Штамм вируса есно-11 используемый для приготовления диагностических препаратов

(9) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН исследова х инфекци асова,ских(56) По (биолог тика шт М 197 екин В.Д. Вирсвойства, в). Автореф. сы ЕСНОхарактерисокт, дисс,ческие ммо ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Свердловский научнотельский институт вируснь(54) ШТАММ ВИРУСА ЕСН 0-11, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов. Цель изобретения - повышение чувствительности испецифичности штамма. Штамм выделенот больного ребенка, депонирован подномером ГКВ У 1853. Используя штаммУ 1853, получают диагностикум (1) ииммунную сыворотку (11), которые используют для определения титра антител к вирусу ЕСНОу больных (1)и в реакции нейтрализации (11).1 табл.13466 40 45 50 55 Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть испольэонано при производстве диагностических препаратов,Цель изобретения - повышение чунствительности и специфичности штамма.Штамм ЕСНОвыделен от больногоребенка и получен путем посева инфекционного материала на чувстнительную культуру клеток ФЭЧ с последующим проведением двух пассажей наэтой же культуре клеток и являетсяновым антигенным вариантом. 15Штамм допонирован в Государственной Коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.яановского подномером ГКВ1853 и характеризуется следующими признаками, 20Культурально-морфологическиепризнаки.При культивировании штамма1 1853 на клетках ФЭЧ первичныхклетках почек обезьян, на перевиваемых клетках м, -41, КН и ЛЭЧ вызывает четко выраженный цитопатогенныйэффект, характерный для энтеровирусов, Титры вируса на этих культурахклеток достигает 5,0-7,0 18 ТПД /мл. 30Клеточные линии НЕри ПЭТ (почкиэмбриона телят) не чувствительнык штамму1853 вируса ЕСН 0-11,Устойчив к действию хлороформаэфира, В присутствии 1 М раствора хло 35ристого магния и хлористого кальцияштамм сохраняет инфекционные свойства в культуре клеток после прогреваония при 50 С в течение 1 ч,Обладает характеристикой гсг 40+.Антигениые свойства,11 тамм после 4-5 пассажей на клетках ФЭЧ и первичных клетках почекобезьян (ПО) не вызывает агглютинации эритроцитов человека всех трехгрупп. Не патогенен для мышей-сосунков. Стимулирует продукцию специфических антител в организме кроликов,Антисыворотка к штамму1853нейтрализует штамм Сгедог 1 и штаммы,выделенные от бспьных с поражениемсосудистого тракта.П р и м е р 1. Получение диагностикума.,1 иагностические препараты дляпостановки иммунопогических реакций получают путем заражения культуры клеток фибро бпастов эмбриона человека ФЭс 1, ФЭЧ выращивают в матрасах емкостью 0,25 л. В матрас высевают 7426 млн клеток на 30 мл среды роста. Состав среды роста; О 57, гидролизат пактальбумина и 107 натинной сыноротки крупного рогатого скота без консерванта, Клетки формируют монослойо через 48-72 ч инкубации при 37 С.После достижения монослоя среду роста сливают, клетки однократно отмывают раствором Хенкса и заражают вирусом ЕСНОштамм 11 1853, Вирус вносят н объемс 1 мл на 30 мл среды поддержания (из расчета, что заражающая доза составляет 0,1 ТПД на 1 клетку).После равномерного распространения инокупята по поверхности клеток через 605 мин контакта при температуре 37 С, матрасы с монослоем запинают средой поддержания, состояшей из среды 199 беэ сыворотки.Инфицированные культуры инкубируоют при 37 С до наступления полной дегенерации клеточного пласта. Для освобождения от клеточного детрита содержимое матрасов подвергают термолизису (одно-двукратному замораживаонию при температуре минус 20 С с последующим оттаиванием при температуре233 С). Попученный препарат может быть использован для определения титра антител к вирусу ЕСНОу больных с целью расшифровки вспышки заболеваний предположительно энтеровирусной этиологии, а также дпя изучения иммунопогического фона у здорового населения. П р и м е р 2. Получение иммуннойсыворотки. Для получения иммунной сыноротки к штамму 11 1853 иммунизируют кроликов весом 2-3 кг трехкратно синтервалами в 3 и 2 недели между введениями. Вирус вводят внутривенно в объеме 1 О мл (титр вируса 7,0 1 д ТПД, /мл). Через 10 дней после последней иммунизации производят обескровливание животных, Полученную сывооротку инактивируют при 56+1 С н течение 30 ф 5 мин и используют в реакции нейтрализации.Использование штамма У 1853 в качестве антигена н реакции нейтрализации дает воэможность установить диагностическое (в 4-128 раз) нарастание титра вируснейтрализующих антител у бб 67. обследованных больных при изучении вспышки заболеваний среди детей с синдромом увеита, ПрименеУровень вируснейтрализующих антител Наличие изолята Возраст больного к штамму В 366 мес к штамму проба 1 1 1 проба 1 проба 11 проба с 1:4 1:4 1:256 1:8 Не выделеноЕСНО из фекалии с 1:4 1:16 с 1 4 1641:32 1:64 1:256 1 Не вьде- с 1:4 лено ЕСНО иэ мочи 1:64 1:128 1:64 1:256 11 ЕСНОиэ крови 1:8 1:8 1:256 1:16 4 ЕСНОиэ мочи 1:8 1:32 1:256 1:64 1:256 1:16 10 Не вьде- :4 лено 1:8 1:256 1:256 1;4 8 ЕСНО 1:4 из смываконъюнктивы Составитель В,Дроздов Редактор Г,Волкова Техред И.Попович Корректор И. ЭрдейиЗаказ 5096/26 Тираж 499 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5.Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул,Проектная, 4 3 34 ние известного штамма Сгедог 1 при изучении тех же образцов сывороток позволяет выявить иммунологические сдвиги в крови больных у 11 Х обследованных. Наличие положительной серо- конверсии у больных, но выделявших вирусы, позволяет серологически подтвердить факт инфицированности этой группы лиц вирусом ЕСН 0-11, явившимся причинным агентом возникновения вспышки заболевания, сопровождавшегося синдромом поражения глаз у детей раннего возраста,В таблице представлены в качестве примера результаты исследований в ре 6674акции нейтрализации проб крови (1 и11) от больных, вылелявших и не выделявших вирусы,6Использование вируса ЕСНОштаммГКВ У 1853 позволяет в большем проценте случаев выявить положительнуюсероконверсию у больных, а такжеопределить более высокий уровень антител,Формула изобретения Штамм вируса ЕСН 0-11, ГКВ У 1853, 15 используемый для приготовления диагностических препаратов.1