Способ получения рифамицина в.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 11 Ц 465795 Союз Йвветскик Соцналнстнческнк Рвспублнк(61) Зависимый от патента 51) л.С 1(33) Италия дарственный каммт Совета Мнннстроа СССРпо делам нзсбретвннйн открытнй Опубликовано 30,03,75. Бюллетень1 Дата опубликования описания 26.08.75(72 Авторы зобретени ИностранцыРичард Джон Уайт (Великобритания) анкарло Ланчини(Италия) остранная фирм Группо Лепетит71) Заявитель 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИФАМИЦИН Овсяный агар. Рост сильныи, повергладкая, вегетативный мицелий зелен оранжевый с тенью янтарного цвета, в ный мицелий отсутствует; желто-зелен 5 створимый пигмент.Дрожжевой экстракт, сахарный агарсильный, морщинистая поверхность, тивный мицелий янтарно-коричневый с жево-коричневыми краями, следы роз 10 воздушного мицелия; темный янтарноневый растворимый пигмент.Сахарный агар Эмерсона. Рост сиповерхность гладкая, вегетативный ми оранжевый, воздушный мицелий отсутс 15 золотисто-желтый растворимый пигмент хность овато- оздушый ра. Рост вегета- орановатокорльный, целий твует; Агар Беннета, Рост нистая поверхность,янтарно-коричневый с 20 краями, следы розов лия; темный янтарно мый пигмент. Агар Пенассейя. Р гл адкая поверхность,25 светло-оранжевый, воь морщимицелий ичневыми ого мице- раствори сильныи, очевегетативныйоранжево-коатого воздушн-коричневый Изобретение относится к производству антибиотиков.Известен способ получения рифамицина В, заключающийся в том, что культуру 51 гер 1 отпусез гпейИеггапе 1 АТСС 13685 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в течение 24 - 120 час при температуре 25 - 37 С, подкисленный фильтр ат культу- ральной жидкости экстрагируют органическим растворителем, например этилацетатом органический экстракт экстрагируют фосфатным буфером рН 7,0 - 7,5 с последующим выделением целевого продукта.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.Достигается это тем, что в качестве продуцента рифамицина В используют ранее не описанный штамм АТСС 21789 Ягер 1 отусез гпей 1 еггапе 1.Предложенный штамм Ягер 1 огпусез гпей 1 еггапе 1 АТСС 21789 имеет следующие особенности на различных питательных средах (определение окраски проводят по методу Мерца и Поля). ост сильный, тонкая и вегетативный мицелий здушного мицелия нет;45 50 55 б 0 б 5 следы светло-желтого растворимого пигмента,Дрожжевой экстракт, мелассный агар. Рост сильный, морщинистая поверхность, вегетативный мицелий горело-коричневого цвета с оранжево-коричневыми краями, следы розоватого воздушного мицелия; темно-желтый, цвета охры, растворимый пигмент.Сахарный агар по Чепеку-Доксу. Рост сильный, гладкая поверхность, вегетативный мицелий светло-оранжевый, воздушного мицелия нет, Светлый, цвета лимона, растворимый пигмент.Картофельный агар. Сильный рост, гладкая поверхность; янтарно-розовый вегетативный мицелий.Сахарно-аспарагиновый агар. Рост сильный, тонкая и гладкая поверхность, светлоораняевый вегетативный мицелий; воздушного мицелия нет, растворимых пигментов нет.Агар Придхэма. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий светло- оранжевый с маленькими красными пятнами, следы розоватого воздушного мицелия, желтый растворимый пигмент.Сахарный триптоновый агар. Сильный рост, морщинистая поверхность, оранжевый вегетативный мицелий, воздушного мицелия нет; желтый растворимый пигмент.Кобальтовый агар по Треснеру и Хикки. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий янтарно-розовый, следы розового воздушного мицелия; янтарно-розовый растворимый пигмент.Тирозиновый агар. Сильный рост, морщинистая поверхность, вегетативный мицелий темно-оранжевый коричневатого оттенка, воздушный мицелий отсутствует, желтый растворимый пигмент; тирозиназа - ярко положительная реакция.Агар на основании кальциевой соли яблочной кислоты. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий светло-оранжевый, воздушного мицелия нет; светлый, лимонного цвета растворимый пигмент; незначительное усвоение кальциевой соли яблочной кислоты.Желатин. Пигментации нет; разяижение - положительно.Нитратный бульон. Поверхностный рост с розоватым воздушным мицелием, восстановление нитратов; бульон становится желтоватым,Лакмусовое молоко. Ни коагулирования, ни пептонизации.Снятое молоко. Сильный рост, гладкая поверхность, вегетативный мицелий оранжевый, желто-золотой растворимый пигмент, воздушного мицелия нет; казеиновый гидролиз - положительная реакция.Пептонно-дрожжевой экстракт, железный агар. Средний рост, тонкая и гладкая поверхность, бесцветный вегетативный мицелий, воздушного мицелия нет; растворимого пигмента нет; выделения сероводорода нет. 5 10 15 20 25 30 35 40 Крахмальный агар. Сильный рост, гладкая поверхность, Вегетативный мицелий темноораняевый с коричневатым оттенком, большой розоватый воздушный мицелий, хромовояелтый растворимый пигмент; крахмальный гидролиз - отрицательная реакция.П р и м е р 1. Взвесь 10 г рифамицина В в 10 л воды обрабатывают стехиометрическим количеством гидроокиси натрия, причем получают раствор мононатриевой соли рифамицина В с рН 4,1. Через 20 дней при комнатной температуре рН раствора доводят до 2,2 путем добавления соляной кислоты, затем экстрагируют этилацетатом. Экстракт упаривают до 50 мл. Неизменившийся кристаллизовавшийся рифамицин В отфильтровывают, фильтрат выливают в 2 л петролейного эфира. Сырой осадок собирают и очищают противоточным делением в аппарате Крэйга (200 трубок), применяя смесь из фосфатного буфера (рН 7,6); бутанола: лигроина 1: 1: : 0,25. После 170 прохождений максимальная активность обнаруяивается в 160-ой трубке. Растворитель из 155-ой - 165-ой трубок упаривают досуха; образуется сырой рифамицин 3.В раствор 10 г рифамицина В в смеси 1000 мл метанола и 2000 мл ацетона добавляют раствор 50 г нитрита натрия в 500 мл воды при 0 С. При внешнем охлаждении постепенно добавляют 2500 мл 10 О/о-ной водной соляной кислоты, вызывая образование рифамицина О, который выдерживают в растворе в присутствии ацетона. Вследствие сильной кислотности среды рифамицин О постепенно переводится в рифамицин Я; преобразование заканчивается через 8 час при 0 - 5 С, Реакционную смесь выливают в большое количество воды и экстрагируют этилацетатом. Экстракт тщательно промывают водой, концентрируют в вакууме до объема -50 мл и выливают в500 мл петролейного эфира. Рифамицин 8 собирают и выкристаллизовывают из метанола. Выход 6,5 г. Пример 2, Смесь 13 г рифамицина Я, 4,8 г основания Шиффа, полученного путем конденсирования экви моля рных количеств трет,-бутиламина и формальдегида, 1,5 г трет.-бутиламина, 7,2 г двуокиси марганца и 130 мл тетрагидрофурана 6 час кипятят с обратным холодильником. После фильтрации твердого вещества фильтр ат выливают в 350 мл этилацетата и 180 мл воды, рН доводят до 7,0 путем добавления разбавленной серной кислоты; органический слой отделяют, промывают, высушивают и концентрируют в вакууме до объема -100 мл. Затем добавляют 4,3 г 1-амино-метил-пиперазина, смесь 2 час выдерживают при комнатной температуре.Путем разбавления петролейным эфиром осаждают трет.-бутил-аминную соль, из которой общеизвестными способами можно выде лить 3- (4-метил-пиперазинилиминометил)Заказ 1517/19 Изд. Мц 1256 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 рифамицин 5 Ч с удовлетворительным выходом. Т. пл, 183 - 188 С (с разложением). Предмет изобретенияСпособ получения рифамицина В путем выращивания культуры Ягер 1 о 1 пусез гпейеггапе 1 на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в аэробных условиях и выделения целевого продукта из фильтрата культуральной жидкости, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения 5 выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм АТСС 21789 Ягер 1 отусез гпей 1 еггапе 1.