 315 нм и рассчитывают соотношениеоптических плотностей для сравнения.Примеры 2, 3 проводят аналогично примеру 1, при этом исследование проводят надругих генотипах кукурузы. 25Результаты Определения срзвнит 8 льного показателя для зерна кукурузы с различным генотипом приведены в таблице(дз н н ые статистически досто верн ы),полученные результаты свидетельсгвуют о том, что способ позволяет провестиотбор эндоспермовых мутаций ах/ут,зц 2/зц 2, а также двойных мутантов типао 2/о 2, зц 2/еш 2, о 2/О 2, ах/уух по достоверно меньшему значению отношения 0 /02 в 35УФ-спектрах зеинов в сравнении с обычныМИ ЗНЭЛОГЭМИ,Интервал значений двух максимумов285 - 295 и 310 - 315 нм) установлен при исследовании препаратов, выделенных из зернз кукурузы с различным генотипом. Посл 8устаноьления положения максимумов анализ можно проводить путем определениязначений оптической плотности при фиксированных длинах волн без получения спектра в УФ-области.Использование настоящего способа всравнении с известным позволяет упростить и ускорить проведение отбора путемисключения длительных и трудоемких операций, дорогостоящих реактивов. Для проведения отбора требуется не более 0,5 г муки. При этом исчерпывающая экстракция зеинов не менее трех раз) не является обязательной и для анализа. достаточно провести одну экстракцию 70 эталоном. Исключаются операции по лиофилизации белкового препарата и определению концентрации белка, так как полученный раствор зеина непосредственно после проведения экстракции сразу анализируется путем получения спектра поглощения, характер которого не зависит От концентрации препарата, В связи с тем, что количество образцов не ограничивается аппаратурными возможностями метода, резко возрастает производительность при массовых анализах селекционного материала, Пои этом раствор белкового препарата после анализа остается в неизменном виде и поэтому может быть использован для получения других биохимических характеристик, что важно при исследовании селекционных образцов с ограниченным выходом зерна.Повышение достоверности анализа достигается за счет использования сравнительного критерия, позволяющего однозначно установить различия для эндоспермовых мутантов.Применение настоящего способа дает возможность проводить отбор не только по отдельным показателям улучшения качества зерна кукурузы в результате эндоспермовых мутаций, но и по комплексу хозяйственно ценных признаков,Формула изобретения Способ отбора эндоспермовых мутантов кукурузы, включающий зкстракцию зеинов,у исходных и мутантных форм и идентификацию эндоспермовых мутантов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения отбора и повышения его достоверности, у полученного экстракта выявляют спектр поглощения в ультрафиолетовой Области, определяют по,нему значения оптической плотности в максимумах, сравнивают отношения значений оптической плотности в максимуме при 285-295 нм к значениям при 310 - 315 нм и идентификацию проводят по уменьшению данного отношения у мутантов по сравнениюс исходными формами.1701194 Характеристика УФ-спектров зеинов, выделенных из зерна кукурузы Составитель В.Демкинлипенко Техред М,Моргентал Корректор Л.Патай Редакто каз 4485 Тираж Подписное 8 НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10