Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы

Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет Государственный комитет СССР по дедам изобретений и открытий(54) СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОЧНОИ ОБОЛОЧКИ ХЛОРЕЛЛЫИзобретение относится к микробиологической промышленности и касается приготовления белково-витаминных обогатителей кормов, используемых в сельском хозяйстве.Известен способ приготовления напитка из хлореллы, заключающийся в том, что свежую хлореллу суспендируют в воде, к суспенэии добавляют жидкую протеазу, продуцируемую микроорганизмами Вас 111 ця па 1 о, которая вызывает автолиэ хлореллы 11 .Недостатком известного способа является невысокий выход белковых веществ. 15Наиболее близким к изобретению решением является способ разрушения клеточной оболочке хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспенэии хлореллы, охлаждение 20 ее с последующим ферментативным гидролизом (2) .По этому способу гидролиз хлореллы проводят путем воздействия на оболочку цитолитическим ферментным препаратом, полученным из гриба Тг 1 сЬоЮее 1 итп гояещп.ферментный препарат (5) вносят и выдерживают в течение 17-48 ч с толуолом. 30 Перед введением ферментного препарата хлореллу стерилизуют (пропаривают) с 10 ч. воды в течение 1 ч и охлаждают до 40 оС.Недостатком этого способа являет-. ся длительность тепловой обработки (пропаривание до 1 ч и ферментативный гидролиэ до 17-48 ч), недостаточно полное разрушение клеток хлореллы, что снижает усвояемость ее белков при включении в корма для животных, и низкий выход (11 е) белковых веществ из клеток. Кроме того, недостатком способа является добавление толуола в гидролизуемую смесь и последующее его отделение,Целью иэобретеря является более полное разрушение клеточных оболочек хлореллы и увеличение тем самым выхода белковых веществ.Это достигается тем, что тепловую обработку суспенэии осуществляют при 85-95 С в течение 3-5 миу с последующим охлаждением до 45-48 С, а ферментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Тг 1 сйодегтпа 119 погцв 6 с в течение 1-3 ч.При этом культуру гриба Т.11 дпогищ 6 с обычно вносят в количестве250-400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы и ферментативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее тепловой обработки.Способ осуществляют следующим образом.Суспензию хлореллы с влажностью биомассы не менее 80 нагревают, например, на водяной бане при 85-95 С в течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48 С.о (ОЗатем проводят гидролиэ в течение 1-3 ч в присутствии культуры гриба Т,119 погцв б с, взятой в количестве 250-400 ед. С-Фермента на 100 г сухого веса хлореллы. 15После тепловой обработки Фермент и хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 г сухого вещества) при РН 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50 С.В случае разрушения клеточной оболочки высушенной хлореллы ферментативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее, тепловой обработки при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10;1.П р и м е, р 1. Пастообразную хлореллу (влажность биомассы не менее 80) нагревают на водяной бане 3-5 мин при 85 и 95 С и проводят гидролиз, используя культуру гриба Т.119 погцщ б с в количестве 400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы.35После тепловой обработки хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 г сухого вещества добавляют фермент) при РН 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50 С с периодичес ким перемешиванием,Для определения степени гидролиза клеток смесь центрифугируют 5 мин при 6000 об/мин и в надосадочной жидкости определяют количество 45 Растворимого белка.Данные исследований приведены втаблице. 20)тельной обработ- во растмин при ВремяФермен- тативногогидролиза (ин кубации) ч воримого белка, Ь С 85 С 55 0 1 2 3 3 3 3 5 5 5 5 5,3 7,0 8,6 17,0 16,5 16,2 16,8 Результаты показывают, то после гидролиза в течение 3 ч содержание белка в супернатанте составляет 17 от общего количества белка в пробе (в контроле 5,3), т.е. все белки из клеток перешли в раствор. Проведение предварительной тепловой обработ - ки хлореллы в течение 3 и 5 мин обеспечивает одинаковое количество растворимого белка.П р и м е р 2. К 100 г хлореллы, высушенной при 110 С, добавляют 5 гокультуры гриба Т.119 погцв 6 с (400 ед С-фермента на 100 г сухого веса) и проводят гидролиз аналогично примеру 1, но беэ предварительной тепловой обработки суспенэии клеток хлореллы, при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10:1.После гидролиэа содержание белка в супернатанте составляет 17 от общего его количества в образце.Преимуществом предлагаемого способа разрушения клеточной оболочки хлореллы является сокращение времени проведения ферментативного гидролиза примерно в шесть раэ, исключение добавления в гидролизуемую смесь толуола, являющегося токсичным, легко воспламеняющимся веществом, сокращение времени тепловой обработки до 5 мин со снижением температуры до 85-95 С, исключение тепловой обработки суспенэии высушенной хлореллы, сокращение расхода электроэнергии в 5-16 раэ и увеличение выхода белка в раствор до 17 от общего количества.Формула изобретения1. Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспенэии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью более полного разрушения клеточных оболочек и увеличения тем самым выхода белковых веществ, тепловую обработку суспенэии осуществляют при 85-98 С. в течение 3-5 мин с последуюащим охлаждением до 45-48 С, а ферментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Тг 1 сйос)егьа 11 сзпогцщ 6 с в течение 1-3 ч.2. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что культуру гриба Тг 1 сйодегва 1 щпогцв 6 с вносят в количестве 250-400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы,3. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что Ферментативному731935 Составитель О.ВеликославинскаяТехред Ж.Кастелевич Корректор М.Выгула Редактор Т.Шарганова Заказ 1578/2 Тираж 723 Подписное 11 НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал П 1 П Патент г. Ужгород, ул. Проектная, 4 гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее тепловой обработки.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Японии У 17945,кл. 36 (2) О, опублик. 1971.2. Авторское свидетельство СССРР 276886, кл. С 12 Р 13/06, 1968