Образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей

(57) Изобретени иологи Для пдля виэ образец оптическ взвесей лозу 0,2 0,01 и б Нитроцел и пло арственный меодержи-7,2 и добавля АЛЬНОГО ОПРЕДЕОСТИ БАКТЕГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Кишиневский госдицинский институт(54) ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ВИЗЛЕНИЯ ОПТИЧЕСКОЙ ПЛОРИЙНЫХ ВЗВЕСЕЙ относится к микровышения стабильности ального определения ости бактерийныхмас,Е: нитроцеллюмертиолят 0,0066 раствор остальное, ри нагревании растрастворе едкого каедяную уксусную кисцентрифугируют, реосфатном буфере рН т мертиолят. 3 табл.1 О 15 20 30 35 40 45 50 55 ниц. 1 34Изобретение относится к микробиологии, а именно оптической стандартизации бактерийных нэвесей, исполь -зуемых в бактериологической и иммунологической практике,Пелью изобретения является повьпнение стабильности образца.указанная цель достигается тем,что используют суспенэию из частицнитроцеллюлозы, взвешенных в фосфатно-буферном растворе с рН 7,0-7,2при следующем соотношении ингредиентов, мас,7.: Нитроцеллюлоза 025-035Мертиолят 0,0066-0,01фосфатно-буферныйраствор ОстальноеПриготовление и использование образца на 1 О единиц.Приготовление суспензии частиц нитроцеллюлоэы размерами 1-3 мкм. В пробирку помещают 30 мг нитроцеллюлоэы в виде пленки, добавляют 1 мл 37-ного раствора едкого калия. Пробирку подогревают на пламени горелки до бурного вскипания щелочи и полного растворения пластинки нитроцеллюлозы с образованием желтоватой окраски. Содержимое пробирки нейтрализуют путем добавления ледяной уксусной кислоты до помутнения за счет образования суспензии из частиц нитроцеллюлозы с размерами 1-3 мкм.Размеры частиц измеряются с помощью окулярного и объективного микрометров, установленных в фазово-контрастном микроскопе. Полученную суспензию трехкратно отмывают с помощью центрифугирования в фосфатно-буферном растворе при 1000 об/мин в течение 15 мин, Образовавшийся осадок объемом 0,1 мл ресуспендируют в 0,9 мл фосфатно-буферного раствора с рН 7,2, получая такиМ образом 17-ную суспензию частиц нитроцеллюлозыПриготовление образца на 10 едиВ пробирку-эталон (ампулу) диаметром 0,8 см вносят мл 17-ной суспензии частиц нитроцеллюлозы размерами 1-3 мкм на фосфатно-буферном растворе, 2-3 капли мертиолята (1:100) и добавляют до 10,0 мл фосфатно-буферного раствора с рН 7,0-7,2 получая таким образом мутность, равную эталонному стеклянному стандарту на10 единиц, что подтверждается на фотоэлектрокалориметре (Ф.3 К). Пробирку-эталон (ампулу) запаивают или закрывают пробкой из химически нейтральной резины с последующим парафинированием и используют для стандартизации бактерийных вэвесей.Оптическую стандартизацию проводят путем внесения н стандартную пробирку или близкую к ней по диаметру и толщине стенок 1-2 мл смыва 18 24-часовой стандартизуемой микробной культуры и прилинания небольших но точно учитываемых порций физиологического раствора, сравнивая при этом мутность опытной пробирки со стандартом мутности. Сравнение степени мутности в опытной и эталонной (предлагаемой) пробирках производят невооруженным глазом при хорошем дневномрассеянном освещении подложив подобе пробирки общеизвестную шрифтовуютаблицу, Перед каждым определениемобразец взбалтывают путем переворачивания пробирки до полного суспенэирования осадка. Хранят при обычной температуре,С помощью испытуемого образца и стеклянного стандарта мутности проведена оптическая стандартизация 107 культур эшерихий, шигелл, сальмонелл, коклюшных микробов для следующих целей: посева в жидкие и на плотные питательные среды (56 культур); определения антибиотикоустойчиности (17 культур); постановки иммунологических реакций (26 культур); приготовления вакцинных препаратов (8 культур). При этом концентрации микробов, определенные с помощью испытуемого образца и стеклянного стандарта мутности, при их последующем сравнении на ФЭК-е оказались идентичными (1007-ное совпадение результатов).Мутность бактериальных взвесей, определяемая с помощью предлагаемого образца, выражается в международных единицах мутности. Мутность образца на 10 единиц эквивалентна 10 международным единицам мутности, которые соответствуют следующим концентрациям микробов; 935 млн/мл микробов кишечной группы; 11 млрд/мин микробов коклюшной группы; 1,65 млрд/мл бруцеллезных микробов;1346675 10 Сроки наблюденияес 1 год 2 года 3 года 5 лет Образец 6 м 10 лет Бактериальный Химический Стеклянный Предлагаемый П р и м е ч а н и е: "-" "+" - агрегация частиц суспензии,Таблица При- Ингредиенты, мг(7)мерНитроцеллюлоза Мертиолят Фосфатно-буферный раствор 30 (0,30) 0,83 (00083=001) 9900 99,69 25 (0,25) 1,0 (001) 9950 99,74 35 (0,35) О,бб (0,0066=0,01) 9850 99,64 30 (0,30) О,бб (0,0066=0,01) 9900 99,69 30 (0,30) 1,0 (0,01) 9900 99,69 2,2 млрд/мл холерных вибрионов;495 млрд/мл туляремийных микробов.Наблюдения во времени показывают стабильность сохранения свойств предлагаемого образца,В табл. приведены результаты многолетних наблюдений эа изменениями свойств предложенного стандарта параллельно с известными стандартами мутности: бактериальный, химический (бариевый), стеклянный. В табл,2 представлены весовые значения ингредиентов, 15 В табл, 3 даны сведения об образцах стандартов мутности при соответствующих значениях рН, Как видно из табл.3, оптимальны ми для рН следует считать значения 7,0-7,2 (пробы 5 - 7), в пределах которых частицы нитроцеллюлоэы сохранякт длительно агрегативную и кинетическую устойчивость. Формула и з о б р е т е н и я Образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей, содержащий суспенэию частиц вещества размером 1-3 мкм, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения стабильности, он содержит суспензию частиц нитроцеллюлоэы в 0,015 М фосфатном буфере рН 7,0-72 и дополнительно мертиолят при следующем соотношении ингредиентов, мас.7.:Нитроцеллюлоза 0,25 - 0,35 Мертиолят 0,0066 - 0,0.1 Фосфатныйбуфер ОстальноеТаблица 11346675 Продолжение табл,2 Пример Ингредиенты, мг(Х) Нитроцеллюлоэа Мертиолят фосфатно-буферный раствор 6 35 (0,35) 0,66 (0,0066 ф 0,01) 9850 99,64 7 25 (0,25) 1,0 (0)01) 9950 99,74 П р и м е ч а н и е: пример 1 - образец изготовленпо средним значениям всех ингредиентов;примеры 2 и 3 - образцы приготовлены по граничнымзначениям нитроцеллюлоэы; примеры 4 и 5 - образцыприготовлены по граничным значениям мертиолята;примеры 6 и 7 - образцы приготовлены по граничнымзначениям фосфатно-буферного раствора,Таблица 3 Про- Сведения об образцах стандартов мутности рН 1 6,6 ,Агрегация частиц нитроцеллюлозы в первые дни(2-3 дня) после приготовления стандарта и снижение за счет этого степени его мутности 2 6,7 То же 3 6,8 Медленная агрегация частиц нитроцеллюлозы(первь 1 е недели) после приготовления стандарта, что также приводит к снижению степени мутности 4 6,9 То же 5 7,0 Агрегативная и кинетическая устойчивость частиц нитроцеллюлоэы 6 7,17 7,2 То же степени мутности 9 7,4 То же 1 О и бо- Процесс усиления степени мутности ускоряетсялее по мере увеличения рН ВНИИПИ Заказ 5096/26 Тираж 499 Произв-полигр. пр - тие, г. Ужгород,Подписное ул. Проектная, 4 8 7,3 В течение первых месяцев наблюдается постоянноевыпадение в осадок солей иэ состава фосфатнобуферного раствора с усилением эа счет этого