Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных

)5 А 61 К 39/00, 3 Я 58325/30(54) СПОСОБ С ИММУНИТЕТА К В (57) Изобретен гии, в частнос образования сп к вирусч грипп ретения - повы крови животных.06,87 ,02,90, Бюл. У 5 учно-исследоватеидемиологии и мик ии инсти иологии ут эпим, Па 72) Ф стера(088.8)Е.К,М.: Медиц 3: 612, 017 ,Н Алех вакцин вируса рюшинн(56) ЛазареваСтимуляторы имна, 1985.АвторскоеУ 540640, кл. нно амм ри итета. я 1 повкг, Исоба и тцс 0 м видетельство ССС А 6 К 39/18, 19 мого сп обеспеч в 3 5-4 ивает и,3 разатабл,лем. 3 8 Изобретение отнии, в частности к сится к вирусоло способу стимуляцифического имму ппа у животных, - повышение тит по бразования сп а к вирусу гр ль изобретени циикитеЦра а 961выпа животных.ют следующим об тител в кров особ осущест н ли са бацилл14461агаре (при тем ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ПНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ аэом,Подопытному животному одномоменто с гриппозной вакциной внутрибрюшино вводят полисахарид Вас 111 цв шцсх 1 а 1 пояця в количестве 1,0-5,0 мкг/кг,Используемый иммуностимулятор полихарид Вшцс 11 а 1 пояцв получают из-.естным способом. Культуру слизистыхВ.шцс 1 аддповця (штамм ВКМВвыращивают на мясо-пептонномМПА), содержащем 4-5 Х глюкозы,пературе 37-39 С в течениео ТИМУЛЯЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ИРУСУ ГРИППА У ЖИВОТН 11 Х ие относится к вирусолоти к способу стимуляции ецифического иммунитета а у животных, Цель иэобшение титра антител вДля этого подопытному временно с инактивирой, приготовленной изгриппа А/385/80-К, вводят полисахарид я в количестве 1,0- пользование предлагаеммуниэации животных овышение титра антител по сравнению с контро- Ж 4 ч, Выделившуюся слизь смывают верхности агара изотоническим раст м хлорида натрия и центрифугируют 600 об/мин в течение 30 мин, К надочной жидкости прибавляют 3 объема ного этилового спирта. Через 24 вший осадок отделяют, депротеиируют и диализируют против дистил ванной воды,Для осуществления предлагаемого способа иммунизации 1 мкг полисахарида В.шцс 11 а 1 повця растворяют в 10 мл физиологического раствора (из расчета на 40 животных), смешивают с 10 мл гриппозной вакцины и эту смес вводят по 0,4 мл на мышь одним шприцом внутрибрюшинно, однократно, Вакцина инактивированная, элюатно-хроматографическая, .приготовленная из штамма вируса гриппа НН А/385/80-К, высокое количество гемагглютинина20 мкг/мл. Доза полисахарида В.йцс 11 ая 1 позцз составляет 10 мкг/кг. На14-е сутки животных обескровливают,сыворотки крови обрабатывают нейраминидазой нехолерного вибриона (уд, ак-"тивность 5,6 ед/мг) и затем исследуютв реакции торможения гемагглютинации(РТГА). Об иммуностимулирующей активности полисахарида В,шцс 11 аядпозцз судят по содержанию антител в сывороткахкрови животных,П р и м е р 1. Полисахарид В.шцсх 1 ад 1 позцз растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кгвеса животного и вводят по 0,2 млэтого раствора мышам белым нелинейнымвесом 16-18 г внутрибрюшинно совместно одним шприцом с 0,2 мл вакциныинактивированной элюатно-хроматограФической, приготовленной иэ штамма вируса гриппа А/385/80-К (20 мкг/мл погемагглютинину), Контрольной группе 25таких же мышей вводят по 0,2 мл тойже вакцины, но вместо полисахарида0,2 мл физиологического раствора. Через 14 сут мышей кровопускают, сыво.ротки исследуют в РТГА, В контроле . 30титр антител в 4,3 раза ниже, чем вопыте с использованием предлагаемогопрепарата.П р и м е р 2.Полисахарид В.шцсь. -1 ая 1 позцз растворяют в Физиологическом растворе из расчета 10,0 мкг/кги вводят по 0,2 мл мышам весом 16-18 гвнутрибрюшинио совместно с .0,2 млгриппозной вакцины А/385/80-К. Контроль и кровопускание проводят по примеру 1, В контроле титр антител в2,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.П р и м е р 3. Полисахарид В.шцсПа 1 позцз растворяют в Физиологическом растворе чз расчета 0,1 мкг/кги вводят по 0,2 мл мышам весом 1 б 18 г внутрибрюшинно совместно с 0,2 млгриппозной вакцины А/385/80-К. Контроль и кровопускание проводят по при меру 1, В контроле титр антител в 2,1раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.Результаты опытов обрабатывают методом вариационной статистики. Иимуностимулирующее действие полисахарида В.шцсПад 1 позцз приведено в табл,1 Из табл,1 следует, что эффективными дозами полисахарида являются 1,0 и 5,0 мкг/кг, С увеличением дозы препарата его иммуностимулирующая активность снижается и при дозах 500 мкг/кг различие в среднегеометрическом титре антител статистическинедостоверно, Снижение оптимальной дозы препарата на 1-2 порядка не влияет на иммуногенез, и содержание антител в сыворотках крови животных,.получивших 0,01 мкг/кг полисахарида, не превышает контрольного уровня.П р и м е р 4, Полисахарид В,шцсНад 1 позцз растворяют в физиологическом растворе иэ расчета 1,0,мкг/кги вводят по 0,2 мл в смеси с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-К мышам весом 16-18 г; первой группе - внутрибрюшинно, второй - интраназально, Че рез 14 сут мышей кровопускают и ста-. вят РТГА, В первой группе животныхпри внутрибрюшинном введении препа"рата и вакцины титр антител в 2,5 раза вьппе, чем при ннтранаэальном спосо+ бе введения.П р и м е р 5, Полисахарид В,шцсх 1 ад 1 позцз растворяют в фиэиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16- 18 г внутрибрюшинно первой группе од: новременно с 0,2 мл гриппозной вакци-. ны штамма А/385-80-К, второй группе эа 24 ч до введения той же вакцины Третью (контрольную) группу мышей иммунизируют той же вакциной, но вместо полисахарида смешивают с 0,2 мл Физиологического раствора. Через 14 сут мышей обескровливают,сыворотки исследуют в РТГА. В первой группеживотных прирост титров антител посравнению с контролем составляет 4,2 во второй 1,6, т,е, введение полисахарида. В.шцс 11 адЫозцз за 24 ч до введения гриппозной вакцины дает незначительный иммуностимулирующий эффект по сравнению с одновременным введением полисахарида и вакцины,П р и м е р 6. Полисахарид В,шц -. сд 1 адьпозцз растворяют в Физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16- 18 г внутрибрюшинно первой группе одновременно с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-К, второй группе через 24 ч после введения той же вакцины. Контроль и обескровливание осуществляют по примеру 5, Результаты РТГА,поСреднегеометрический Количест" Кратность Уровеньприроста значимосДоза полисахарида, . в мкг/кг . в о жи-.отных,титр антител, 1 ое 2 итрантите т 3,0 4,3 5,4(0,1 20 25 30 35 30 25 0 010,11,0 4,3 3,5 2,3 1,9 1,4 4,5 4,2 3,8 3,3 1 О 500,0 Не вводи- ли Таблица Опыт Уровень значимости Р Кратно прирос титров Группа ремя ввеения ПС а поКоличесто живот ных шт,лисахарида, мкг/кг 0,001 10 ОдновременноЗа 24 чдо введения вакцины 2 0 6 10 казали, что в первой группе мышейсодержание титров антител в крови в4,2 раза больше, чем в контроле, Вовторой группе содержание титров антител такое же, как в контроле, т.е.введение полисахарида В.шцс 1 адпояцячерез 24 ч после введения вакцины невлияет на иммуногенез,В табл,2 приведена зависимость иммуностимулирующей активности полисахарида В,шцсПадпояця от временивведения его животным,Предлагаемый в качестве иммуностимулятора полисахарид при проверке намышах оказался нетоксичным. Это подтверждается следующим опытом,Полисахарид В.шцс 1 аддпояця растворяют в физиологическом растворе ивводйт мышам весом 16-18 г внутрибрюшинно однократно по 0,5 мл в дозах25125,и 250 мг/кг, В течение 14 сутведут учет гибели животных,Определение токсичности полиса,харида В,шцс 11 ар 1 пояця и результатыопыта приведены в табл,ЗИз табл.З видно, что к 14-м суткам из 20 мышей в 1-й и 2-й группах погибли по 1 мыши, что составляет 40831 б0,57, а в 3-й группе - 2 мыши, т,е,1%, Если принять во внимание, что.вконтрольной группе погибла 1 мышь, то 5их гибель в опытных группах можно считать не связанной с действием полисахарида, Учитывая, что гибель животных ни в одной иэ групп не достигла507, а также то, что испытуемые дозыпревышают эффективную дозу препарата.в несколько тысяч раэ, можно сделатьвывод, что предлагаемый препарат -нетоксичен. 15 формула изобретения Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, включающий введение иммунизи рующего агента совместно с полисахарццом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения титра антител в крови, в качестве иммунизирующего агента используют инактивированную 25 вакцину, приготовленную из штамма вируса гриппа А/80-К, из полисахаридов используют Васд 11 ця шцс 1 а.пояця ВКМВв количестве 1,0- 5,0 мкг/кг, а введение осуществляют 30 внутрибрюшинно.Таблица 1(0,001 4,2 1,0 ОдновременноЧерез 24 чпосле введения вакцины 1,0 1,0 10 3Заказ 1011 Тираж 563 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раувская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,101 1 25 125 250 0