Способ определения содержания тяжелых металлов в крови

,14,(54) СПОСОБ ОПРЕ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ (57) Изобретение ти медицины, а им ределения тяжелых ДЕРЖАНИЯ ДЕЛЕНИЯ С В КРОВИ относит енно к м металло е. Спосо остью ися к обласетодам опв в биолоб позволягическом материа ет с высокой точ чувствител ной кислоты, затдо 1 мл, раздельбсорбционного анодержание эле доводят растметодом атомиза определяо в супернатан мент й ение оне умми аждрмуат ли по едел ку, за щают в льник ния полн ерат ател ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО ВТОРСКОМ,К СВИДЕТЕЛЬСТВ(5 б) Ас,аЬя, Меътз 1 ес, 1975У 4, р.103-104. Изобретение относится к медицине, а именно к методам определения элементов в биологических пробах.Цель изобретения - расширение спектра определяемых металлов за счет дополнительного определения ко- бальта, никеля, меди, цинка, железа и свинца при одновременном повышении точности и чувствительности способа.Способ осуществляется следующим образом.Забирают из пальца 0,1-0,2 мл крови, 2-кратно замораживают при 14 С и оттаивают пробы, Последова" тельно разводят образцы в 10-.50 раз, центрифугируют и отделяют образовавшийся осадок, обрабатывают его при нагревании 0,5 мп концентрированнойностью определять в малом объемекрови, взятой при обычном клиническом обследовании из пальа, кобальт,никель, медь, цинк, железо, свинеци кадмий, т.е. биогенные элементы,играющие большую роль в микроэлементном статусе организма человека. Образцы крови массой 0,1-0,2 мл подвергают двухкратному замораживайию и оттаиванию, после пятидесятикратногоразведения центрифугируют, в супернатате проводят элементометрию вприсутствии 0,005-0,017. аскорбиновойкислоты. Дополнительно отделяют осадок, разлагают его в 0,5 мл концентрированной азотной кислоты, проводятэлементометрию также в присутствии0,1 Я аскорбиновой кислоты. Результаты суммируют, 5 табл,те и растворе с добавл аскорбиновой кислоты дцентрации 0,005-0,010ют полученные показате емому элементу,м е р. Пробу крови в объеменосят в центрийужную пробирывают резиновой пробкой,помеамораживатель бытового холо(140,5 С), после замора-.пробы извлекают, подвергаототтаиванию при комнатной темвновь помещают в заморажидля повторного замораживания,3 149 После оттаивания проб их разводят деоннзированной водой в 50 раз, т.е. Доводят объем до 5 мл. Центрифугироь раннем отделяют раствор от осадка, переносят.его в другую пробирку,добавляют 0,25 мл 0,1 Е-ной аскорбиновой кислоты, вновь доводят объем до 5 мл (в случае отсутствия осадка исследуют только супернатант - раствор 1), К осадку приливают 0,5 мл онцентрированной НЯОэ и помещают на одяную баню до полного его раэложея (примерно в течение 1.ч). Охлажают раствор, добавляют 0,05 мл ,17-ной аскорбиновой кислоты, довоят объем до 1 мл, получают растор 2.Проводят раздельную элементомет 1 ию растворов, результаты суммируютнаходят концентрацию каждого металМа в крови (С) по формуле; С = -- мкг/мл Я Ч фф 75694и дают лишь незначительное увеличение для кобальта, свинца и кадмия.Использование меньших концентраций,а именно 0,005-0,013 позволяет повысить чувствительность определенияв 1,1-10,4 раза и, кроме того, способствует снижению мешающего влияния,связанного с введением аскорбиновойкислоты, меньше 0,005 Х не позволяютдостичь увеличения чувствительностиопределения (табл.4).Чувствительность анализа по пред ложенному способу в 1,1-1,7 раза выше, чем по известному, точность выше на 16-243 (табл.5).Таким образом, наряду с повышениием точности и чувствительности спосо ба изобретение позволяет расширитьспектр определяемых металлов за счет дополнительного определения 6 элементов.25 Формула изобретениягде Ц, - суммарное содержание металла, мкг;Ч - объем пробы крови, мл.Аналитические характеристики опре деляемых элементов и температурно временные режимы определения приве;. йены в табл. 1 и 2.В табл. 3 приведены результаты определения элементов в пробе и данные об увеличении открытия элементов а счет дополнительного исследования осадка; Дополнительное открытие фоставляет от 4,8 до 1 1,17.Двукратное замораживание позволя 1 т дополнительно увеличить открытие 40 лемента в 1,13-3,5 раза по сравнению с однократным,Дальнейшее увеличение стадий заМораживания до 3 не приводит к положительному эФФекту. 45 Добавки 1 У.-ной аскорбиновой кислогы не приводят к увеличению чувствигельности при определении никеля Способ определения содержания тяжелых металлов в крови путем забора крови, ее замораживания и оттаивания с последующим разведением образца и определением методом атомно-абсорбционного анализа, о т л н ч а ю - щ и й с я тем, что, с, целью расширения спектра определяемых металлов за счет дополнительного определения кобальта, никеля, меди, цинка, железа, свинца, при одновременном повышении точности и чувствительности способа, замораживание и оттаивание осуществляют двукратно, затем центрифугируют, осадок дополнительно обрабатывают концентрированной азотной кислотой, в надосадочную жидкость и в растворенный осадок добавляют аскорбиновую кислоту до конечной концентрации 0,005-0,017., раздельно проводят атомно-абсорбционный анализ в обеих пробах, а результат суммируют для каждого металла.6Таблица 1497569 Оптимальный Пределобнаружения, г СпектЭлементы Наиболее диапазон определяемыхсодержаний,нг чувствительная ральнаяширинашели,нм линия,нм 5 1 О 2 210 " 2 10110 110 з 2 1 О 240,7 232,0 324,1 213,9 248,3228,8 283,3. 0,2 0,04-0,07 0,2 0,09-0,13 0,7 0,03-0,04 0,7 0,001-0,003 0,2 0,02-0,03 0,7 0,001-0,003 0,7 0,02-0,04 1-162-201-81-80,5-10Оф 02-Оф 20,4-4 КобальтНикельМедьЦинкЖелезоКадмийСвинец П р и м е ч а н и е, Атомно-абсорбционный анализ образцовпроведен с использованием приборовСи РегКдп - Е 2 шегс печью НСА. Таблица 2 АтомизацияР Элементы Высушивание Озоление Время,с20 100 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100 20 1 00 61,5 900 22,5 1200 67,5 900 67,5 400 67,5 300 22,5 1200 67,5 25,0 Кобальт Никель Медь Цинк Кадмий Железо Свинец Таблица 3 Суммарное содержание в пробесреднее Содержание, мкг, в растворе(0,8+0,1) 10 ф (0,11+0,01) 10- 0,04+0,01 (0,020,001) 1 О- (0,2 + 0,01)1 О0,84+0,12 0,0810,01 0,83 9,6 0,23 4,8 5,4 7,4 0,02 10,0 02 11182,2 10,0 10,8 7,4 КобальтНикельМедьКадмийСвинецЖелезоЦинк Чувствительностьобнаружения нг Скорость подъема температуры,С/с 20 20 10 10 10 10 10 2550 2700 2550 1900 1900 2500 2100 Увеличение открытия элемента в пробе 31497569 Т а блица 4 Данные о чувствительности определениямикроэлементов в крови.в присутствииаскорбиновой кислоты еличение чувствительности при добавлениикорбиновой кислоты (число раз) Исследуемая среда обальт Никель Медь Свинец Кадмий Разбавлен-. ная кровь 1,48 10,4 2,33 2,18 1 у 39 6,7 2,48 2,33 0,005 2,68 0,01 2,53 Кислотныйрастворосадка 1,26 1,73 2,5 2,1 1,1 1,81 2,86 1,9 0,005 1,33 0,01 1,27 Т а блица 5Результаты определения тяжелых металлов,Ф образцах крови известным и предлагаемымспособами Содержание в пробеМ + п (и = 5),мкг/мл Элемент ПовьппеУв еличение ние точности,% чувстви- тельности (раз) по способу- по предлапрототипу гаемомуспособу КадмийКобальтНикель 44,23,6 77,5 0,17+0,02 890,1 03+0,008 124 1,131, 161,56 МедьСвинецЖелезо Цинк 2,0 Ю,120,30+0,02 8914,1 11,8+0,6 1,10 о 1, 42 1,70 1,50 П р и м е ч а н и е. В описании прототипа приводится только определениекадмия. Составитель Н.ГуляеваТехред Л,Олийнык Корректор М,Пожо,Редактор Л.Пчолинская Заказ 4439/47 Тираж 789 Подпысное г. ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул, Гагарина,101 Концентрация аскорбиновой кис лоты 7 21,5+1,90,09+0,01,0,0460,0041,010,040,18+0,0277+3,56,4+0,5 100661684