Способ определения активности пищевого говяжьего пепсина

О П И С А Н И Е 1 ц 644446ИЗОБРЕТЕН И Я Союз Советских Совиалистических Республик) Прио т -3) Опублик 5) Дата опу ано 30.91.79. Бюллетень4елим изооретеии и открытий ликования описания 06.03,7(34) СПОСОБ ОПРЕДЕЛ ПИЩЕВОГО ГОВЯЖ ИЯ АКТИВНОСТИГО ПЕПСИНА ности,Посчто наввор яютнавескуютврляют сиспыту тигается тем, пепсина раст.го буфера, аата растворяоты и опредеия субстрататвором эталотавленная цель дос еску эталона свиного в растворе ацетатно испытуемого препар астворе соляной кисл корость створ аживан емым раствором и ра Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к производству сыра, и может быть использовано для анализа качества выпускаемого пищерого го вяжьего пепсина,Известны способы определения активности пищевого пепсина.К ним относятся: способ определения активности по процентному содержанию фермента, который предусматривает растворение навески эталона пепсина и испытуемого препарата в ацетатном буфере, определение скорости створ аживания субстрата испытуемым раствором и раствором эталона с последующим расчетом активности. В качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь 11.Однако известный способ пригоден только для свиного пепсина и не пригоден для говяжьего пепсина из-за того, что говяжий пенсии плохо растворяется в ацетатном буфере.Наиболее близким к предложенному изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения активности препарата сычужного фермента по авт. св.296553, заключающийсяв том, что растворяют навески эталона сычужного фермента и испытуемого препарата в растворителе с последующим определением скорости створаживания натурального молока испытуемым раствором препарата и раствором эталона и расчетом активности по формулам. Прн этом растворение испытуемого препарата - . навески препарата сычужного фермента - осуществляют в растворе неорганической кислоты, например 0,001 н, соляной, имеющей рН от 2,0 до 5,0, а в качестве субстрата используют натуральное молоко 2.Известный способ имеет значительные погрешности из-за нестабильности субстрата, а также из-за того, что сычужный фермент несколько отличается по своим протеолитическим и другим биохимическим свойствам от пепсина, вырабатываемого у взрослых жвачных млекопитающих, известного под названием говяжьепо пищевого пепсина. Способ требует значительных затрат времени.Целью изобретения является ускорение проведения анализа и повышения его точна с последующим расчетом активности по математической формуле. При этом в качестве субстрата используют молочно-аце татную смесь.Активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формулеА=К10где К 1 и К, - коэффициенты;К = 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;К 2 = 5,для активности пищевого говяжьего пепсина порядка 100000 у. е.; 15Т 1 - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;Т, - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек. 20Выполнение предложенного способа иллюстрируется следующим примером.На аналитических весах отвешивают 0,5 г чистого неразбавленного пепсина и 1 г (порядка 100000 у, е.) разбавленного пищевого говяжьего пепсина и растворяют их порознь в 500 мл 0,05 н, соляной кисло ты. В течение дня активность приготовленных растворов не меняется.Раствор эталона пепсина готовят с та ким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось 0,1 мг чистого 100 О/О-ного свиного пепсина, преимущественно Олайненского химзавода,Эталон свиного пепсина растворяют в З 5 0,1 М ацетатном буфере, который состоит из 45 г гидроокиси натрия и 92 г ледяной уксусной кислоты, растворенных в 1 л дистиллированной воды и имеет рН от 5,00 до 5,1. 40После этого приготавливают молочноацетатную смесь. Для этого смешивают равные объемы свежего молока и 1 М ацетатного буфера. Молоко можно брать пастеризованное или сырое, 45Приготовленную молочно - ацетатную смесь разливают по 50 мл в химические стаканы емкостью 100 мл и ставят в водяную баню, температура в которой поддерживается в течение всего времени прове дения анализа строго постоянной и составляет 25 С.Примерно через 40 мин температура молочно-ацетатной смеси в стаканчиках 55 повышается до 25 С, и можно приступать к створаживанию. Для этого в один стакан с молочно-ацетатной смесью вносят пипеткой 1 мл раствораэталона пепсина, одновременно вклпочая секундомер, и быстро 60 перемешивают, Затем шпателем или пипеткой поднимают смесь по стенке стакана.По появлении хлопьев казеина молока секундомер останавливают, отмечая время свертывания в секундах,65 Проводят 2 - 3 определения и берут среднее значение. Приготовленным раствором эталона можно пользоваться в течение двух-трех суток.Точно таким же образом определяют время свертывания той же молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина,Актвиность пепсина определяют в аосолютных единицах чистого фермента по формулеА=КТ 2где К = 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;К 2 = 5 для активности пищевого говяжьего пепсина порядка 100000 у. е.;Т, - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;Т, - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек.Пример расчета 1, Для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина Т 1 70 сек. Т 2 140 сек. Активность 10 М =5%.70 140Пример расчета 2, Для разбавленного (порядка 100 000 у. е.) пищевого говяжьего пепсина Т, 72 сек; Т, 180 сек.5 Х 72Активность 180 -- 2 /О.Изобретение позволяет повысить точность определения и сократить время анализа.Таким образом, экономическая эффективность изобретения состоит в предотвращении брака при производстве сыров и более экономном расходовании применяемого в промышленности ферментного препарата - пищевого пепсина.Формула изобретенияСпособ определения активности пищевого говяжьего пепсина, предусматривающий растворение навески эталона фермента и испытуемого препарата в растворе соляной кислоты,определение скорости створаживания субстрата испытуемым раствором и раствором эталона с последующим расчетом активности по математической формуле, отличающийся тем, что, с целью ускорения проведения анализа и повышения его точности, в качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь, а активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формулеА=К2где К и К 2 - коэффициенты;К = 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;644446 Составитель Ю, Юхнович Техред С, Антипенко Корректор И, Симкина Редактор Н. Грязнова Заказ 1132/32 Изд.109 Тираж 586 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип, Харьк. фил. пред, Патент К 2 -- 5 для активности пищевого говяжьего пепсина поря 1 дка 100000 у. е,;Т, - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;Т, - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек. Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе: 1. ОСТ 49-53-73 Пепсин пищевой сви 5 ной. 2. Авторское свидетельство СССР296553, кл, А 23 С 7/00, 1968.