Способ получения-лизина

( ) 4 И 890 Союз Советекии Социапиотичеаоа РапубййаПАТИН М.Кл, С 12 й 13/06 2) Приоритет 20.12.673) Япония 1194/ осударотвенный комитетСовета Министров СССРпо делам изооретенийи открытий 3) УДК 576.809.3(Япония)Иностранная фиКиова Хакко Когио(Япония) тсунобу Тана коро и Матсуйоси Окии 7) Заявит рмаКо, Лтд НА тельном агаремутные, блестящиКосой агар Питательный бульон оФизиологическиеОпитамальная температураОптимальное значе 5 ние рНПотребление кисло- рода акмусовое молоко о желатинаСероводородИндолКрахмалНитрат Кдтдлд,; УреаздФерментация углеводородовзо(61) Зависимый от патента -) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-Л Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения 1-лизина.Известен способ получения 1-лизина культивированием штаммов Вгеч 1 Ьас 1 епцпт и Аг 1 тгоЬас 1 ег в аэробных условиях в водной питательной среде, содержащей источники углерода, например глюкозу, источники азота и неорганические соединения.Для получения высокого лизина на дешевом сырье по предлагаемому способу используют новые мутантные штаммы Вгеч 1 Ьас 1 епшп се 1 одц 1 апт 1 сцпт 2473-МРАТСС 21297 и Аг 1 ЬгоЬасег рага 11 пецэ 2411-ХРАТСС 21298, полученные из штаммов Вгеч 1 Ьас 1 епцт 1 е 1 оц 1 ц 1 апт 1 сцгп АТСС 15588 и АгйгоЬас 1 ег рага%пецз АТСС 15591 обработкой И-метил- -Х-нитро-М-нитрозогуанидином. Эти штаммы способны синтезировать 1-лизин с высоким выходом, используют в качестве основного источника углерода углеводороды, Оба штамм а деф ицитн ы по метионину.Ниже приводится биологическая характеристика штаммов, ВгечЬас 1 епцгп 1 е 1 од 1 ц 1 агп 1 сцгп 2473-ХРАТСС 21297.Морфологические свойства. Палочки размер клеток 0,7 - 0,9 Х 0,8 - 3,0 як, длинные клетки наблюдаются редко, споры не образуются, неподвижны.Культуральные свойства. Колонии на питаТочечные, гладкие, цельные.Умеренный рост, нитевидная форма, блестящая,красноватооранжевая,маслянистая.Слегкд мутная, на поверхности напоминающаямембрану, компактныйосадок.характеристики25 - 37 С, наилучший, ростпри 37"С.6,0 - 8,0.Аэробная, случайно анаэробная.Не изменяется или щелочная реакция,Не ожпжается.Не образуется.Нс образуется.Не гидролизуетсяВосстанавливается доинтрига.Положительная.П еложительн а я.Штамм растет хорошо,потребляя н-парафин вкдчестве единственногоисточника углерода и вырабатывает кетоглутаро.вую кислоту, глютаминовую кислоту и аланин.Усвояемость угле- Из глюкозы, фруктозы и водов сукрозы,вырабатываетсяничтожное количество кислот, мальтоза не утилизируется.Требования к питательной среде - нуждается в метионине Аг 1 ЬгоЬас 1 ег рагаП 1 пецз 2411-ИРАТСС 21298.Морфологические характеристики, Палочки обычно 0,8 - 1,21,3 лк. Клетки различаются по размеру и форме. Формы неоднородныс: кривые, вздутые, или разветвленные.1-1 аблюдаются также удлиненные клетки и коккоидные клетки. Неподвижны. Реакция Грамма переменная, Удлиненные клетки про.являются как грам-отрицательные, коккоидные клетки - грамм-положительные.Характеристика культурыКолония на пита-Обильный рост, круглая тельном агаре гладкая, целиком светлая,желтовато-коричневая, непрозрачная, блестящая. Косой агар Обильный рост, нитевидные формы, возвышенная или плоская, блестящая, светло-желтая до серовато-коричневого, маслянистая.Питательный буль- Слегка мутная, легкий он хлопьевидный осадокФизиологические характеристикиОптимальная тем - 30 С, слабый рост припература 37 С.Оптимальное значение рН 6,0 - 8,0.Потребление кисло- Аэробная, случайно анарода эробная,Лакмусовое молоко Не изменяется или щелочная.Желатина Не ожижаетсяСероводород Не образуется.Индол Не образуется,Крахмал Не гидролизуется.Нитрат Не восстанавливается донитрита.Каталаза Положительная.Уреаза Положительная.В качестве основного источника углеродаиспользуют углеводороды, в том числе н-парафины С 1 о - С.о, ароматические углеводороды: бензол, ксилол, толуол; газообразные углеводороды: метан, этан, пропан, бутан; нефтяные фракции: керосин, легкие масла; сыруюнефть.В питательную среду могут вводиться идругие источники углерода - сахара, органические кислоты.В качестве источника азота используютобычно применяемые для этой цели аммонийные соли, аммиак, мочевину, кукурузный, 4дрожжевой или мясной экстракт, рыбную муку и т.п.Неорганические соединения, входящие впитательную среду, включают сульфат маг ния, фосфаты натрия и калия, сульфат двухвалентного железа, хлориды натрия и каль.ция, сульфаты цинка, марганца и др.Процесс ферментации проводят- в аэробныхусловиях при встряхивании или перемешива.10 нии, при 20 - 45 С и рН 60 - 80 рН среды входе ферментации регулируется подачей аммиака или гидроокиси натрия.Выделение лизина из культуральной жидкости проводят любым известным способом.15 П р и м ер 1. Штамм ВгеиЬас 1 ег 1 цпч 1 се 1 од 1 ц 1 апч 1 сцпч2473-ХР21297 культивируют на стерильной питательной среде следующего состава, %:и парафины С 12 - С,7 5КНР 04 0,2ИагНРО 0,2Мдьо 4 7 н,о 0,1Ре 804 7 Н,О 0,001Мп 8 044 Н 20 0,001 25 Хп 804 7 Н 20 0,001ХН 4 ХОз 1КХ - амин (гидролизат казеина) 0,5рН 70В питательную среду добавляют 2/о стеризо лизованного СаСОзПроцесс ведут при 28 С и аэробном встряхивании в течение 4 дней. рН поддерживаютна нейтральном уровне путем добавления аммиака. В питательной среде накапливается 35 3,2 яг/лл лизина.Выделение 1-лизина проводят с помощьюионообменной смолы Р 1 а 1 оп 5 КФ 1 в Н-форме. Элюирование осуществляют аммиачнойводой.40 Пр имер 2. Процесс проводят как в примере 1, только с культурой Аг 1 ЬгоЬас 1 ег рагай 1 пецз2411-г 1 РАТСС 21298, В питательную среду вместо КХ-амина и МН 4 ХОовводят 0,5/, дрожжевого экстракта и 1/о 45 МН 4 С 1,Через 96 час выращивания в культуральной жидкости накапливается 3,4 мг/лл лизина. 20 Предмет изобретения 50 1. Способ получения /-лизина культивированием штаммов ВгеиЬас 1 епшп и Аг 1 ЬгоЬас 1 ег в аэробных условиях на водной пита тельной среде, содержащей источники углерода, азота и неорганичеокие соединения, отличаюи 1 ийся тем, что, с целью получения высокого лизина на дешевом сырье, используют штаммы Вгеъ 1 Ьас 1 ег 1 цгп 1 се 1 од 1 ц 1 аппсцгп 60 2473-ХРАТСС 21297 и Аг 1 ЬгоЬас 1 ег рага 1- 11 пецз 2411-ХРАТСС 21298, полученные из штаммов ВгеиЬас 1 ег 1 цгп 1 се 1 од 1 ц 1 аппсцгп АТСС 15588 и АгйгоЬас 1 ег рагаП 1 пецз АТСС 15591 обработкой И-метил Х-нитро-К-нитро зогуанидином.415890 Составитель Г. ГолеваТехред Т. Миронова Редактор В. Блохина Корректор В. Брыкснна Заказ 3070 Изд, М 1288 Тираж 456 ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раугиская наб., д. 4/511 одписио Загорская типография 52. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют углеводороды, например и-парафины Сто - Сзо,ароматическиеуглеводороды,нефть. 6углеводороды, газообразные нефтяные фракции, сырую