Способ получения элимоклавина

Союз Советских оциалистически Республик(51) М Кл зС 12 Р 13/00 с присоединением заявки Ке Государственный комите СССР по делам изобретеиий и открытий(45) Дата опубликования описания 15.12.8 53) УДК 663,11(088.8), Т. ф. Солов инбас СР, окоска аиВе РБ Ангелов Теодор Иванов, С Ангелова Мария Богомило Людмила Симеоновна ичков Иван Григоров Заявители Институт Инсохимии и физиологии микроорганизмов АН СССут микробиологии Болгарской Академии наук,НРБ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛ ЛАВИ кращение врем тигается тем, что в каиспользуют штамм Р, который выраой среде следующего 250 в 310 - 150,1 - 0,20,25 - 0,500,025 - 0,500,003 - 0,0070,005 - 0,0100,1 - 0,2До 1 л рН среды доводятаммиаком до 5,2. Кулма С 1 аисерз зр, ИБФчение 10 - 12 дней,Выделение элимокланой жидкости осущестметодами: одноступенчпоследующей кристаллметодом колоночной адтографии. концентрированнымтивирование штамМ-Рведут в тевина из культуральвляют известными атой экстракцией с изацией и очисткой сорбционной хромаГриб С 1 аисерз зр. ИБФМ-Рполучен из Института микробиологии Болгарской Академии наук и хранится в коллекциях Недостатком извест тельность процессИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения элимоклавина.Элимоклавин- (8 - гидроксиметил-Лз е-эрголен) - один из важнейших представителей 5 группы клавиновых алкалоидов, относящейся к классу эргоалкалоидов (алкалоидов спорыньи). Элимоклавин обладает ярко выраженной биологической активностью и может найти применение в медицине. 1 ОИзвестен способ получения элимоклавина, предусматривающий глубинное культивирование гриба-продуцента при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и минераль ные соли, выделение и очистку целевого продукта 1. В качестве продуцента используют гриб, выделенный из склероций Реп 1 п 1 зе 1 птп 11 рйоЫепгп К 1 сК который выращивают в течение 27 дней на питательной 2 среде следующего состава, г: сахароза 100;сукцинат аммония 10,1; Са (ИО,) г 1,0;КНгРО 0,25; МАЗО 7 НгО 0,25; КС 1 0,125;Ре 50 7 НгО 8,34; Уп 50 7 НгО 3,44 мг; вода водопроводная до 1 л. При этом выделя ют смесь алкалоидов, содержание элимоклавина в которой составляет 42 о/ го способа являетсякультивирования. 30 Цель изобретения -культивирования.Указанная цель досчестве продуцентаСаюсерз зр. ИБФМщивают на питательнсостава, г/л:СахарозаЛимонная кислотДрожжевой экстрКНгР 04Мд 504 7 Н,ОХп 504 7 НгОРеЯО 7 Н,ОКС 1Вода водопроводн45 50 55 60 65 3культур данного института (Са 1 серв зр, ср. 11) и Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (С 1 аисерз зр. ИБФМ-Р) . Морфологические и физиолого-биохимическиепе признаки гриба С 1 аисерв вр,ИБФМ-ГКолонии на глюкозокартофельном агарена 14 сутки культивирования достигают50 мм в диаметре, белые, обратная сторонаколоний пурпурного оттенка, пигмент такого ке цвета диффундируст в агар. Растущий край - ровный, поверхность колонии -войлочная. Центральная часть колонии свозрастом приобретает бежево-пурпурныйоттенок, становится бархатистой,При культивировании на лабораторнойсреде (Тг) состава, г: сахароза 100; В/.-аспарагин 5; Са (КО,) г 4 Н,О 1; КНгРО 0,25;Мд 504 7 Нг 0,25; дрожжевой экстракт 0,1;КС 1 0,12; Ре 504 7 Н,О 0,015; агар-агар 20;вода водопроводная до 1 л; НС 1 до рН среды 5,2 штамм образует белый воздушныймицелий и дает конидиальное спороношение типа Яр 11 асе 11 а,Конидиеносцы палочковидные, простые,бесцветные, 11,2 - 14,4 с,3,2 р,. Конидии одноклеточные, бесцветные, элипсоидной формы 4,8 - 83,2 р. При выращивании штамма Саисерз зр. ИБФМ-Рв качествеисточника углерода могут быть использованы следующие углеводы и спирты; глюкоза, сахароза, арабиноза, фруктоза, сорбит, маннит, инозит, в качестве источникаазота-аммиак, соли аммония, аспар агин,дрожжевой экстракт,П р и м е р. Условия культивирования гриба С 1 аи 1 серз зр, ИБФМ-Р,Культуру С 1 аисерз зр. ИБФМ-Рподдерживают в пробирках со скошенной агаризованной средой Т,. Выращивание осуществляют в течение 12 дней при 24 С. Полученную таким образом культуру высевают в колбы объемом 750 мл со 150 мл срсды следующего состава, г: глюкоза 100;лимонная кислота 10; КНгР 04 0,5; Мд 8047 НгО 0,3; дрожжевой экстракт 0,1;Ре 504 7 НгО 0,007; Уп 804 7 Н,О 0,006; водопроводная вода до 1 л, значение рН среды доводят концентрированным аммиакомдо 5,2. Колбы с засеянными средами помещают на качалку с 170 - 180 об/мин при24 С на 6 суток. Полученную культуру используют для инокуляции колб емкостью750 мл, содержащих 150 мл среды состава, г; сахароза 300; лимонная кислота 15;КНгР 04 0,5; МАЗО 7 НгО 0,25; дрожжевойэкстракт 0,1; КС 1 0,12; Ре 504 7 НгО 0,007,Уп 804 7 Н,О 0,006; вода водопроводная до1 л; значение рН среды доводят до 5,2 концентрированным аммиаком. Культивирование проводят на качалке при 24 С в течение 10 - 12 дней. Содержание алкалоидов в 51 О 15 20 30 35 40Формула изобретения 1. Способ получения элимоклавина, предусматривающий глубинное культивирование гриба-продуцента при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и минеральные соли, выделсние и очистку целевого продукта, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени культивирования, в качестве продуцента используют штамм С 1 аисерз зр, ИБФМ-Р.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что штамм С 1 аисерз зр. ИБФМ-Рвыращивают на питательной среде следующего состава, г/л:СахарозаЛимонная кислотаДрожжевой экстрактКНгР 04Мд 504 7 НгОХп 504 7 НгОРе 804 7 НгО 250 - 30010 - 150,1 - 0,20,25 - 0,500,25 - 0,500,003 - 0,0070,0 с"5 - 0,010 культуральпой жидкости, определенное пектрофотометрически, со тавлст 1,22 г/л.Выделение и очистка элимоклавина.3,3 л культуральной жидкости отфильтровывают через фильтровальную бумагу в вакууме. Нативный раствор подщелачивают концентрированным аммиаком до рН 7,5 и экстрагируют порцпми по 1 л хлороформом 8 раз, Для ускорения разделения слоев используют центрифугирование на центрифуге К(5000 об/мин, Т 20 мин), Контроль за полнотой экстрации осуществляют с помощью реактива Ван Урка. Объединенный хлороформный экстракт высушивают пад прокаленпьм МагЯО, упаривают в вакууме. Выход суммарной смеси алкалоидов 2,79 г (69%).Для отделения элимоклавина суммарную смесь обрабатывают 100 мл кипящего метапола, охлаждают раствор и отфильтровывают осадок, В осадке по хроматографическим и спектроскопическим данным - элимоклавин (содержание основного вещества Ое менее 90%), Выход 1,74 г.Дополнительно хроматографией после разделения маточника на окиси алюминия (Ч степень активности, элюепт в хлороформ), а затем на силикагеле (элюент - СНС 1 з . СНзОН: конц. КН 40 Н=90: 10: 1) выделяют 250 мг элимоклавина.Таким образом, культивирование гриба Саисерз зр. ИБФМ-Рпозволяет значительно сократить время проведения процесса (в 2 - 2,5 раза). Кроме того, гриб С 1 аисерз зр. ИБФМ-Робладает относительной селективностью в отношении продуцирования элимоклавина. Содержание элпмоклавина в выделяемой смеси алкалоидов 70 - 75%. Это облегчает выделение и очистку целевого продукта.735010 Составитель А. Мелентьева Текред Л. Куклина Редактор 3. Бородкина Корректор О, Силуянова Заказ 2512/5 Изд М 643 Тираж 530 ПодписносНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская аб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 КС 0,1 - 0,2 Водопроводная вода До 1 лрН среды доводят концентрированным аммиаком до 5,2. 3, Способ но п. 1, отличающийся тем,что культивирование штамма С 1 ач 1 серз зр. ИБФМ-Гведут в течение 10 - 12 сут.6Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. А. Нойпапп, К. Вгцппег, Н. КоЬе 1,А, Вгас 1 пеж АПса 1 оЫе ацз бег заргор 11 у 115зсЬеп Кц 11 цг дев Мц 11 ег 1 огпр 11 кез чопРеппЬецгп 1 ур 11 оЫецт ЮсЬ Не 1 че 11 саСЫгп 1 са Ас 1 а, 1957, 40, 7, 1358 - 1373.