Способ определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19) (1) 01 11 ЗЗ/ ОПИ ИЕ ИЗОБ РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К логической пракработе. Гель - деления состоятерийной инфекется следующимтитру- роловой 5/28"1 90. Бюл льный н учно-исследовапидемиологии ирственный медиститу во ротку полис те о титутсова, О.И.Ивченктылева3 (088.8) РЯдуарный первом эритроц едуищих возраст рядах ищими16,риме з 30 внос натоксин- езультато 7) оценивают ния. Налитнога тор- стационарторможе чие в можени ной фаа примунный во ротке э кв ивалсвидетельствует муноротожетальн ответа, ный имого иммун эквивалентном твет, 2 табл,ич Изобретение отнмедипине, преимущиагностике. ниц и далее, Через 30 мин во все ряд добавляют ди 5 терийный антигенныйэритроцитарный диагностикум (ДАЭД).Учет результатов проводят через 1,5- 2 ч, регистрируя проявления гемагглю тинации. Для оценки эффекта торможения можно использовать количественный показатель - индекс торможения (ИТ), который вычисляют по отношению дозы антигена в РТПГА к кратности снижени титра, о сравнении с титром в РПГА, ИТ дробные, меньшие единицы (1/2, 1/4, 1/8), присущи эквивалентному торможению, Белые числа - 1,2,4,8 на тся к биолог твенно к имм ние м.спытуемую сывороольких рядах поли с лунками или труютловойках, 3осят а е не а ем, и -тии оби вначиная с в то ро го ,ген последователь ницы, в 3-й 4 ед дио во ивы,ядй 8 ГОСУДАРСТВЕННЬ)Й НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(21).400544 (22) 03,01 (46) 07.01 (71) 11 ентра тельский ин Свердловскии цинский инс (72) Н,Н,Ба и Г,И.Корос (53) 615.37 Приказ ИЗ РСФСР Р 575,СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯ 11 ИЯ ИТЕТА ПРИ ЛИФТЕ РИИН 011 ИНФЕКБИИ Изобретение, относится к биоломедицине, преимущественно к имиагностике. Способ оценки сывов серологических реакциях моыт 1 ь использован для дифференций лабораторной диагностики пер-го и вторичного иммунного ответаелью изобретения является повыше точности определения состояниянитета при дифтерийной инфекции.пособ осуществляют следующим обв клин иче ск он и эп иде ми тике, экспериментальной , повыше ние точ нос ти оп ре ния иммунитета при диР ции. Способ осуществля образом: испытуемую сь ют в нескольких рядах пластины с лунками и к добавляют дифтерийный диагностикум, а в посл сыворотку соединяют с дозами анатоксина (нап 32 единицы 11 НД) и чере диагностикум дибтерииныный эритроцитарный. Учепроизводят через 1,5-2по эквивалентностиблюдяются при неэквивалентном торможении антигена 18 М-аггтителами,Для оценки этого положения былипроведены опыты с выделением фракций1 яМ и 1 яС из гиперюгмунных сыворотоклошадей, которые провели методом бесколоночной хроматографии с помощьюДЕАЕ целлюлозы,Полученные фракции были испытаны:в РПГА и РТПГА (табл,. 1),яко у гп.гунных к дифтерии лиц тор.гожение носит характер эквивалентного.В условиях гглановой иммунизации и иммунолагического контроля за состоянием иммунитета населения посредством только РПГА была оценена структура напряженности иммунитета к дифтерии у разных контингентов (табл, 2), Па основании анализа клинических 1материалов и результатов исследования сывороток больных дифтерией, ангиной, бакте рионосителей токсигенныхкоринебяктерий,ци 1 те рии, а также здоровых лиц, проведенных однократно и в фиксированные сроки и в динамике, были приняты следующие критерии опен ки состояния иммунитета при дифтерийной инфекции.антитела не обнаруживаются в первые пять дней болезни или к 5-му появлягтся в низких титрах (1:10), а к 25 2-3 - й неделе титр повьппается до 1:80- 1:320 и в дальнейшем возрастает, в РТПГА торможение неэквивалентно (индексы равны целым числам - рассматривается как реализация первичного ответа;антитела до 5 сут обнаруживаются в низких титрах и к 7-10,цню титры их возрастают до 1:320-1:1280 в :2560, в РТПГА титры снижаются эквивалентно либо наблюдается смена зоны эквивалентного торможения неэквивалентным индексы торможения от дробных переходят к целым; такие результаты свой;ственны заболеваниям ранее иммунных 40 ,с проявлением вторичного ответа;антитела на первой неделе заболе - вания у пациента с ЛОР-патологией, выделяющего токсигенные коринебакте - рии дифтерии, могут быть в значительных титрах, которые повьппаится в динамике относительно нерезко; в таких случаях результаты ТРПГА сходны с та - ковыми у иммунных бактерионосителей, не имеющих клинических признаков болезни; индексы торможения в обоих си 50 . туациях дробные, отражают преобладание антител 1 яС клас.са;антитела у больных с Л 01-патологией, не связанной с возбудителем дифтерии, имеют, как правило, стябиль надю динамику титров, некоторые колебания пяраиммунитетного характера на фоне инфекции могут регистрироваться,Из табл. 2 видно, что больньге дифтерией и больные ангиной не имели существенных различий по структуре титров ан тител. Лишь у ба к те рионос ителей заметна доля лиц с высокими титрами антител (около 807) . Однако на основании результатов только РПГА высказать какие-либо обоснованные суждения об иммунном ответе не представляется возможным.П р и м е р 1. Больной П, Клинический диагноз: дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя, Сыворотка взята на 1-й неделе болезни.Титр антител в РПГА 1:32, В РТГА с2 единицами антигена титр снизилсядо 1:16, с 4 единицами остался 1:16,с 8 единицами снизился до 1:8 и с16 единицами - до 1:4. Соответственно ИТ составили 1; ,; 2 и 2, что сви -детельствует о неэквивялентном торможении,Полученный в РПГА титр (1 г 32) не противоречит суждению о диг 1 терийной инфекции и, вероятно, первичному характеру ответа, Такой ответ не содержит больше информации, в частности, о качестве антител. Параллельная постановка РТПГА по предлагаемому способу позволяет считать, что в сыворотке содержатся антитела к дифтерий- ному токсину (анатоксину), требующие для своей нейтрализации более высоких доз антигена, чем это нужно для нейтрализации 1 яС-антител, ИТ - целые числа. Эти результаты однократного исследования на первой неделе болезни позволяют установить признак первичного иммунного ответа у заболевшего.П р и м е р ,2. Больная М. Клинический диагноз: дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя, Сыворотка взята на б-й день. Титр антител в РПГА 1:256, В РТ 1 гГА с 2 единицами антигена титр снизипся до 1:16, 15344с 4 ос 1 ался 1:1 Ь, с 8 остался 1:16,с 1 Ь 1:16, с 32 1:16. Соответственно ИТ составил 1/8; 1/4; 1/2; 1 и 2,Титр сыворотки в РПГА 1:256 напервои неделе болезни может свидеч5тельствовать о реализации вторичногоответа у заболевшего. В пользу этогоэквивалентное торможение антител малыми дозамч антигена (2,4 и 8), Однако РТПГА с более высокими дозами антигена позволяет обнаружить присутствие и таких антител, торможение которых нуждается в более высоких дозахантигена. Такое сочетание результатовРПГА и РТПГА с разными дозами антигена позволяет охарактеризовать иммунный статус у заболевшего, обладавшего иммунологической памятью,Предлагаемый способ определения 20состояния иммунитета при дифтерийнойинфекции имеет следующие преимущества перед известным: повышается точность определения состояния иммунитета, важного для диагностики (на первой неделе у обследованнык можно установить объективные признаки первичного иммунного ответа или вторичного);полученные в первые 5 дней результа 1ты могут иметь важное значение для ЗОопределенной части больных (ведение,лечение, иммунотерапия); определениетипа иммунного ответа к концу первойначалу второй недели опережает возможности известных способов; раннеевыявление первичных дифтерий в очагах35ипи контингентах риска повышает эшфективность эпидемиологического надзора, Объективное контролированиесостояния иммунитета посредством пред- олагаемого способа необходимо дляоценки эффективности иммунопрофилактики (препараты, дозы, схемы и т,п.),что не достигается известными способами, более зависимыми от динамических обследований. Способ пригоден как элемент дифференциальной диагностики дифтерии и сходных с нею заболеваний другой этиологии, бактерионосительства токсигенных коринебактерий дифтерии. На такой основе могут быть усовершенствованы профилактические и противоэпидемические мероприятия,.Способ обеспечен всеми необходимыми средствами для применения в условиях практической лаборатории: коммерческими диагностическими препаратами для РПГА и РТПГА, стандартным анатоксином (полуфабрикат вакцин), стандартным антитоксином, отечественными пластинками для серологических реакций, не требует сложного оборудования или высокой квалификации персонала.Способ экономичен и может бытьосуществлен при наличии малых объемовсыворотки (0,1-0,2 мл).Формула изобретенияСпособ определения состояния им"мунитета при дифтерийной инфекции путем добавления к исследуемой сыворотке дифтерийного антигенного эритроцитарного диагностикума с последующимвыявлением специфических антител вреакции пассивной гемагглютинации,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения точности способа, дополнительно ставят реакцию торможения пассивной гемагглютинации с возрастающими дозами дифтерийного анатоксина, сравнивают результаты реакций между собой и по неэквивалентному снижению титров антител определяют состояние первичного иммунногоответа организма, а по эквивалентномуопределяют стационарную фазу вторичного иммунного ответа,8Таблица 1 1534401 Доза анатоксина МНД Тест Титры антител воАрак циях ндексы тормо"ения для(а) 8 С(б) ГАПГА квивалентного (б) и неэквивалентного (а) тормо ексь жения,2 Табл Распределение по наличию антите титрах, 7.руппы обледованных оличеств Менее 1:20 1;20-40 1180-160 1:320 иболее ольные 31,25 25 12,5 16 диФте риеиБольные ан 40,0 36,0 24,6 48,0 257 20,0 15,1 3,8 79,3 Составитель Г.Крюковаактор В.Петраш Техред М,Дидык Корректо кмар Тираж 50 39 одп исн открытиям при ГКНТ СССР