Способ стимулирования образования -эндотоксина

О П И С А Н И Е д 1147 Ю 99ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистических Республик) Приоритет Совета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий Опубликовано 25,05.75, Бюллетень1 Дата опубликования описания 27,12.75(72) Авторизобретен Г. М. Ивановоярский государственный университе 1) Заявитель 54) СПОСОБ СТИМУЛИРОВАНИЯ ОБРАЗОВА б-ЭНДОТОКСИ НАе относится ка именно,к равления механи ет быть использ ра кристаллов бпрепаратах, изго ы Вас 111 цз 11 тцг 1 пд кт - 2,5 - 3,5%; КНР 04 - ят,производные акридин а жевый, акридиновый жели 5 - 100 мкгlмл. кукурузныи экстра0,68% и др.) в,нос (акридиновый ора тый) в концентраци Изве сталлов паратах для про сред.стен способ ловышения титр б-эндотоксина,в бактериальньпутем применения благопр, уцирования кристаллов питат а крих зрриятных ельных Числоличиваетоякрасителей(слабых лувеличила ристаллов,на одну эндо от 1,16 до 1,69 (при канц от 5 до 100 мкг/мл), У родуцентов,кристаллов) тся от 0,56 до 1,03,спору увеентр,ациях штаммов это числ,) Цель изооретения - увеличение размеракристаллов б-эндотоксина и счх титра. т,измерсина, синв опытах(био Для этого в известные питательныеблагоприятные для кристаллообразнапример, картофельную среду (картный отвар - 1 л, пептон - 10 г, сахарповаренная соль - следы, сухой агадиррН - 7,2); минеральную среду (пе30 г, Ха,НР 04 - 5 г, КН,Р 04 - 1 г,2 г, МдЯ 04 - 0,1 г, источник, сахараагар - 1,5%вода - 1000 мл); срепромышленного разведения (сахароза -середы, вания, офельтого по на5 г, - 20%, птон - 1 ч аС 1 -тролю Максималино переносимые кон акридиновых красителей для рази мов Вас 111 цз йцг 1 препяз различны ваются в зависимости от содержан тельной среде усвояемых сахарав. центрации ых штамт увеличиия в пита - 2 г,для 2,5%Изобретени микробиологии м ич еского уп синтеза и мож вышен,ия тит бактериальных бактерий прупп техническои методам хизмами биовано для поэндотооос 1 ина в товляемых из 1 епяз. Увеличение .размеров иристаллов указы. ает на повышение активности культур Ва 111 цз Йцг 1 препяз. В тао. ний разме тез,и,ро,ван с примене О ме прическ Плох, инскчпце приведены результат рсв крлсталлов б-эндоток ого Вас 111 цз йцг 1 препяз нпем акридинового жел ая ооработка приведена ому (1961), Ы определеПараметры кристаллов пг Контроль 160 0,54 0,0213 0,0216 ширинадлина 160 1,24 12,7 0,0263 50 мкг/мл 160 0,03383 0,03275 0,97 0,43 ширинадлина 160 1,62 0,0246 0,38 1 1,6 100 лскг/мл 159 0,0157 0,0259 1,02 0,48 0,02646 0,03372 18,3 ширинадлина 1,85 59 0,61 18,2 Размеры кристаллов, синтезированных при действии акридинового красителя, отличаютоя от 1 размеров кристаллов, синтезированных в среде краоителя.Пример осуществления способа.1. С использованием агаризованной картофельной среды.Готовят растворы производных акридин (начрпмер акридинового желтого) с концентрацией 50 мг/мл, 100 л 1 г/мл и 200 мг/мл, До (стерилизации приготовленной картофельной среды на 1 л ее (среды) добавляют 1 мл производного акридина с концентрацией 50 л 1 г/мл и получают картофельную среду, содержащую 50 мкг/,ил производного акридина, или добавляют 1 мл раствора производного акридина с концентрацией 100 мг/мл и ,получают картофельную среду с концентрацией 100 мкг/лл производного акридина, либо добавляют 1 мл раствора производного акридина с концентрацией 200 мг/лил и получают картофельную среду с концентрацией 200 мкг/мл производного ацридина,Внесенный ироизводный акридина перемеБ 1 ивают. Среды стерилизуют при .давлении 1 атм в течение 20 мин, Готовую пнтательнуо среду разливают,в чашки Петри, делают покев Вас 111 цз 1 пцппрепз 1 з и культивируют в абсолютной темноте,в течение 10 суток при температуре 30 С.Результаты: ин:ектицидность культуры Вас 11 цв йцппрепз 1 з, выращенный на картофельной среде с 75 мкг/мл акридинового оранжевого, увеличивается по сравнению с ансекпицидностью этой культуры, выращенной на картофельной средене содержащей ак 1 ридиновый оранжевый, на 22,3% дополнительно.2, С использованием жидкой питательной среды,для,промышленного разведения.К 1 л этой среды добавляют 1 мл раствора акридинового оранжевого концентрацией 50 мг/мл и получают среду с концентрацией акридинового оранжевого 50 мкг/мл, Для получения среды, содержащей 75 мкг/мл, посту пают следующим образом: к 1 л среды дляпромышленного,разведения добавляют 1 м,г раствора акр идинового ор анжевого концентрацией 75 мг/л 1 л. Акридиновый оранжевый перемешивают со средой, Среду стерилизуют 1 О в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин. Для засева 100 л 1 л питательной ореды берут 1 мл инокулята, содержащего 15 10 спор в 1 мл. Культивирование Вас 111 цв йцппреп з 1 з ведут на магнитной качалке в абсолютной темноте в течение 10 суток при температуре 30 С. Затем измеряют средний объем кристаллов б-эндотоксина, Определяют отношение числа,кристаллов к числу спор и титр 20 кристаллов б-эндотоксина.Объем кристаллов на среде для промышленного разведения, содержащей 50 мкг/л,г акридинового оранжевого, в 1,2 раза оольше, чем объем кристаллов б-эндотоксина на среде, не содержащей акридиновый оранжевый; объем кристаллов б-эндотоксина яа среде с 75 мкг/м,г акридинового оранжевого в 1,7 раза больше, чем на среде без акридичового оранже.вого.Отношение числа,кристаллов к числу спорна среде оез акридинового оранжевого равно 1,2; на среде, содержащей 50 мкг/мл акридинового оранжевого, равно 1,5 и на среде с 75 лкгlмл акридинового оранжевого - 1,7.Титр, кристаллов б-эндотоксина на средедлч промышленного разведения, содержащей 50 мкг/мл акридинового оранжевого, увеличился по сравнению с титром кристаллов на среде оез акридинэвого оранжевого в 1,6,ра за, а на среде с 75 л 1 кг/мл а:кридиновогоора 1 нжевого увеличился в 2 раза.471099 Составитель Г, Иванов Техред Л. Казачкова Корректор И. Симкнна Редактор Н, Козлова Заказ 937/1418 Изд.829 Тираж 619 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4 ДТип. Харьк. фил. пред. Патент Титр спор в результате выращивания культуры в присутствии акридинового оранжевого не уменьшается,по сравнению с титром спор на среде без акридинового оранжевого, а напротив, имеет тенденцию,к увеличению. Так, титр спор на среде для;промышленного разведения, содержащей акридиновый оранжевый в концентрации от 50 мкг/л 1,г до 75 мкг/мл, увеличился на 4. 10 - 8 10. 3. Стимул 1 ирование биоаинтеза б-эндотоксина происходит также на минеральной среде при добавлении в нее производных акри.дина.Предмет изюбретения 5 Способ стимулирования юбразования б-эндотокоина при,культивировании Вас 111 цв йц ппрепз 18 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью увели чения,размеров кристалчов б-эндотоксина,иих титра, в питательную среду дополнительно вносят производные акридина в концентрации 5 - 100 мкг/мл.