Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов

О П И С А Н И Е (и)973609ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(23) Приоритет СССР ао делам изобретений н открытий(088.8) Дата опубликовання описания 15.11,82(72) Авторы изобретения М. А, Аль-Нури, Н. И. Прянишникова и Н, С. ЕгоровМосковский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революциии ордена Трудового Красного Знамени государственныйуниверситет им, М. Р. Ломоносова(54) СРЕДА ДЛЯ ОТБОРА ПРОДУЦЕНТОВ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ1 О 15Поставленная цель достигается тем, чтосреда, содержащая источник углерода, источник азота, агар и воду, содержит в качест ве единственного источника утлерода и азота фибрин и дополнительно минеральныесоли - однозамещенный фосфат калия. сернокислый магний, сернокислый цинк и сер.нокислое железо при следующем соотношении компонентов, вес,%: 1Изобретение относится к микробиологии,а именно к питательным средам для культивирования микробиологических объектов,и может быть использовано в микробиологической и медицинской промышленности,а также в селекции и биохимии.Известна среда для отбора активных продуцентов протеолитических ферментов 11,содержащая в качестве единственного источника углерода и азота казеинат натрия, ми.неральные соли, агар и воду.Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт - белокмолока казеин; неспецифичность при отборе и селекции продуцентов фибринолитических ферментов. Среда позволяет отбиратьпродуценты протеолитических ферментов,но затрудняет отбор продуцентов фибринолитических ферментов,Известна средадля отбора продуцентовпротеолитических ферментов с фибриноли-тической активностью, содержащая снятоемолоко, 2,3,5- трифенил тетразолий хлористый, агар и воду 21. Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт; неспе 1 птфичность при отборе продуцентов фибрино. литических ферментов. Среда позволяет отбирать продуценты протеолитических фермен тов, однако требует последующей проверки продуцентов на фибринолитическую активность, так как не всякая протеаза, гидролизующая казеин, обладает высокой фибринолитической активностью. Цель изобретения - повышение специфичности среды и повышение активности отоб. раиных продуктов.973609 4сев суспензией спор Асбпопусеа зрЬегоЫеяштамм 35, Через 5 дней измеряют диаметрзон гидролиза фибрина вокруг выросших колоний, Они равны 8 - 10 мм.5 Пример 2.Берут,вес%;Фи брин 1,0Однозамещенныйфосфат калияСернокислый магний10 Сернокислый цинкСернокислое железоАгарВода ФибринОднозамещенныйфосфат калияСернокислый магнийСернокислый цинкСернокислое железоАгарВода 0,5-,0 0,1-0,30,4-0,60,0005 - 0,00150,0015-0,00251,5-2,0Остальное довес,%:0,5 0,30,60,00150,00252,0Остальноедо 100 мл 100 мл 0,1 0,40,00050,00151,5Остальноедо 100 мл 15 Используется фибрин бычий Олайненского20 завода химических реактивов, отмытый многократно большим количеством воды до удаления аминокислот и пептидов и двукрат,но обработанный ацетоном для удаления липи 25 дов и высушивания. Перед внесением в среду фибрин тщательно растереть для получения однородной суспензии, что необходимо для приготовления твердых питательных сред с равномерным слоем субстрата на чашках Петри. Стерилизуют при 0,5 атм, разливают в стерильные чашки Петри., Производят поГ Лиаметр зон гид 1 юлиза фибрина вокруг колоний на предлагаемой среде, мм Увеличение фибрин- литической активностина известной. синтетической среде Продуцент Исходный штамм 8 - 10 23 - 24 Мутант 8 4-4,4 раза 20-21 19-20 1,8-2,0 раза 1,4-1,5 раза Мутант 23 - 2Мутант 20 - 2 Как видно из таблицы, увеличение зон гид- лерода, источник азота, агар и воду, о тролиза фибрина вокруг колоний продуцентов л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью на предлагаемой среде коррелирует с увели- повышения специфичности среды и повышечением фибринолитической активности.50ния активности отобранных продуцентов, поТаким образом, реализация изобретения следняя содержит в качестве единственного позволяет повысить специфичность среды для источника углерода и азота фибрин и дополотбора продуцентов фибринолитических фермен- кительно минеральные соли - однозамещенный тов. фосфат калйя, сернокислый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо при сле 55дующем соотношении компонентов, вес.%:Фи брин 0,5 - 1,0Однозамещенныйфосфат калия 0,1-0,3 Среда лля отбора продуцентов фибринолигических ферментов, содержащая источник уг П р и м е р 1, БерутФибринОднозамещенныйфосфат калияСернокислыймагнийСернокислый цинкСернокислое железоАгарВода Остальные операции проводят аналогично примеру 1.Производят посев суспензией опор Ас 1. арЬегодеа штамм 35, облученной УФ - лучами. Через 5 дней измеряют диаметр зон гидролиза фибрина вокруг выросших колоний. Отбирают колонии мутантов с зонами гидро- лиза, превышающими 8 - 10 мм, пересевают их на среду того же состава и выращивают в течение 7 дней в пробирках.Известную синтетическую среду засевают отобранными культурами и проверяют на фибринолитическую активность. Отобранные на предлагаемой среде три мутанта с фибринолитической активностью, превышают активность исходного штамма. Результаты исследований представлены в таблице,.1,5-2,0Остальноедо 100 мл Источники информации,принятые во внимание при экспертизеЗаказ 8617/29 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб д, 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Сернокислый Сернокислый Сернокислое железо Агар Вода 41. КпдепЬегд Р 2 ссег Р., 1.есейтепЬегд А.,цпд ВцттоЛ Н, Оеччппцпд цпд сЬагаМ -1 егвегцпд чоп рго 1 еааеп аца Тпегеоастпоеусеа чцдаг 2 е 1 аспгтт тцг адетепе з ММгоЬооде, 1979, ч. 19, п. 1, 17 - 25.2, Касаткина И, Д., Имшенецкий А. АБроцкая С. 3., Желтова Е. Г, МутантыАарегдца теггсоаобразующие протезыс фибринолитическим действием, - "Микробиоло гия",1969, т,38, вып, 5, с. 766 - 774 (прототип),