Супрессор синтеза иммуноглобулинов

. Бененсон Семипалатинский государств й медицинский(7) Заявител 4) .СУПРЕССОР СИНТЕЗА ИММУНОГЛОБУЛ расширение ассоринтеза иммуногло 0 н Изобретение относится. к медицине, а именно иммунологии и может быть использовано для подавления трансплантационных реакций и лечения аутоиммунных заболеваний.Известно применение поливинилпирро- ф лидона в качестве противовоспалительного средства 13Бель изобретениятимента супрессоров сбулинов,Поставленная цель достигается применением поливинилпирролидона в качест ве супрессора синтеза иммуноглобулинов.Супрессия синтеза иммуноглобулинов иммунокомпетентными клетками (например.15 лимфоцитами) поливинилпирролидоном включает следующие этапы. Получение лимфоцитов периферической крови боль-ных, культивирование лимфоцитов, опре 20 деление иммуноглобулинов в культуральной жидкости методом диск-электрофозе- ра, регистрацию полученных данных на. спектрофотометре обработку получен 2ных спектрофотограмм с целью коли чественного ойределения иммуноглобулиновык функций.Методом, осаждения венозной гепаринизированной крови получают лейкоциты периферической крови больных.,Выделение.лимфоцитов производят в градиенте плотности верографина. Затем в чистыми пени"циллиновый флакон помещают 2.10 лимфо, цитов в 2,0 мл среды 199 с 0,5 мл поли винилпирролидона. Экспозицию продолжают в течение 60 мии при 37 фС. Затем культуральную жидкость сливают, лимфоциты заливают 2,0 мл среды 199 и и кубируют в течение 5 - 7 сут в термост те при 37 фС. Во втором флаконе инкубируют лимфоциты не обработанные вЯивинилпирролидоном.Культуральную жидкость в количестве 0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле (система геля М 1 рН разделяющего геля 8, 6, рН концентрирующего геля 7,3, рН электродного триглицинового буфера 8, 5, электрофореЬ в разровень им ноглобулин Обследуеый конт нгент 111326 0016 0,0 с 35+ 0,43 0,021. +0006 0001 с 00 оль вмато- ным 0,0 1,2+ ольные матиз 0 0,2 м 3 89724деляюшем геле при 5 милиамперах на гель1 ч, окрашивание амидовым черным).Количественное определение полученных фракций иммуноглобулинов производят на спектрофотометре, снабженноммикрометрической приставкой и подставкой для геля. При перемещении столбика,геля с находящимися в нем фракциямииммуноглобулинов относительно источника света и фотоэлемента .по показаниям 1 Фспектрофотомера на миллиметровой бумагестроят спектрофотограмму, По оси абсциссоткладывают длину соответствуюшей фракции, определяемую по шкале микрометрической приставки, По оси ординат откладывают соответствующее фракции количествоединиц поглощения.Окончательный результат определяютплощадью. под кривой на спектрофотограмме и выражают в единицах поглощения, рПлощадь под кривой определяют по формуле.вК С а,где5- плошадь под кривой;К - 1,064;С - ордината максимума кривой;а - длина отрезка, соединяющего дветочки кривой, проходяшего,параллельно оси обцисс на уровне с/2.По калибровочной кривой, построенной Звпо контрольным иммуноглобулинам с известной концентрацией, единицы поглощенияпереводят в мг%.П р и м е р 1. Выделяют культурулимфоцитов из венозной крови больногоДиагноз - ревматоидный артрит. Инкубацию проводят в двух пенициллиновыхфлаконах по 2 10 клеток в 2,0 мл среЬоды 199 в течение 5 - 7 сут при 37 С.В одном флаконе лимфоциты инкубируют после взаимодействия с 15% водным раствором поливинилпирролидона с молекулярным весом 10000 в течение 60 мин, в другом флаконе лимфоциты, не подвергавшиеся взаимодействию с поливинилпирролидоном, Культуральную жидкость 5 - 7 суточной культуры лимфоцитов в количестве 0,2 мл подвергают диск-электрофорезу в полиакриламидном геле с последующей спектрофотометрией иммуноглобулиновых фракций. В культуральной жидкости лимфоцитов, не подвергавшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 1,3 мг% иммуноглобулинов М и 2,6 мг% иммуноглобулинов ХВ культуральной жидкости лимфоцитов, подвергнувшихся взаимодействию с поливинилпирролидоном содержится 0,43 мг% иммуноглобулинов М и 0,021 мг% иммуноглобулинов ХБыли проведены исследования у 20 больных достоверным ревматоидным артритом, 11 больных ревматизмом, 8 больных системной красной волчанкой, 9 больных неревматическими заболеваниями (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца и др.) и 12 здоровых доноров. Во всех случаях наблюдается эффект супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилп ирролидоном.Данные исследований по супрессии синтеза иммуноглобулинов поливинилпирролидоном при различных заболеваниях сведены в таблицу. (уровень иммуноглобулиновГ м, с у мг%, в культу- ральной жидкости лимфоцитов, не обработанных поливинилпирролидоном А и обработанных поливинилпирролидоном Б).,0,032 й. (0.01 с. 0,001 0,01 1,46 т, 0,140,30,022 Больные 9 неревма- тическими забо 0,03 0,15 лев ания ми 0,015 1 с 0,001 (0,0010,011 0,080,018 1,15 30,18 0,270,038 Здоровые 12доноры)Ь Больные хроническими гастритами, язвеннойболезнью 12-ти перстной )кишки,гипертонической болезнью, хроническим бронхитом, ишемической болезнью сердца и др."дит к сокращению сроков лечения больных. формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор К. Воловик Техред С, Мигунова Корректор О. Билак Заказ 11781/7 Тираж 716 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская иаб., д. 4/5филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Как видно из. таблицы, при всех заболеваниях и у здоровых поливинилпирролидон обладает достоверным супрессорным действием на клетки, синтезирующие им щ мунноглобулины,Применение поливинилпирролидона обеспечивает значительное уменьшение возникновения у больных нежелательных побочных действий при лечении аутоиммунных заболеваний и подавлении транс- плантационных реакций. Это позволяет получать высокий лечебный эффект, привоПрименение поливинилпирролидона в качестве супрессора синтеза иммуноглобулинов. Источники информации,принятыр во внимание при экспертизе 1. Рабинович И.М. Применение поли меров в медицине, Л., "Медицина", 1972.