Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных

(22) Заявлено 18.12,75 (21)2300791/15 . У 1 М Кп 3 с присоединением заявки Ио(23) Приоритет А 61 К 39/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 30, 01. 83 Р,М,Алехин, В.Н.Гущин, Г.Ф.Денисенко, А.М.Косиков, И.А. Логинов, Ю.А.Малахов, А.П.Самохвалов, И.Г.Серегин, В.С.Соловьева и А.Н.Шуплико 7 Авторыизобретения(71 ) Заявитель Всесоюзный государс вен ь й наУчно-контРольный . институт ветеринарных препаратов(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХИзобретение относится к ветерина- рии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики лептоспироза животных.5Известен способ изготовления поливалентной феноловой вакцины для профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зве рей, включающий выращивание лепто-. спир б серотипов на вывороточной среде в баллонах, смешивание выращенных культур, консервирование Фе-нолом, расфасовку, проверку стерильности, безвредности, активности,Известный способ, однако, не позволяет получить в вакцине достаточную концентрацию специфических анти-, генов, что вынуждает, вводить животным большие дозы вакцины: крупному рогатому скоту .- до 25 мл, свиньямдо .17 мл. Продолжительность создаваемого иммунитета у крупного рогатого скота незначительна и составляет 1-2 мес. при однократном .и 3-8 мес. при двухкратном введении вакцины. 25. Цель изобретения - получение вакцины, вызывающей длительный иммунитет"высокой напряженности.Это достигается тем, что в качестве исходных штаммов берут штаммы .З 0 лептоспир: ВГНКИ, ВГНКИ, ВГИКИ-З, ВГНКИ, ВГНКИ, ВГНКИ-б, а осаждение и инактивацию лептоспир проводят одновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в количестве 3,0-3,3 с последующей нейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке из лептоспирозных антигенов и сывороточного бедка питательной среды и добавлением к нему адьюванта, например, гидро- окиси алюминия в количестве 32-35.В процессе изготовления вакцины не происходит снижения иммуногенной и антигенной активности лептоспир благодаря использованию трихлоруксусной кислоты, взятой в оптимальных для воздействия на лептоспиры и лептоспирозные антигены количествах - 3,0-3,3Исследованиями установлено, что применение трихлоруксусной кислоты в других концентрациях приводила к ,снижению иммуногенной активности вакцины.Не менее важным Фактором для получения вакцины, вызывающей у животных длительный иммунитет высокой напряженности и продолжительности(до 6 мес. у молодняка и 12 мес, у взрослых животных), является введение адьюванта, состоящего из 32- 35 гидроокиси алюминия, и наличия 6-8 осажденного сывороточного белка питательной среды в составе вакцины.Способ изготовления концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироза заключается в следующем.Берут штампы лептоспир, выделенные от сельскохозяйственных животных, селекционированные по признаку максимальной иммуногенной и антигенной активности и относящиеся к шести серологическим группам: 10 1. 1.ерй 05 рга дг 1 рройурЬ 05 аВГНКИ 2. , 1 сегоЬаеаоггЬад 1 ае ВГНКИ 3. 1 сап 1 с 01 а ВГНКИ204. . Сага 55 оч 1 ВГНКИ 5. 1 ЬеЬдоп 1 а 015 ВГНКИ 6. 1 роп 10 па ВГНКИ -б,Культуры проверяют на чистоту и интенсивность роста, определяют количество микробных тел в 1 мл сре Штаммы выращивают на сывороточной среде в реакторах или баллонах, 25смешивают, осаждают и инактивируюттрихлоруксусной кислотой в количестве 3,0-3,3, отделяют осадок отнадосадочной жидкости, кислоту нейтрализуют водным раствором аммиака, 30добавляют гидроокись алюминия до35-ной концентрации, консервируютмертиолятом, расфасовывают, контролируют на стерильнбсть, безвредность,активность, 33Штампы лептоспир выделены от сельскохозяйственных животных и селекционированы по признаку максимальной иммуногенной и антигенной активности. Штаммы являются вакцинными и 40по широте иммуногенного спектра обеспечивают изготовление препарата,профилактирующего заболевание сельскохозяйственных и промысловых животных в любой точке Советского Союзан в большинстве регионов мира.Штаммы депонированы во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветпрепаратов МСХ СССРи сохраняются на сывороточной среде при -190 ОС,При осуществлении способа изготовления концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироэаживотных штаммы ВГНКИ, ВГНКИ,вгнки-з, вгики, вгнки 5, вгнки-б 55выращивают в отдельных реакторах.(объем 200-250 л) или бутылях (объем 20 л ) на сывороточной среде в течение 5-10 сут, при 27-28 С до макосимального накопления бактериаль- б 0ной массы. ды путем подсчета под микроскопом при увеличении в 400 раз. Культуры, содержащие 50 млн лептоспир и более в 1 мл среды, смешивают с таким расчетом, чтобы в реакторе-смесителе содержалось по 20 лептоспир серологических групп роеопа, сага 55 оч 1, дг 1 ррой 1 рЬ 05 а ЬеЬ 00111 ад 15 и по 10 лептоспир сап 1 со 1 а, 1 ссегоЬаеаогГЬад 1 ае.К смеси культур приливают при постоянном перемешивании насыщенный раствор трихлоруксусной кислоты до создания ее концентрации в среде 3,0- 3,3.Обработанную кислотой культуру отстаивают 1 ч, надосадочную жидкость деконтируют, оставшийся осадок центрифигируют на центрифуге с угловым или горизонтальным ротором при 3000 об/мин в течение 5 мин, а на центрифуге сепараторного типа - при скорости вращения ротора 10- 15 тыс. об/мин (производительность 50 л/ч).Центрифугат, представляющий собой плотную маэеобразную массу, собирают и обрабатывают 10-ным водным раствором аммиака, нейтрализующим трихлоруксусную кислоту. Аммиак приливают при постоянном перемешивании до установления рН 7,4-7,6. Добавляют дистиллированную воду иэ такого расчета, чтобы осадок был сгущен в 25-30 раз по сравнению с исходной культурой.К полученной массе добавляют гидроксал до 33-35-ной концентрации и мертиолят 1:10000, смесь тщательно перемешивают и выдерживают 5 сут.при 18-22 С.Вакцину расфасовывают в 50- 100-миллитровые флаконы.Вакцину проверяют на стерильность и безвредность общепринятыми методами.Антигенные свойства вакцИны контролируют на пяти кроликах весом 2,0-2,5 кг, которым вводят внутримышечно однократно по 0,3 мл вакцины. Через 25 дней у привитых кроликов берут кровь и исследуют по реакции микроагглютинации и лизиса с лептоспирами, входящими в состав вакцины. Вакцину считают активной по антигенным свойствам, если титр антител составляет 1:800 и выше к летоспирам серологических групп роп 10 па Йдгд 550 ч 1) дгРР 011 РП 05 ау ЛеЬд 0111 а 015 и не менее чем 11200 по отношению к лептоспирам 1 ссегоЬаещоггЬад 1 ае и сап 1 соаИммуногенные свойства вакцин проверяют на 30 золотистых хомяках 1,5-2-месячного возраста, 15 из которых вводят вакцину однократно555664 Редактор Е. ХейФиц Техред М, Коштура Корректор Л. Бокшан Заказ 10825/10 Тираж 711, Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий 113035, москва, Ж, Раушская наб., д.4/5филиал ППП "Патентф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 внутримышечно по 0,05 мл. Через 25 дней заражают контрольных и привитых хомяков оттитрованной смертельной дозой лептоспир трех серологических групп.Вакцину считают активной при вы- живанин не менее 12 опытных н гибели 9 контрольных хомяков.Вакцину вводят однократно внутриьаыечно в дозе от 0,3 до 2 мл вместо 17-25 мл принятых для существующей вакцины. Она вырабатывает иммунитет высокой напряженности продолжительностью до б мес. у молодняка и до 12 мес. у взрослых животных.Срок годности вакцины 12 мес. со дня изготовления.Способ получения концентрирован-. ной поливалентной вакцины сокращает затраты биофабричного производства, а применение вакцины исключает гибель животных от лептоспироза, аборты в неблагополучных стадах, лептоспироносительство и затраты на его лечение, утилизацию продуктов убоя,формула-изобретения1. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных, включающий подбор штаммовлептсспир, выращивание их на жидкой питательной сывороточной среде,осаждение, инактивацию и консервирование их, о т л и ч а И щ и й с ятем, что, с целью создания вакцины,вызывающей длительный иммунитет высокой напряженности, в качестве исходных штаьеюов берут штампы лептоспнр ВГНКИ, ВГНКИ, ВГНКИ-З,ВГНКИ, ВГНКИ, ВГНКИ-б, а осаждение и инактивацию лептоспир проводятодновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в ко личестве 3,0-3,3 с последующейнейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке иэ лептоспирозных анантигенов и сывороточного белкапитательной среды и добавлением к 20 нему адьюванта, например, гидроокиси алюминия в количестве 32-352. Способ по п. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что нейтрализациютрихлоруксусной кислоты в осадке 25 иэ лептоспироэных антигенов и сывороточного белка питательной средыпроводят, например, водным раствооом аммиака.