Способ получения инсулина

-дс.л 44л ОБР Е К АВТ 00 Од ГОСУДАРСТВЕН ЮЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(71) Тверской государственный университет(56) Донецкий И.А. и др. Разработка и внедрение новой технологической схемы полученияинсулина с использованием сульфокатионитаку. В сб, Применение ионнообменныхматериалов. Воронеж, 1981, с.41,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИНА Изобретение относится к производствумедицинских препаратов, может быть использовано для получения различных модификаций препарата инсулина,Выпускаемые ранее в СССР формы инсулина содержат неинсулиновые протеины,которые являются антигенными и иммуногенными препаратами.Целью изобретения является получениеинсулина и снижение его себестоимости.Для достижения цели предложен спо соб, включающий кислотно-спиртовую экстракцию поджелудочной железы, удалениелипидов и очистку. Согласно изобретениюочистку инсулина проводят алифатическимиспиртами. а затем на ионообменной колонке с использованием в качестве элюентаводных растворов оснований. На первойстадии очистка осуществляется добавлением алифатического спирта, содержащеготри-четыре атома углерода при значениирН раствора меньше шести, преимущественно 1,5-3,5, в присутствии достаточногоколичества растворимой в воде неорганической соли (от 5 до 25% веса исходного рас(57) Изобретение относится к производству медицинских препаратов, может быть использовано для получения различных модификаций препарата инсулина. Изобретение позволяет получить неиммуногенный инсулин и снизить его себестоимость. Инсулин выделяют кислотно-спиртовой экстракцией поджелудочной железы, удаляют липиды и проводят очистку алифатическими спиртами, а затем на ионообменной колонке с использованием в качестве элюента водных растворов оснований. 2 табл. твора инсулина). После осуществления реакции инсулин осаждается ацетоном, взятым в количестве 100-300 от объема спиртового раствора.На второй стадии очистка осуществляется на ионообменной колонке. Подходящими ионообменниками для очистки инсулина являются Вофатит=й, ЭДЭ11. Водный раствор инсулина доводят основанием до рН выше шести. Удобными для этой цели являются основания; гидроксид лития, ам. мония и другие, Лучший вариант - гидроксид натрия. Среда для элюирования может иметь значения рН=-7,5 - 9.5. Обычно такой средой является водный раствор того же основания, который использовался для получения раствора инсулина. Среда для элюирования может содержать от 0,03 до 0,3 моля неорганической соли; хлорида калия, натрия, .аммония, Оптимальный вариант концентрации соли 0,1 моль, а в качестве соли взят клорид натрия, Соль такого рода используют для лучшего разделения и препятствия абсорбции базисных субстанций через иони 1, Элюировэние колонки ло;кчо1832032Э=(Ц 1-Ц 2)П 2,Таблица 1 проводить при температуре от 5 до 30"С, оптимальное значение 20 С.Таким образом, только использование двухступенчатой очистки инсулина животного происхождения приводит к получению монопикового инсулина в масштабе промышленного производства.В патентной и технической литературе признаков, входящих в отличительную часть формулы, а именно двухступенчатая очистка инсулина: первоначально алифатическими спиртами,а затем водными растворами .оснований на ионообменной колонке, не обнаружено, следовательно, заявляемый способ соответствует критерию "существенные отличия". Положительный эффект достигается тем, что получают чистый инсулин животного происхождения более дешевый, чем известные его формы фирмы "Яцаа",П р и м ер 1, 2 кг измельченной поджелудочной железы подвергаются двухступенчатой кислотно-спиртовой экстракции. Первая экстракция проводится 80 -ным этанолом при поддержании рН=2,9 ортофосфорной кислотой, Вторая экстракция проводится 60-ным этанолом при рН 2,9, Экстракты объединяются, центрифугируются, фильтруются и конденсируются до объема 20 л дя удаления этанола,Полученный концентрат доводят дистиллированной водой до 200 л и обрабатывают четыреххлористым углеродом в ооъемном соотношении 2:1 для отделения липидов, Собранная верхняя фракция, содержащая инсулин, корректируется на рН=2,9, затем объем фракции доводится до 600 л.В водный раствор инсулина добавляют при перемешивании н-пропанол в объемном соотношении 2:1 и соль йаС 120 кг, Через один час фазы отделяют центрифугированием, концентрируют и осаждают двойным. объемом ацетона, Осадок отфильтровывают, его вес равен 9,5 г.Инсулин после очистки на первой стадии растворяется в дистиллированной воде с доведением рНоснованием натрия. Раствор инсулина в количестве 3400 мл наносится на ионитную колонку размером 5 х 100 см, заполненную смолой ЭДЗ11 и уравновешенную водным раствором основания натрия с рН=9,Элюирование проводится также водным раствором йаОН при рН=9 и градиенте5 соли йаС от 0 до 0,3 М Скорость элюирования 300 мл/ч. Монопиковый инсулин собира.ется в первых 1400 мл фракциях. Контрольотбора фракций проводится в области Уфпоглощения при 1 =280 нм на спектрофотометре Выход чистого инсулина 7,03 г, чтосоставляет 74 .Примеры 2 и 3 проводились по аналогичной методике, Состав и количество применяемых растворителей, ионообменной15 смолы, электролита представлены в табл.1.Практическая ценность заявляемогоспособа по сравнению с прототипом состоит в получении монопикового инсулина животного происхождения при использовании .20 смол отечественного производства, применение которого не приводит к образованиюантител у больных. На основе высокоочищенного инсулина можно получить разнообразные модификации препаратапролонгированного метоболического действия инсулина.Ожидаемый экономический эффект отиспользования заявляемого способа составляет 162 393 руб, Расчет представлен в30 табл.2,где В - цена инсулина формы 59 гпа, 35 руб, за 1 мг, Ц=4, 10=24,6 руб;Цг - цена инсулина, получаемого попредлагаемой технологии, руб/ за.1 мг;Пг - производительность установки зацикл, П 2=7,03 г/за цикл. Ц 2=1.50 руб, 40ф о р мул а изобретения Способ получения инсулина из поджелудочной железы йутем измельчения сырья, экстра кция сырья подкислением 80 С спир том при рН 2,9, отделение экстракта с последующей очисткой целевого продукта ионообменной сорбцией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества целевого продукта, очистку дополнительно проводят алифатическими спиртами.1832032 Продолжение табл. 1 дж эа абл Составитель Т.Сал Техред М.Моргента орректор И,крулл актор сталино.иадатальокий комбинат "Латант", г, Ужгород, ул.Гагарина, 1 ро Заказ 2599 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж-Э 5, Раушская наб 4/5