Библиотека

О П И С А Н И Е 370228ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союв Советски Социалистическив Республин3 а виси мое от а вт. свидетел ьстваЗаявлено 23,1.1971 ( 1625089,28-13, Кл, С 12 с 1 1/02С 07 с 5100 с присоединением заявкииоритет Комитет по делам аобретений и открытий при Совете Министров СССРОпубликовано 15,11.1973, БюллетеньДата опубликования описания 21,1 Ч.19,3.11(088.8) 1НА Ег 15 ЛИО Авторыизобретен И. И. Старовойтов, Л. А. Головлева, Г. К. Скрябин, В. Н. Кулако и Л. В. Андреев Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССРаявител ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2,6-НАФТАЛИНДИКАРБОНО КИСЛОТЫМд 5047 НвО Ре 504 7 НвО СаС 1 в 6 НвО СцБО 5 Н.О Н,РО, ХпЯ 04 Н 0 Мп 504 Н 0 ХавМо 04 2 НвО С, 6 НвО 0,05 1 0,0 0,01 Раствор икроэле ментов 0,0020,00060,0020,00030,00030,0005 5 К 2 НР 04 КН 2 Р 04 МНИОз 10,0 1,0 2,0 Изобретение относится к микробиологической промышленности.Известен способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты (НДКК) химическим путем прямым окислением 2,6-диметилнафталина (ДМН).Предлагаемый способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты является более простым по сравнению с известным.Он дает возможность проводить окисление при помощи микроорганизмов рода Рзецйогпопаз, выращенных на среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, в частности вид рцИа штамм Р, а также микроорганизмы рода Уосап 11 а, выращенные на среде, содержащей в качестве источника углерода н-алканы, в частности вид ораса штамм 264 А. Процесс окисления ведут при атмосферном давлении при температуре 28 - 30 С без образования побочных продуктов.П р и м е р 1, Культуру Рзецйотпопаз поддерживают на мясопептонном атаре (МПА), выращивают в течение суток на среде МПА и суспензию выросшей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой, разлитой по 50 мл.Состав среды следующий, мл: 10 СоС 1 6 Н.О 0,0005Глюкоза 4,0Одновременно с засевом в колбы вносятследовые количества 2,6-ДМН и после инкубации в течение 20 час при 30 С в колбах на 15 качалке вносят 30 мг 2,6-ДМН. Ферментациязаканчивается спустя 48 час. Культуральную жидкость центрифугируют при 10000 об/лин, упаривают досуха на роторном испарителе при 50 С. Сухой остаток экстр агируют 20 10%-ным раствором уксусной кислоты в диэтиловом эфире для удаления неиспользованной глюкозы. К сухому остатку после экстракции добавляют 25%-ный раствор ХНОН. Нерастворимый остаток отфильтровывают и от брасывают. Фильтрат подкисляют ледянойСНСООН до рН 6,0 и оставляют на холоде, Выпавшие кристаллы ам моний ной соли 2,6-НДКК отфильтровываютпромывают небольшими порциями дистиллированной води ЗО и используют для идентификации. Идентичность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами ИК-а 1 Ф спектроскопии (1 Ф-спектр Х 277-1; 286+1; 297-+1 растворитель аммиак - изопропанол 6: 1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия в системе метанол; аммиак: диметилформамид 2: 2: 1 И - 0,28 и на силикагеле (Ьц 1 о) в системе абсолютный этанол: аммиак 15: 1, йЯ - 0,31. Т. пл, свыше 300 С с разложением.П р им ер 2. Культуру Мосагй 1 а поддерживают на агаризованной среде Бушпель-Хааса с гексадексаном в качестве источника углерода, выращивают в течение двух суток и суспензию выросшей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой 8 - Е, разлитой по 50 мл.Состав среды, г/л:МД 504 7 НОИаС 0,8 0,5 0,7 1,5 КНР 04(МН 4) НР 04Вода водопроводная до 1 л,КНР 04 и (ИН 4),НР 04 стерилизуются отдельно на дистиллированной воде.Гексадекан добавляется дробно в течение трех дней в количестве 10 г/л,Через 24 час после инокулирования в среду вносят 50 мг 2,6-ДМН, Процесс трансформации прослеживают с помощью хроматографии. Окисление прекращают на пятые сутки, культуральную жидкость упаривают досуха на роторном испарителе при 55 С, осадок обрабатывают эфиром для удаления, парафина и алкилнафталина. Остаток растворяют в аммиаке, прогоняют через колонку с окисью алюминия, элюируя кислоту с колонки смесью аммиака и пропилового спирта, экстракт упаривают досуха и получают аммонийную соль 2,6-НДКК кислоты. Идентичность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами ИК-а и 1 Ф спектроскопии (1 Ф-спектр Хш 277+ 1, 286 1, 297+ 1, растворитель - аммиак: изопропанол 6: 1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия в системе метанол: аммиак: диметилформамнд 2: 2: 1, К - 0,28 и на силикагеле (81 ц 1 о), в системе абсолютный этанол: аммиак 15: 1, И - 0,31. Т. пл. свыше 300 С с разложением. Характеристика штамма Р. Выделен из почвенных образцов, взятых на территории Запорожского коксохимического завода в местах загрузки нафталина.Культуральные признаки. Колонии на твердых питательных средах гладкие, плоские, блестящие, бесцветные или серовато-белые. На стандартной среде, предложенной Кппед-еаза образует флюоресцирующий пигмент.Морфология культуры. Клетки палочковидные с округленными концами, 1,5 - З,ОХ 0,6 л, подвижные с двумя-тремя полярными жгутиками, грамм-отрицательные.Экологические признаки. Растет при 4 С,оптимум роста при 25" С, не растет при 41 С.Физиологические признаки. Растет на обычных питательных средах, на синтетическихсредах растет предпочтительнее с нитратнойформой азота, чем с аммиачной. Желатину неразжижает, молоко не изменяет, индол не продуцирует, Культура обладает запахом 3-метиламина. Нитраты восстанавливает.Биохимические признаки. Трансформируетароматические соединения нафталиновогоряда в соокислительных условиях.Характеристика штамма 264 А. Выделен изактивных илов Ангарского нефтеперерабатывающего завода.Культуральные признаки. Колонии на мясопептонном агаре пастообразные, гладкие,блестящие, розово-палевые; колонии на суслоагаре - слизистые, водянистые, розоватые.Морфология культуры. 24-часовая культур ана мясопептонном бульоне имеет вид крупныхпалочек и нитей, искривленных с отчетливымветвлением, длина отдельных клеток до 20 ц.Через двое суток культура распадается на кокковидные фрагменты и имеет вид конгломератов из кокков.Экологические признаки. Растет при температуре от 4 до 28 С, при значении рН от 5,0 до 9,0 растет при концентрации солей в среде до 5,0/о.Физиологические признаки. Строгий аэроб,растет на синтетических средах с добавлениемкомплекса витаминов группы В, усваивает глюкозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, саха- розу, мальтозу, трегалозу, лактозу, раффинозу, маннит, глицерин, этанол, ацетат, бутират, лактат, сукцинат, фенол в качестве источниковуглерода.Не усваивает пропионат, цитрат, бензоат.В качестве источников азота усваивает нитратные и аммонийные соли, мочевину, аспарагин, пептон, гидролизат казеина.Нитраты восстанавливает, ассимилирует н-парафин от октана до гептадекана включительно.Биохимические признаки. Обладает каталазной активностью, пероксидазной не обладает, экстрацеллюлярную линазу не синтезирует, желатину, казеин, целлюлозу и крахмал не гидролизует.Трансформирует ароматические соединения бензольного и нафталинового ряда в соокислительных условиях. 60 65 1, Способ получения 2,6-нафталиндикарбоновой кислоты путем окисления 2,6-диметилнафталина, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, окисление проводят при помощи микроорганизмов. 5 1 О 15 2 О 25 зо 35 40 45 5 О 55 Предмет изобретенияЗаказ 1015,4 1 Зд. М 274 Тираж 467 ПодписноеЦ 1.1 ИИПИ Комитета по делам изобретений н открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 4,5 Типография, пр. Сапунова, 2 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют микроорганизмы рода Рзецс 1 отопаз, выращенные на среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода.3. Способ по пп, 1 и 2, отличающийся тем, что из рода Рзецс 1 отопаз используют вид рцг 1 с 1 а штамм Р. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют микроорганизмы рода Хосагд 1 а,выращенные на среде, содержащей в качестве источника углерода н-алканы. 5 5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что из рода Хосагйа используют вид ораса штамм 264 А.