Штамм вируса оф-5 возбудитель рабдовирусного гепатита форели

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскик Социалнстнческнк Республик(22) Звявленоо спрнсоединен (23) Приоритет 1.1178 (21) 2684731/30-15ем заявки Мо 12 К 1/02 12 К 7/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(71) Заявитель 4) штАмм ВиРУсА ВАВООч 1 й 09 5 А 1.мои 15ОФ- ВОЗБУДИТЕЛЬ РАБДОВИРУСНОГОГЕПАТИТ.ФОРЕЛИ2 мыр Изобретение относится к области биологии, в частности к ветеринарной вирусологии, и представляет собой новый штамм вируса, который вызы вает заболевание молоди форели и может быть использован для получения специфической иммунной сыворотки.В ихтиопатологии известны различные вирусные болезни Форели и соответствующие возбудители их, Так инфекционный некроэ поджелудочной железы вызывается вирусом гексавональной Формы (1).Инфекционный некроз гомопоэтической ткани (ЭНИ) вызывается вирусом пулевидной Формы размером 140 х х 160 нм. Возбудитель ЗНН разрушается эфиром и хлороформом, очень термо- лабилеЯ. Оптимальная температура развития его в клеточных культурах10-15 оС, Разрушается при прогревании ,до 45 оС в течение 15 мин. Вызывает заболевание мальков форели (2)Целью изобретения является вьщеление возбудителя новой болезни Форели, изучение его свойств, которые необходимо знать для постановки диагноза на рабдовирусный гепатит, а также для получения специфической иммунной сыворотки, которую можно бы испольэовать с целью диагносданного заболевания Форели в ховахе былотикиэяйстПредлагаемый рабдовирус НаЬйо 1 оч 1гцв за 1 шоп 1 э ОФв литературе неописан, он отличается от известныхвирусов и является самостоятельнымвозбудителем Рабдовнрусного гепати О та Форели.Штамм ВаЬо 1 оч 1 гцз за 1 шоп 1 з ОФ хорошо культивируется на перевнваемых клеточных культурах ЕРС, РНМ,АЗЕ, ВТУ - 2 и первичной культуре 15 клеток гонад Форели, вызывая активное цитопатогенное действие (ЦПД)через 21-48 ч.Морфологическое признаки. Размервирионов при выращивании на пере виваемой клеточной культуре ЕРС140 - 150 х 60 нм, пулевидной Форпо краям вириона ворсинки. Штамм относится к рабдовирусам.Культуральные свойства, Хорошо 25 культивируется на перевиваемых клеточных культурах в титре 10 - 10бТЦД-, Оптимальная температура развития вируса 22 - 24 С. Может культивироваться до 30 С, Устойчив к 30 эфиру, хлороформу, кислотности среды50 55 60 Хорошо сохраняется при -20 С в течение 3 лет, при +4 ОС - в течение шести ,месяцев. Не обладает гемагглюти-нирующим свойством и гемадсорбцией.Разрушается при 60 в течение 15 мин.Антигенные свойства. Выделенныйвирус отличается по своим антигеннымсвойствам от известных вирусов - возбудителей болезни форели. Так, припостановке реакции нейтрализации симмунными сыворотками к ЗРИ, ЭНН иЧНЯ вирусам получен отрицательныйрезультат, что свидетельствует оаэличии их антигенной структуры,Данный вирус вызывает образованиевируснейтрализующих антител, При иммунизации данным вирусом кроликов получена иммунная специфическая сыворотка, которая предназначена для диагностики рабдовирусной болеэки молодиФорели при помощи реакции нейтрализации,Вирулентные свойства. При введениинового вируса в брюшную полость здоровым подопытным форелям в дозе 0,2 млцля одной Форели .массой 8-10 у 66,6последних возникает заболевание споследующей гибелью, Следовательно,вирус ОФявляется патогеннйм дляздоровых Форелей. Вызывает заболевание и гибель до 70 .здоровых ФорелейНа основании комиссионной проверкиустановлено, что вновь выделенныйштамм является патогенным для" здоровых Форелей и вызывает самостоятельное заболевание.Выделение вируса. В последние годы выращиванием Форели занимаютсямногие рыбоводные хозяйства нашейстраны. Во многих рыбкомбинатах перешли на интенсивные формы ведения форелеводства, Учитывая то, что условиявыращивания не всегда отвечают требованиям, необходимым для нормального развития рыб, очень часто среди них возникают болезни различнойприроды. Предлагаемый вирус выделенот больных мальков, сеголетков игодовиков Форели в двух форелевыххозяйствах УССР, в которых наблюдалась значительная гибель рыб с клиникой потемнения кожного покрова,спиралевидного движения в воде с последующим опусканием мальков на днобессейна и гибелью их. Айалогичныйвирус выделен изикры самки, а также смеси оплодотворенной икры от 10производителей.Выделение вируса проводят путемзаражения однослойных клеточных культур .ЕРС и РНМ, которые выращиваютна основной среде Игла с добавлением .5 сыворотки крупного ро.атого скота, а также смеси пенициллина истрептомицина по 100 ед/мл. Выращивают при 22.-24 ОС. На второй-третийдень отбирают пробирки, т, которыхклетки образовали моногчой. В 4 - б 5 1 О 5 20 25 30 35 45 пробирок вносят суспензию, приготовленную на физрастворе 1:б, из печени, почек, селезенки и жидкости брюшной полости больных рыб. Ежедневно провоДят микроскопию зараженных клеточ ных культур под малым увеличением микроскопа (х 60). При появлении цитопатогенного действия вируса на клетки (ЦПД) культуру эаморажйвают приС, Для проведения второго пассажа зараженные культуры размораживают и вносят по 0,2 млвируссодержащей культуральной жидкости в здоровые .леточные культуры. Такое пассирование на клеточных культурах проводят 4-5 раз,после чего возникающее в последующих пассажах ЦПД считают специфическим действием вируса.Таким образом выделяют вирусы от мальков, сеголетков и годовиков форели, а также иэ икры самки и смеси оплодотворенной икры форели. Все выделенные вирусы имеют пулевиднуи Форму, размером 150 х 60 нм, оптимальная температура выращивания 22 - 24 оС, нечувствительны к эфиру, хлороформу и кислотности среди. Хорошо сохраняются при -20"С и +4 С, Не обладаютемагглютинирующим свойством. Разру-аются при 60 С в течение 15 мин, Патогенные для здоровых форелей.Вирус НЯ ОФиспользуют для иммунизации серого кролика с целью получения специфической иммунной сыворотки, Для этого по 2 мл вируссодержащей культуральной жидкости вводят кролику внутривенно три раза интервалом 7 дней. После его обескровливают и получают сыворотку крови. После прогревания ее при 60 ОС в течение 30 мин определяют титр накопления антител, который составляет 1:320, Иммунная сыворотка хранится в замо- - роженном состоянии и может быть использована для постановки реакции нейтрализации при диагностике рабдовирусного гепатита форели. Формула изобретения Штамм вируса НаЫоч 1 гцэ эа 1 воп 1 з ОФ- возбудитель рабдовирусного гепатита Форели. Может быть использован для получения специфической иммунной сыворотки. Хранится в музее вирусных штаммов УкрНИИРХа.Морфологические признаки. Размер вирионов при выращивании на перевиваемой клеточной культуре ЕРС 140-,150 хб 0 нм, пулевидной формы, по краям вириона ворсинки. Штамм относится к рабдовирусам. Культуральные свойства. Хорошокультивируется на любой из перевивамых культур - ЕРС, НМ, АЕ, РТУипервичной культуре из гонад форелис активно проявляющимся ЦПЦ через34275 Ф Составитель М. МирзаевРедактор Л, Новожилова Техред А.Щепанская Корректор Г.Решетник Подписное Заказ 2007/35 Тираж 522 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5:филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 24-48 ч в титре 10 - 10 ТПД 5 О, устойчив к хлороформу, эфиру и кислотности среды, Хорошо сохраняется притемпературе -20 ОС и при +4. С. Необладает гемагглютинирующим свойством.Разрушается при 60 С в течение 15 мин. Вирулентные свойства. Вызываетзаболевание и гибель до 70 здоровыхфорелей. 6Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Сег 1 п 1 С,Р., Ма 1 зЬегдег Я.д .Аа. И.З . аксай, Яс 1. ч. 126, аг 1. 1,р, 422-427. 1965.2. Осадчая Е.ф, Инфекционный.некроз гемопоэтической ткани, профилактика и меры борьбы. Рыбоводство и рыболовство, Р 3, с. 13-14,1974.