Способ получения низина

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУСоюз Советских Социалистических Реслублик(51)М. Кл. С 12 Р 9/22 с присоединением заявки Нов Государственный комнтет СССР по дедам изобретеннй н открытий(72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растенийи бактериальных препаратов(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗИНА Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно производству низина, используемого в пищевой промышленности.Известен способ получения низина путем выращивания продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием, высаливанием, фильтрациейи высушиванием (11.Однако препарат, полученный известным способом, нестабилен при хранении.Цель изобретения - стабилизация активности низина в процессе хране-. ния.Это достигается тем, что продуцент выращивают на среде, содержащей молОчную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сорбиталем С ,20, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пастунйзин-перлит растворяют в 0,02 н.растворе НСВ, затемпроводят повторную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натрия напылением на казеинат натрия при их соотношении 1-2: 2,3-1,3Кроме того, выращивание ведут прирН 6,8-7,0,А с целью утилизации отходов ферментации, осадок после отделениякультуральной жидкости подвергаютгидролизу пектофоэтидином П 10 Х илиамилоризином и вводят в состав питательной среды в качестве источникаазота при повторной ферментации.Способ осуществляют следующим образом.Приготавливают экстракт кормовыхдрожжей. Для этого 250 г сухих кормовых дрожжей заливают 2,5 л теплой во-допроводной воды,настаивают 2 ч, кипятят на слабом огне в течение 15 мин,фильтруют и стерилизуют в автоклавепри 0;7 атм 20 мин, Добавляют в среду18-20 экстракта. до содержания в среде 60-70 мг/% аминного азота,Гидролизат отходов готовят следую:щим образом.Отходы (биомасса, молочные белки. с перлитом) получают фильтрацией через перлит культуральной жидкостипредыдущей .ферментации, выход с 20 лсоставляет 500-600 г, Отходы разбавляют водопроводной водой в соотноше3 -" 7073204нни 1:5, тщательно перемешивают до подвергают вакуум-Фильтрации и прооднородной массы и подогревают до . рывке. Объем полученного жидкого45 С по лучаемый рН 2,5-3,0 соответ- концентрата 400 мл, активностьствует оптимуму действия пектофоэти мкг/мл, общая активность 1,77 хдина П 10 Х; в случае амилоризина оп- м 10 мкг,выход от пены 96 или 90 7ти м Н 4 5 7 Ому р , - ,О. Фермент добавляютот Фильтрата, содержание сухих ве-в количестве 0,20-0,25 к гидролизуе- ществ 3,мому объему (ферменты преКварительно П р и м е р 2, К 18 л молочнойрастворяют в небольшом объеме воды). сыворотки добавляют 2,1 л ферментивГидролиз проводят в течение 24-30 ч ного гйдролизата отходов полученныхоЮпри 45 С с антисептиком хлороформом - 0 Указанным способом, среду стерилизуют,5 мл/л. По окончаниигидролиза смесь охлаждают до 28-30 фС, рН доводят докипятят 20-30 мин до исчезновения эа,8-7,0 изасевают 3-5 инокулятапаха. хлороформа; твердую фазу удаляют 18-20.часового возраста Зг, 8 асИ.з.фильт 1 ацйейили центрифугированием; Культивируют при постоянной авогидролиэат.стерелизуют при 0,7 атмматически регулируемой кислотности20 мин. Добавляют в среду 10-1215 среды в пределах 6,8-7,0 путем ввегидролизата до содержания в средедения 40 щелочи (ЙаОН или КОН).ь 0-70 мг/ аминного азота. Ферментацию заканчивают в момент заП ри м е р 1, К 18 л молочной сы-медления сдвига кислотности, автомароворотки добавляют 4 л (20) зкст- : тическиотмечаемого прибором. длиракта кормовых дрожжей, полученного 20 тельность ферментации 12-16 ч, Активзписанным способом. Среду стерилизуют ность к, ж. 150 мкг ф/мл, общая ак. -при 120 фС 20 мин, охлаждают до тивность 3 10 мкг. После фильтрации28-30 фС, доводят рН до 6,8-7,0, за- через Фильтро-перлит и промывки осад, севают 3-5 инокулята 18-20 часбвого ка водой с рН 2,3 объем фильтрата равозраста низинообразующего штамма 25 вен 20 л с активностью 145 мкг 9/мл.,81 гчбас 1 з. Культивируют при 28-30 С общая активность Фильтрата 2,9 мс постоянно автоматически регулируе-106 мкг, выход активности от куль.мой кислотностью среды в пределах рН турной жидкости 97. Одноступенчатым6,8-7,0 введением 40 щелочи (БаОН вспениванием получают 2 л пенногоили КОН). Ферментацию заканчивают в продукта с. 140 мкг я/мл активностьюумомент замедления сдвига кислотности, З 0 общая акТивность пены 2,80 10 мкгдавтоматически регистрируемого прибо-; "- После высаливания сухим Васб прово ром. длйтельность ферментации 12-1 бч, . дят Фильтрацию через перлит; раствоАктивность . культуральной жидкости , Ряют и фильтруют срезанную пасту нидостигает 4-6 тысяч ед/мл, или зина с перлитом, получаютуобъем100-150 мкг/мл. . З 5 концентрата К в количестве 400 млНачиная со второй ферментации пи- . с активностью 2,78 10 мкг, у-, что".тательной "средой"-Служит молочйая сы- " составляет 96 от фильтрата. Содервороткас 10-12 гидролиэата отходов жанне суких.веществ 2,5. учитываем(от 1-й и каждой последующей фермен- потери при высушивании (8-10), т,е.тации), полученного укаэанным спосо 2,78"106 - 0,28 10= 2,50 10,бом. Культуральную жидкость 1,2 и" - .ьвсех последующих ферментаций подвер-, . Для получения .количества порошкагают переработке по операциям. Так 2,50" 10 :20 (стандартная активностькультуральную жидкость, содержащую по Ту) = 125 г должны получить, из100 мкг/мл низина (общая активность них 10 г падает на сухой вес (2,5)2106 мкг) закисляют 18 НС до рН 44 125 г - 10 г = 115 г, Общего напол 2,2-2,5 и прогревают в течениенителя должно быть задано 115 г, т.е.3-5 мин до 95-1000 С, охлаждают до 57,2 г БаС 6 и столько"же казеината500 С и фильтруют через перлит. Твер-натрия (115:2=57,2), ИаСС добавляют:дую Фазу (отходы) направляют на гид- в 400 мл концентрата низина - К иролиз. Объем фильтрата 20 л, актив-, 50 напыляют на 57,2 г белкового в псевность 97 мкг/мл (общая активность . . доожиженйом слое. Сухого препарата1,94106 мкг), выход 97, Полученный получают 125 г с активностью 20 мкг,Фильтрат с активностью 97 мкг/млв мг сухого вещества, что составляподвергают вспениванию при рН 4,0 4 5 ет 86 от активности фильтрата.с сорбиталем С0,03. Объем пен- В таблице представлена активностьного"продукта 2 л, активность препарата низина при хранении в усло 920,1 мкг/мл, общая ахтивность виях холодильника (4 - 8 фС) в течЕние1,8410 6 мкг; выход активности в пе-года. (Определена методом диффузии вну от фильтрата 95;-"- "агар с тест-"культурой Васчсоадц 8 апзИз пенного продукта низйн "ВЫСали-Р 15. Погрешность метода 10-12).вают сухой ВаС 6 (25), рН 2,2-2,5.- ::;.Высоленный антибиотик подвергают ва- Предлагаемый. способ позволяет искуум-фильтрации .через перлит, Отде- пользовать недорогие и недефицитныейенную пасту ниэин-перлйтраствб-Ферменты, используемая, среда дешевле,ряют в 0,02 н растворе НС 8, й"снова д известной в 5-6 раз, получаемый преАктивность, ед/мг сухого препарата Сроки хранения в месяцах 0 ." 3 6 9 12 1 804+80 800+64 792+52 784+56 800+76 2 820+52 804+56 792+84 820+72 820+68 3 1040+76 976+76 936+96 984+88 984+84 Формула изобретения СоСтавитель С. Малютина1 ехред М.Рейвес Корректор М. Демчик Редактор Л, Письман Заказ 10626/1 1 ираж 531 Подписное ВЙИИПИ Государственного комитета СССРаЙФилиал ППП Патент г. Ужгород, ул. Проектная, 4 парат обладает стандартной активностью в 20 мкг/мл сухого вещества и 1. Способ получения низина путем выращивания продуцентав питательной среде на основе молочной сыворотки, с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием,высаливанием, фильтрацией и высушиванием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью стабилизации активности низина в процессе хранения, продуцент выращивают на среде,"содер-" жащей молочную сыворотку и экстракт кормовыхдрожжей, выращенных на рас тительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сорбиталем С, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пасту низин-перлит растворяют в 0,02 н. 35 растворе НСК,затем проводят повторстабилен при хранении в течение 2нет,ную фильтрацию иконцентрат высуши- "вают в присутствии"хлористого натриянапылениемна каэеинат натрия при ихсоотношении 1-2: 2,3-1,3,2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю- .щ и й с я тем, что выращивание ведут, при рН.6,8-7,0.3, Способ по п, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью утилиза"ции отходов ферментации, осадок после отделенйякультурййййойжидкостиподвергают гидролиэу пектофоэтидМомП 10 Х или амилоризином и вводят в со-став питательной среды в качествеисточника азота при повторной фермеитации.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент СССР Р 427516кл. С 12 0 9/12 1976.