Способ получения глюкоамилазы

СФоВ Соеетскик Соцнаамстнческик РеищбликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИ ВТВЛЬСТВУ о 1800185(22) Заявлено 24.03,79 (21) 2745896/28-13с присоединением заявки Ио -(51)М. КЛ.З С 12 Э 13/10 Государственный коиитет СССР оо аеааи изобретений н открытийБ. А.И. А. Кь,э 1игст 71) Эаявител сесоюзный о-ис ледовательскижения 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОАИИЛАЗЫ кую посевнуюстадию культир. Для культильтуры в инокуИзобретение, относится к микробиологической промьанленности, а именнок способам получения ферментногопрепарата глюкаамилаэы, используемойпри ферментативном расщеплении крахмала в спиртовой и крахмалопаточнойпромыыненности.Известен способ получения глюкоамилазы, предусматривающий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролизкукурузной муки солодом или бактериальной е 1. -амилаэой, разделение полученного гидролизата на два потока,один из которых используют на стадииферментации, а другой разбавляют досодержания сухих веществ 6-7 и используют для выращивания посевногоматериала, культивирование грибовАврегд 111 ць аюапог 1 466 на питательной среде, содержащей гидролиэат кукурузной муки ЩНедостатком известного способаявляется длительность процесса получения фермента (280-320 ч),Цель изобретения - ускорение процесса.Указанная цель достигается тем,что выращивание посевного материалаосуществляют на питательной среде,содержащей крахмал, азотнокислыймагний, однозамещвнный фосфорнокислый калий, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки,в течение 22-24 ч при температуре28-30 е С,гидролнэ кукурузной мукиведут в течение 30-40 мин при 5860 оС, при этом в питательную средудобавляют днаммонийфосфат .10 диаммонийфосфат добавляют в двестадии: на первой стадии - в количестве 0,2-0,4 к объему среды послегидролиэа кукурузной муки, а на второй - 0,1-0,2 В через 20 -24 ч после15 начала культивирования.Предлагаемый способ состоит в следующем,Посевной материал культуры Аврегд 1 11 ца аиавог 1 466 готовят на жидкой20 питательной среде, содержащей картофельный крахмал, азотнокислый нат"рий, фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки.25 Выращивание осуществляют в течение20-24 ч при 28-30 С.Подготовленную жидкультуру передают навирования в инокулято31 вирования посевной куляторе и далее для ферментации в производственных условиях жицкую питательную среду готовят следующим об - разом.Кукурузную муку смешивают с водой в соотношении 1:3, разваривают при 148-154 С под давлением 0,3-0,4 мПа в течение 15-20 мин,охлаждают до 60 С и осахаривают солодовым молоком или бактериальной оС-амилазой в течение 30-40 мин при 58-60 С до образования эритродекстринов. От полученного сус ла, концентрация сухих веществ в котором составляет 18-20, делают объем среды и разбавляют его водой до концентрации сухих веществ 6-7 а в оставшуюся среду добавляют диаммоний фосфат в количестве 0,3 к объему среды. Обе полученные среды подкисляют серной кислотой до рН 4,8, стерилизуют острым паром при давлении 0,1 - 0,12 мПа в течение 30-40 мин, охлаж- щ дают и направляют соответственно на стадию культивирования посевного материала и на стадию ферментации.Продолжительность культивирования посевного материала в инокуляторе со-ставляет 22-24 ч при 28 -30 С, непрерывном перемешивании и аэрации стерильным воздухбм, подаваемым в количестве 16 мна 1 мсреды в час . Ферментацию осуществляют на высококон - центрированном сусле при 35 С, непре- Зс рывном перемешивании и аэрации стерильным воздухом (30-40 м 3 на 1 м среды в час). Через 20 -24 ч от начала процесса ферментации в среду вво- дят оставшуюся часть диаммонийфосфата З 5 (0,15) для ускорения биосинтеза глюкоамилазы. Продолжительность ферментации - 72-108 ч. Готовая культура имеет активность не менее 170 ед/мл.П р и м е р. Посевной материал Аьре го 1 1 оь ахавог 466 выращиваот на питательной среде следующего состава,:Крахмал картофельный бНа МО 0,91КНРО, 0,1КСР 0,05И 95 04 0,05Ге 504 0,01Солодовые ростки 3,0Вода Остальное Выращивание осуществляют в течение 24 ч при 30 С. Для культивирования производственной стадии посевного материала и ферментации готовят производственную питательную среду, Для этого кукурузную муку смешивают с водой при 45 С в соотношении 1;3, полученную массу развариваот при 148 С, давлении 0,4 мПа в течение 15 мин. Разваренную массу охлаждают до 60 С затем осахаривают солодовым молоком в ечение 30 мин до красно-бурой окраски водной пробы, что указывает на образование эритродекстринов. Часть сусла разбавляют водойдо концентрации сухих веществ 6, подкисляют серной кислотой до рН 4,8,стерилизуют острым паром при 121 С,в течение 30-40 мин охлахда 1 от доо30 С и используют в качестве питательной среды для получения посевногоматериала в инокуляторе,В высококонцентрированное сусловводят 0,3 к объему диаммонийфосфата,подкисляют среду серной кислотойдо рН 4,8 стерилизуют при 1210 С, втечение 30-40 мин,охлаждают до 35 Си направляют на ферментацию. Ферменотацию проводят при 35 С,давлении0,03 мПа и аэрации стерильным воздухом в количестве 30-40 мна 1 м 3среды в час при непрерывном перемешивании турбинной мешалкой с 150170 об/мин. Через 24 ч после начала ферментации для ускорения биосин-теза глюкоамилазы в среду вновь вводят диаммонийфосфат в количестве0,15.Продолжительность ферментации составляет 184 ч, а активность полученной гл 1 окоамилазы - 183 ед/мл.Предлагаемый способ позволяет на несколько суток сократить процесс культивирования продуцента глюкоамилазы с сохранением высокого уровня активности фермента,Формула изобретения1. Способ получения глюкоамилазы, предусматривающий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролиза кукурузной муки солодом или бактериальной с -амилазой, разделение полученного гидролизата на два потока, один из которых используют на стадии ферментации, а другой разбавляют до содержания сухих веществ б -7 и используют для выращивания посевного материала, и культивирование грибов Аьрегд 3 иь аиащог 466 на питательной среде, содержащей гидролизат кукурузной муки, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения процесса, выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, содержащей крахмал, азотнокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки, в течение 22 -24 ч при температуре 28-30 С, гидролиз кукурузной муки ведут в течение 30-40 мин при 58- 60 С, при этом в питательную среду добавляют диаммонийфосфат.2, Способ по и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что диаммонийфосфат добавляют в две стадии, на первой из которых в питательную среду в коли800185 Составитель Т. 1,елентьеваТехред И.Рейвес корректс О. Билак Редактор Н. БушаеваЗаказ 1030772 Т Тираж 539 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва ЖРа сная наб. д, 4 5Филиал ППП Патент , г. Ужгород, ул. Проектная, 4 честве 0,2-0,4 после гидролиэа кукурузной муки, а на второй стадии0,1-0,2 к объему среды через 2024 ч после начала культивирования,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Патент США Р 3988204,кл, 195-15, опублик, 197.