Способ получения гидрокортизона и ацётата

О П И С А Н И Е 37 О 229ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Селга СоветскиСоциалистическими Республик Зависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 19.1,1971 ( 1621324431-16) М. Кл, С 12 д 1,3/ОО А 6 В 1712с присоединением заявкиПриоритет Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРОпубликовано 15,1.1973. Бюллетень11 Дата опубликования описания 21.111.1973 УДК 615.45:615,361.Авторы изобретения Г. М. Могильницкий, Л, А. Краснова, Г, К. Скрябин, К. А, Кощеенко,Н. Н. Суворов, В. М. Рыжкова, Л. В. Соколова, В. ф. Шнер и ф, Я. Лейбельман Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР и Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им. С, ОрджоникидзеСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА И АЦЕТАТА -- КОРТИЗОНА Изобретение относится к микробиологическим методам, получения гормональных препаратов и касается способа получения гидрокортизона и ацетата кортизона.Известен способ получения тидрокортизона и эпигидрокортизона, являющегося исходным веществом для получения ацетата кортизона химическими методами, путем микробиологического превращения 21-ацетата вещества 5 Рейхштейна при помощи микроорганизмов, выращенных в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли,Однако этот способ весьма продолжителен и связан со значительными затруднениями при выделении чистых препаратов.Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса.Это достигается тем, что трансформацию осуществляют,при помощи мицелия гриба Тгео 1 тетпе 11 а огс 1 т 1 йевыращенного на среде, содержащей в качестве источника углерода дисахарид, например, сахарозу; исходный стероид вносят однократно в растворителе, например, этаноле; по завершении процесса трансформации гидрокортизон выделяют известными приемами; образовавшийся маслообразный осадок обрабатывают хлороформом и содержащиеся в нем стероиды превращают известным 5 методами в ацетат кортизона. Мицелий берут в количестве 5 - 6 г/л средыв пересчете на воздушно-сухой вес и в возрасте, соответствующем последней трети фазы экспоненциального роста и началу фазы зату хающего роста. Этанол берут в количестве3,8 - 3,9% .к объему среды при концентрации исходного стероида 0,5 г,л.П р и м е р. Культуру гриба Т 1 ефепте 11 аогсЫйз шт. 233 поддерживают при комнатной 10 температуре на скошенном сусле-агаре вофлаконах. При пересеве гриб выращивают 12 - 14 дней при 26 - 28 С, а затем 6 - 8 дней при комнатной температуре. Споры гриба смывают с,поверхности агара 100 лтл сте рильной воды и споровой суспензией (в 1 лгл2,4 10 спор) из двух флаконов, засевают среду в ферментере емкостью 32 л с 12 - 15 л среды М 2, содержащей, г/л.: 20 (сухой вес) кукурузного экстракта, 30,0 сахарозы, 1,0 20 КН 4 ИОа, 3,0 (ХН 4) вНР 04, 0,2 М 504, 0,04г е 804 7 Н.О и 10 л водопроводной воды.Среду стерилизуют при 0,8 атх 30 лшн; рНпосле стерилизации 5,2 - 5,5. Культуру выращивают в течение 20 - 22 час, при 28 С и по даче воздуха 1,4 л на 1 л среды в 1 мин, Число оборотов мешалки 150 об/лгин. Полученный инокулят в гколичестве 10 - 12 л вносят в ферментер емкостьго 300 л со 120 - 130 л среды М 2 и проводят вторгю инокляцию при том 30 же режиме ферментацпи. Через 18 - 20 часЗаказ015/5 Изд. М 274 Тираж 46 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 мицелий отфильтровывают и отмытый от питательной среды водой (рН 7,0 - 7,2) используют для процесса трансформации ацетата вещества 5. Рейхштейна, которую проводятв том же ферменте,5В качестве среды используют 110 л водопроводной водыв которую вносят 2,5 - 3,5 мгсинтомицина, 5 - 6 г/л мицелия гриба и 55 г21-ацетата вещества Я Рейхштейна в виде0,05/о-ного раствора в этаноле. Общее количество этанола в среде составляет 3,8 - 3,9/о.Трансформацию проводят при тех же условиях, что и выращивание культуры гриба.Продолжительность процесса составляет10 - 14 час и контролируется хроматографиейпа бумаге до исчезновения исходного вещсства, Культуральную жидкость фильтруют, экстрагируют хлористым метиленом, растворитель удаляют в вакууме, и растворяют остаток.в 98 мл дихлорэтана.гоК раствору добавляют 98 мл 10% растворахлористого кальция в абсолютном спиртеи 196 мл воды, через 48 час (5 С) отфильтровывают осадок.Такую очистку повторяют еще 2 раза и получают 32 г сольвата гидрокортизона (52,2 ооот теоретического количества), Для полученияочищенного препарата полученный сольватрастворяют в 3,2 л горячего этилацетата, обрабатывают углем, фильтруют, упаривают З 0в вакууме до 100 мл и отфильтровывают, Выход очищенного препарата 26 г. После выделения сольвата гидрокортизона в объединенных маточных растворах отделяют дихлорэтановый слой, водный слой трижды обрабатывают этилацетатом, и из обьединенного органического экстракта удаляют в вакууме растворитль.Остаток кипятят 10 мсся с 50 мл хлороформаи через 24 час отфильтровывают 13,3 г вещества, содержащего, %: 47,7 эпигидрокортизона,2,85 гидрокортизона и 6 в кортизона. Осадокпри 60 С растворяют в 65 мл ледяной уксусной кислоты, добавляют при 20 С 3,7 г ацетата бария и 29 мл уксусного ангидрида, выдерживают 5 час при 25 - 26 С, обрабатывают углем и при 0 С по каплям прибавляют 2 л воды. Смесь моноацетатов эпигидрокортизона отфильтровывают, из фильтрата эистраицией хлористым метиленом выделяют дополнительное их количество и обьединенный продукт (11,78 г) растворяют в 84 мл ацетона, Раствор фильтруют, добавляют при 25 С 15,8 мл раствора Килиони, через 30 мин охлаждают до 20 С, выливают при 0 в 850 лгл воды, через 30 мик отфильтровывают и сушат.Технический, продукт перекристаллизовывают из 170 мл спирта, получая 7,75 г ацетата кортизона (13,6% от теоретического количества). Предмет изобретения1. Способ получения гидрокортизона и ацетата кортизона путем микробиологического превращения 21-ацетата вещества 5 Рейх- штейна при,помощи микроорганизма, выращенного в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, трансформацию осуществляют при помощи мицелия гриба Т 1 едЬете 11 а огс 111 йз, выращенного на среде, содержащей в качестве источника углерода дисахарид, например, сахарозу, исходный стероид вносят однократно в растворителе, например, этаноле, ,по завершении процесса трансформации гидрокортизон выделяют известными приемами, образовавшийся маслообразный осадок обрабатывают хлороформом, и содержащиеся в нем стероиды превращают известными методами в ацетат кортизона.2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что мицелий берут в количестве 5 - 6 г/л среды в пересчете на воздушно-сухой вес.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мицелий берут в возрасте, соответствующехг последней трети фазы экспоненциального роста и началу фазы затухающего роста.4. Способ по п, 1, отличающийся тем, что этанол берут в количестве 3,8 - 3,9% к объему среды при концентрации исходного стероида 0,5 г/л.