Способ определения состояния клеточного иммунитета

Номер патента: 789104

Автор: Атанадзе

ZIP архив

Текст

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ пц 789104(51)М. Кл.з А 61 В 10/00 с присоединением заявки Нов(23) Приоритет Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийОпубликовано 231280. Бюллетень М 47 Дата опубликования описания 23, 12, 80(51) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТАИИПЛ -со 1 30 1Изобретение относится к медици:не и может быть использовано для выяснения этиологии и диагностики ряда заболеваний.Известен способ определения состояния клеточного иммунитета путем проведения реакции между лейкоцитами исследуемой крови и антигеном с последующим инкубированием реакционной смеси и определением адгеэивных свойств лейкоцитов (11,Однако известный способ требует больших объемов крови (15-20 мл), трудоемок и длителен.Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.Эта цель достигается тем, что для проведения реакции используют цельную дефибринированную кровь, реакционную смесь помещают в миграционные капилляры ПерфильеваГабе, затем центрифугируют и по степени уменьшения зон адгезии лейкоцитов в капиллярах определяют состояние клеточного иммунитета;Определение клеточного иммунитета осуществляют следующим образом.Исследуемую кровь, взятую у пациента из локтевой вены в количестве 1-2 мл, дефибрийируют при помо 2щи стеклянных бус диаметром около2 мм, вносят по 0,1 мл в лунки изаппарата Такачи . В эти лунки припомощи петель из названного аппарата прибавляют по 0,025 мл антигена и его контроля (в одну лункуантиген , в другую - контроль),Иэкаждой лунки заполняют кровь подве пластины с миграционными капил лярами (всего по 10 капилляров).Затем пластины маркируют, торцовыеотверстия капилляров герметиэируютзубным цементом и после затвердения последнего центрифугируют10 мин. при 450 о. При этом происходит четкое расслоение крови вкапилляре на зону эритроцитов, зонуприлипших лейкоцитов и зону плазмы,Замер длины зоны прилипших лейко цитов в капилляре производят при помощи окуляр-микрометра под микроскопом при увеличении в 56 раз и выражают. в единицах шкалы микрометра, Показателем выраженности кле точного иммунитета служит индексингибиции прилипания лейкоцитов(ИИПЛ), который вычисля от по фор- мулегде Т. - средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капиллярах, содержащих кровь сантигеном;средняя длина зоны прилипших лейкоцитов в 10 капил.лярах, содержащих кровь сконтролем антигена.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1. Отделение корево- (го клеточного иммунитета.В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл коревого антигена врабочем разведении, Рабочее разведение данной серии антигена находят.предварительно путем построения кривой зависимости выраженности реакции при серийных разведениях антигена с кровью доноров заведомо,иммунных. В качестве коревого антигенаиспользуют культуральную жидкостьперевиваемых клеток ПАО, инокулированных штаммов ЛенинградилиЭдмонстон вируса кори. Во вторую 25лунку. добавляют 0,025 мл контроляантигена в разведении соответствующем рабочему разведению коревого антигена. В качестве контроля антигенаиспользуют культуральную жидкостьнезараженных клеток ПАО.После перемешивания крови с антигеном (или .контролем антигена) иэкаждой лунки заполняют по две пластины с капиллярами (из каждой лунки по 10 капилляров). Торцовые отверстия капилляров герметизируютзубным цементом и, после затверденияпоследнего, центрифугируют 10 минпри 450 9. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах,вычисляют, среднюю арифметическую дляопыта и контроля. Допустим, чтосредняя длина зоны лейкоцитов в опытных капиллярах равн 8,3+0,9 единиц 4шкалы микрометра и в контрольных -16,0+1,4. Индекс ингибиции прилипа"ния лейкоцитов равен400(1- - =48 /о8 З о1600П р и м е р 2. Определение клеточного иммунитета к вирусу клещевого энцефалита,В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл антигена вируса клещевого энцефалита в рабочем разведении, а во вторую лунку - контрЬльантигена в том же объеме и в аналогичном разведении. В качестве антигена вируса клещевого Энцефалита используют надосадочную жидкость гомогената мозга белой мыши, инокулированной штаммом Софьин вируса клещевого энцефалита, Контролем антиге- б 5 на служит надосадочная жидкость гомогената головного мозга интактной мыши.Кровь перемешивают с антигеном (или с контролем) и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия последних герметизируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 9. Замеряют длину эоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте равна 8,6 Т 0,98 и в контроле 15,9+0,74 единиц шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкопитов равен100 1- , -46 оо.П р и м е р 3. Определение клеточного иммунитета к туберкулину.В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мл исследуемсй дефибринированной крови, В первую лунку добавляют 0,025 мл коммерческого туберкулина в рабочем разведении, а во втЬрую лунку контроля антигена которым служит среда Р 199, при помощи которой разводят туберкулин. Кровь перемешивают и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия капилляров герметизируют и пластины с капиллярами центрифу - гируют 10 мин, при 450 д. Затем замеряют длину зоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных и 10 контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 6,9+0,8 и в контроле 16,2+ 2,0 единиц шкалы микрометра, Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равен 10 о (1- -- ) = 57/оП р и м е р 4. Определение клеточного иммунитета к экстракту белого вещества мозга.В две лунки панели Такачи помещают по 0,1 мп исследуемой дефибринированной крови. В первую лунку добавляют 0,025 мл рабочего разведения экстракта из белого вещества мозга, приготовленного по Са 5 а 1 ь, а во вторую лунку в этом же объеме контроль антигена, которым служит среда Р 199, при помощи которой готовят и разводят экстракт.Кровь перемешивают и из каждой лунки заполняют по 10 капилляров. Отверстия капилляров герметиэируют и пластины с капиллярами центрифугируют 10 мин при 450 9. Затем замеряют длину эоны прилипших лейкоцитов в 10 опытных контрольных капиллярах и вычисляют среднюю арифметическую длины зоны для опыта и контроля. Допустим, что средняя длина в опыте 11,9+ 1,3, а в контроЗаказ 8920/3 , Тираж 673 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035,Москва,Ж,Раушская наб.,д.4/5 тФилиал ППП "Патентф,г.ужгород, ул.Проектная,4 ле 16,5 Г 1,1 единиц. шкалы микрометра. Индекс ингибиции прилипания лейкоцитов равенЮо(- ,)= 27 Яо.1Предлагаемый способ позволяет повысить производительность труда (расход времени на одну реакцию нримерно 0,5 ч, а при известном спОсобе - около 5 ч).Благодаря использованию в качестве исследуемого материала цельной крови и капилляров Перфильева-Габе в предлагаемом способе затраты исследуемой крови существенно сокращаются, Так, при исследовании клеточного иммунитета к 1-2 антигенам предлагаемым способом достаточно 0,6-0,8 мл крови, в то время как при известном способе для этих целей необходимо 15 мл крови.Формула изобретения Способ определения состояния клеточного иммунитета путем прове дения реакции между лейкоцитамиисследуемой крови и антигеном иопределением адгеэивных свойствлейкоцитов, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для проведения реакции используют цельную дефибрини-раванную кровь, реакционную смесьпомещают в миграционные капиллярыперфильева-Габе, затем центрифугиру"ют и по степени уменьшения зон адгезии лейкоцитов в капиллярах опре+деляют состояние клеточного иммунитвта. Источники информации,5 принятые во внимание при экспертизе 1. НаЦ 16 ау И,6 Мабц 1 вЬ А. ЗвЬ 1 твЬег Я.Н.Рейес 11 оп оЮ апМ 1 гещоцгееИ вед 1 а 1 ей 1 попцп 1 Су апй :веппп 20 Ь 1 ос 11 пд Еасгогз 1 п сапсег раВ 1 еп 1 вЬу 1 Ье Сецсос 1 е аЖегепсе 1 пЬ 1 Ь 111- оп 1 евТ.-ВгШ.зЬ Ю. Сапсег, 1974,29,1, р,34

Смотреть

Заявка

2658608, 28.08.1978

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ

АТАНАДЗЕ СЕМЕН НИКОЛАЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61B 10/00

Метки: иммунитета, клеточного, состояния

Опубликовано: 23.12.1980

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-789104-sposob-opredeleniya-sostoyaniya-kletochnogo-immuniteta.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения состояния клеточного иммунитета</a>

Похожие патенты