Способ получения аденозин-5-трифосфата

(51)М, Кл.С 07 Н 19/16// А 61 К 3 1/495 Ьвудвретюей комитет СССР во делан кзобрвтеннй и открытий) Заявитель 54) СПОСОБ ПОЛУ АДЕ НОЗИН-ТРИ ФОСФА смолеФ и способа й расх Изобретение относится к усовершенствованному способу получения аденознн-трифосфата (АТФ), который находит широкое применение в биохимии, косметике и медущине.Известен способ получения АТФ, зе- .5 ключающийся в ферментативном фосфорилировании аденозина в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, подкисления до рН 4,5-4,8 в сорбции аденозин- фосфатов на сильноосновной ионообменной смоле с последующим элюированием аденозин-монофосфата (АМФ) и аде- нозИН-дифосфата (АДФ) 0,02 н. раст-. вором хлористого натрия в 0,01 н. раст- воре соляной кислоты, в десорбпин АТФ 0,5 н, раствором хлористого натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты и О осаждения целевого продукта этвтовым спиртом 1 .Недостатком известного получения АТФ является высоки од 2исхОДНОГО сырья, так как Образутошиеся при очистке разбавленные элюаты АМФ и АДФ не испопьзутотся и направляются в производственные отходы.Белью изобретения является утилизация отходов производства.Бель достигается тем, что согласно способу получения АТФ, заключающемуся в ферментативном фосфорилировании аденозина в ттрисутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных; дрож жей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, в подкислении до рН 4,5-4,8 в сорбции аденозин- фосфатов на сильноосновной ионообменной с последуюпам элюированием АМ АДФ 0,02 н. раствором хлористого натрия в 0,01 н. растворе соляной кислоты в десорбции АТФ 0,5 н. раствором хлористого натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты, в осаждении целевого продукта этиловым спиртом, подвергают хроматографическому конпентрированию элюаты, содержащие АМФ и АДФ,3 04138на сяльноосновной йонообменной смоледо концентрации 2-3%, в качестве элюецта чспользуют 0,14-0,16 н. растворхлористого капая и 0,04-0,06 н. раствор хлористого магния в 0,05-0,1 н.5растворе соляной кислоты и концентратвводят в среду фосфопирования .как иоточник аденоэиа, ионов калия и магния,П р и м е р 1. Берут 25 г аденоэина в 1 и деминерализованной воды, Краствору добавляют 108 г МанРС.хм 3.2 НО, 25,2 и КНРО, 1,8 г КС 8,50 г сахароэы, 1,8 г 4 СР 6 НО,1,3 л пивных дрожжей, 375 мл толуола, Реакщи протекает 2-4 ч при рН6,2-7,0 и 37 ф 1 ОС, По окончании, реакции фосфорцлцрования подкисляют до рН4,5-4,8, охлаждают до 4 оС, отфильтро-вывают дрожжевой шламм, и раствораденозцнфосфатов наносят ца колонку ссильноосцовцой ационообмешюй смелой,После сорбпцн колошсу промывают во=дой, элюируют фракпгпо АМФ и ЛДФ0,02 ц. раствором МаСР в 0,01 н, НСО,десорбируют фракци 1 о ЛТФ 0,5 н, раствором МаСР в 0,02 ц. НС 1. Из фракцииАТФ выделяют 30 г продукта - аденозпн 5-трифосфат чистотой 99%,19 л элюата, содержащего смесь АМФи АДФ, нейтрализуют раствором МаОНдо рН 6,8-7,5 разбавляют равным количеством воды и пропускают через колонку, содержащую 60 мл сильцоосцовной анцонообменцой смолы ЛРАП (вС 0 форме). После сорбциц колонку промывают 300 мл воды, затем сорбируюшие 35ся АМФ и АДФ элюируют раствором0,14 ц. КС + 0,04 н, С в 0,05 н,растворе соляной кнопоты, Первые 180 млэлюата отбрасывают, последующие 220 млсодержат основное количество смесиадецозицфосфатов.Получают 220 мл раствора, содержащего 5 г АМФ и АДФ, 2,3 г КС 1,1,8 н. МСД,6 НО,К полученному раствору добавляютдеминералиэованную воду до 1 л, 20 гаденозина, 108 г М аНРО,12 НО,25,2 г КНР 0,1, 50 г сахапоэы. 1,3 гпивных дрожжей, 37,5 мл тобола и ведут фосфорилиювание как ранее, Проводят очистку аденоэинфосфатов на колонке с аниоцообменцой смолой как описановыше. Выход 32 г аденозин-трифосфата (92%). Чистота 97 %.П р и м е р 2 Готовят среду дляпроведения фосфорилирования, состоящуюиэ воды, 25 г аденозина, 108 гМаНРО.12 НпО, 25,2 г КНРО, ,8 г,1,3 л пивных дракжей, 37,5 мл топуолаи ведут фосфорилирование по примеру 1.Состав аденоэинфосфатов после фосфорКлирования, %: АТФ 78, ЛДФ 17, АМФ 2,Лденоэин 3.Проводят очистку аденоэинфосфатовна копонке с анионосфменной смолой.АТФ выделяют из элюата и перекристаллиэовывают динатриевую ссдь аденоэин 5-фгрифосфата. Выход 30 г. Чистота 99%.9 л элюата, содержащего смесь АМФ иЛДФ, нейтрализуют до рН 7,5, разбав;Фпот равным объемом воды и сорбиттуют1аденозинфосфаты на колонке с 50 мпанионцта ЛРАП, Колонку промывают300 мл воды и десорбируют смесь АМФи ЛДФ 0,16 н, раствором КСО и 0,06 н.раствором МС 0 в 0,1 н. НСГ, Первые150 ьщ элюата отбрасывают, последующие 160 мл основное копичество адецозинфосфатов.Получают 160 мп раствора, содержащего 5 г АМФ и АДФ, 1,9 г КСГ,19 9 г МС 0: 6 Н 10 еК попученному раствору добавляютдемицералиэованную воду до 1 л, 20 гаденозина, 108 г МаНРОу 12 НО,25,2 г КНРО 50 г сахарозы, 1,3 гпивных дрожжей, 37,5, мл толуола иведут фосфорилировацие как ранее, Состав аденозинфосфа"ов после фосфорялирования, %; АТФ 84, АДФ 10, АМФ 3Лденозин 3,Проводят очистку аденозинфосфатовца колонке с анионообменной смолой попримеру 1. Выход 33 г динатриевойсопи АТФ, Чистота 96%. Формула изобретения(Способ получения аденозин-б-трифос фата путем ферментатавного фосфорилирования аденозина в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, подкиспения до рН 4,5-4, 8, сорбц;ии аденозин-фосфатов на сильноосновной анионообменной смсь пе с последующим элюированием аденозвн-монофосфата и аденоэин-дифоофата 0,02 н. раствором хлористого натряя в 0,01 н, растворе соляной кислоты, десорбции аденозин-трифосфата 0,5 н, раствором хлористого натрия в 0,02 н, растворе соляной кислоты и осаждения целевого продукта этиловым спиртом, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с5 041384 6 целью утющзапии отходов производства, растворе соляной кислоты и концентрат эшоаты, содержащие аденозин 5-моно вводятв среду фоаорвлироваюя как фосфат и аденозин-дифосфат, подверга- источник адеио:щит, ионов калия и магий Ю ( . ювр В на сильноосновной ионообменной смоле % Источники ииформапии, до концентрааи 2-3 %, в качестве элю- принятые во внимание щж экспертизе анта используют 0,14-0,16 н. раствора 1. Авторское свидетельство СССР клористого калия и 0,04-006 н раз722920, юп, С 07 Н 19/16, вор гористого магния в 0,05-010 н 18,04,78 (прототип).Составитель Л. НикулинаРедактор М. Недолуженко Техред С,Мигунова Корректор У. ПономаРкоЗаказ 4759/8 Тираж 388 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4