Способ получения растений-регенерантов картофеля из протопластов

(71) Отделение клеточной биологии и инжнерии Института ботаники АН УССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ КАРТОФЕЛЯ ИЗ ПРОТОПЛАСТОВ(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода, Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательную среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п.ф-лы, 2 табл. матическая гибри иев: Наукова дум Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, клеток, а также протопластов, и может быть использовано для нужд генетики и селекции в сельском хозяйстве.Целью изобретения является ускорениеоцесса получения растений-регенеранв и увеличение их выхода. ФСпособ состоит в том, что выделенные из растений протопласты помещают в твердую питательную среду. В качестве питательной среды используют, например, среду ЯЮ Через 7 - 10 дней твердую питательную среду с образовавшимися колониями переносят в жидкую среду СТ 1, Культивируют колонии на свету при постоянном перемешивании. Через 7 - 10 дней питательную среду СТ 1 меняют на жидкую регенерационную среду СТ 2, Обновление среды СТ 2 производят каждые 7 - 8 дней, Из индивидуальных колоний, возникших в результате деления протопластов, при таких условиях кул ьтивирпитательной среде черемируются побеги,Использование твердой питательной среды в начальный период процесса существенно повышает эффективность деления клеток, Первые деления их наблюдают уже на 2 - 3-й день культивирования. Последующее использование жидкой питательной среды при постоянном перемешивании позволяет ресуспендировать твердую среду и высвободить образовавшиеся клеточные колонии. Дальнейшее использование жидких питательных сред позволяет существенно сократить процесс регенерации растений (до 15 - 20 дней) и устранить значительные трудности, которые имеют место при использовании твердых питательных сред в связи с пересадкой колоний.П р и м е р 1. Берут жидкую питательную среду для протопластов, например, ЗВ(стерилизуют фильтрованием) и добавляют в колбу с простерилизованной агарозой. КоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ования на указанноиз 15 - 20 дней фор- Ьа1604275 нечная концентрация агарозы в среде 0,6%. Среду подогревают до полного растворения агарозы, Свежевыделенные протопласты картофеля сорта "Зарево" помещают в капле питательной среды в чашку Петри, Постоянно перемешивая, добавляют 10 - 15 мл теплой (36 - 40 С) питательной среды, содержащей агарозу. Конечная концентрация протопластов 10 - 10 шт. в 1 мл среды.Чашку Петри закрывают парафилмом, Культивируют на рассеянном свету (100 - 400 лк) при 24 - 25 С. Через 7 - 10 дней твердую питательную среду, содержащую . клеточные колонйи из 3 - 5 клеток, разрезают на блоки и помещают в жидкую среду СТ 2 в колбах. Культивируют колонии на свегу (2000 лк) при постоянном перемешивании, Через 7 - 8 дней среду СТ 1 меняют на жидкую среду СТ 2,. которую обновляют каждые 7 - 8 дней, причем после 10 - 14 дней культивирования колоний на этой среде наблюдают процесс регенерации растений, Колонии с образовавшимися побегами или отдельные побеги переносят для укоренения на среду МС без фитогормонов (табл,1),П р и м е р 2. Все приемы и последовательность действий аналогичны примеру 1, но используют среду с конечным содержанием агарозы 0,8% . Таким образом осуществляют регенерацию растений картофеля из протопластов.Предлагаемый способ позволяет сократить время регенерации растений картОфеля из протопластов примерно в 2 раза и Таблица 1 Со е жание компонентов, мг/л, в с е е Компоненты СТ 1 СТ 2 133,7595022018585Вь 267,5 1900 440 370 170 МС 267,5 1900 440 370 170 МС 100 100 250 1 100 100 5 0,5 2 0,05 40 100 0,5 0,5100101 МакроэлементыЙН 4 СКМОзСаСг 2 Н 20М 9304 7 НгОКНОРР 04,МикроэлементыВитамины, гормоны и другиеМезоинозитГлютаминКсилозаНикотиновая кислотаФолиевая кислотаГлицинБиотинАденин сульфатГидролизат каэеина61Во увеличить выход растений-ре гене рантов, Сокращаются также затраты труда и средств в связи с исключением операции пересадки клеточных колоний на твердые 5 среды (табл.2). Формула изобретения 1. Способ получения растений-регене рантов картофеля из протопластов, включающий выделение протопластов, их культивирование на питательной среде и последующую регенерацию; о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью ускорения про цесса получения растений-регенерантов иувеличения их выхода, культивирование йротопластоа осуществляют путем помещенияих в твердую,агариаованную питательную среду с последующим переносом 20 образовавшихся из них клеточных колонийв жидкую питательную среду, а регенерацию осуществляют в жидкой питательной среде.2, Способ по п.1; о т л и ч а ю щ и й с я 25 тем, что в качестве твердой агаризованнойсреды используют среду РЙ, в качестве жидкой - СТ 1, а регенерацию осуществляют на среде.СТ 2,3. Способ по л.1 о т л и ч а ю щ и й с я 30 тем, что.культивирование клеточных колоний в жидкой питательной среде осуществляют при постоянном перемешивании.4. Способпоп.1,отличающийсятем, что в твердую питательную среду до бл=яют агарозу в концентрации 0,6 - 0,8%.1604275 Продолжение табл.1 аблиц актор А,Мотыль ГКНТ ССС Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 10 Заказ 3406 ВНИИПИ Го оставитель В,Демкинехред М,Моргентэл Корректор А.Обруч Тираж 417 Подписноетвенного комитета по изобретениям и открытиям п 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5