Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 182 Т 63 51)5 6 01 М 33 5 Н ТЕЛЪСТВ ТОР СКОМУ 2 довательскии ин нфекций П.Илюшенко рогностическое ом энцефалите юзн.проблемной ОВАНИЯ ТЯЖЕГО ЭНЦЕФАЛИГОСУДАРСТВЕ ННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИСТИ ТЕЧЕНИЯ КЛЕЩЕВТА 57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирусных инфекций и может быть использовано Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирусных инфекций и может быть использовано при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом (КЭ),Цель изобретения - повышение точности способа,Способ осуществляются следующим образом,У больных КЭ на первой и второй неделях заболевания в периферической крови оп ределя ют содержание 9 М-антител, число Т-лимфоцитов и уровень клеточного иммунитета (ГЗТ). Титр 1 д М-антител определяют с помощью метода хроматографии на колонках с ДЕАЕ-целлюлозой.Количество Т-лимфоцитов определяют методом Е-розеткообразования. Венозную кровь вносят в пробирку с ЭДТД (0,1 мл на 10 мл крови), разводят в 1,5 раза средой 199. при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом, Цель - повышение точности способа прогнозирования течения клещевого энцефалита, Способ предусматривает применение трех иммунологических тестов; определение 39 М-антител, Т-лимфоцитов и ГЗТ, и при значении обратного титра 19 М-антител 4 - 6 1 о 92, Т-лимфоцитов 600 - 900 клеток в 1 мл и 15 - 200 торможения миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита. Предлагаемый способ усовершенствует прогнозирование тяжести течения клещевого энцефалита, а, следовательно, оптимизирует тактику лечебно-профилактических мероприятий, снижает частоту хронизации процесса и инвалидизации больных, 1 табл. Лимфоциты получают в градиенте плотности фиколл-верографина. После 3-кратного центрифугирования при 1500 об,мин и последовательного отмывания количество клеток подсчитывают в камере Горяева и ъ разводят средой 199 до концентрации (р 2 10 /мл. Клетки (0,1 мл, смешивают с равным объемом 0,50 о взвеси эритроцитов барана, инкубируют на водяной бане при 37 С 10 мин, центрифугируют и помещают в термастат(37 С) на 1 ч, Образовавшиеся розет- Ы ки фиксируют глютаровым альдегидом и Ы осаждают центрифугированием. Из осадка клеток готовят мазок на предметйом стекле, фиксируют его метанолом, окрашивают метиловым синим и подсчитывают 300 клеток, Определяют процентное содержание розеткообразующих клеток, Абсолютное количество Т-лимфоцитов рассчитывают, исходя из общего числа лимфоцитов в крови больного, 1827633которое принимают за 100. Уровень клеточного иммунитета выражают процентом торможения миграции лейкоцитов (ПТМ) - количественным показателем ГЗТ,Из венозной крови больного получают культуру лейкоцитов, для чего 5 мл крови помещают в пробирку с гепарином (40 ед/мл) и желатином (0,8 мл 10 ампульного желатина на 10 мл крови), выдерживают в термостате (37 С) 40 мин. Плазму переносят в силиконированную или пластиковую пробирку, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Осадок дважды отмывают раствором Хенкса, а затем питательной средой 199 с 15; лошадиной сыворотки, 1-глютамином и антибиотиками. Подсчитывают количество клеток в камере Горяева и разводят питательной средой до концентрации (3 - 4) 10 /мл.В предлагаемом способе использовали вариант постановки реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в агаровой среде. Состав агаровой среды: 0,5 бактоагара в среде 199, 15 лошадиной сыворотки без консерванта, антибиотики, 375 мкг/мл бикарбоната натрия, рН 7,2-7,4, Агаровую среду разливают в чашки Петри разового применения, стальным пробойником пробивают лунки, В качестве антигена используют концентрированную очищенную вакцину против КЭ. Антиген в равном по объему соотношении смешивают с суспензией лейкоцитов и после контакта (30 мин, 37 С) вносят в лунки. Контролем служат лейкоциты в смеси с физиологическим раствором. Чашки помещают во влажную камеру с содержанием 5 фСО 2 на 18 - 24 ч, Мигрирование клетки фиксируют 96 этиловым спиртом 18 - 24 ч, Результат учитывают с помощью бинокулярного микроскопа МБС - 9 и выражают в виде процента торможения миграции лейкоцитов, который определяют по формулерадиус миграции вприсутствии антигена 100ПТМ = 100 - радиус миграции безантигенаКоличественные показатели, а также динамика иммунологических тестов, используемых в заявляемом способе, у больных и переболевших различными формами КЭ представлены в таблице.Таким образом, при обратном титре 1 дМ- антител в крови больного на первой и второй неделях болезни от 4 до 6 1 од 2, количество Т-лимфоцитов от 600 до 900 в 1 мкл и ПТМ, равном 15 - 20, у больных лихорадочной формой КЭ прогнозируют тяжелое клиническое течение инфекции, реализующееся в виде затяжного субхронического, а в ряде случаев и хронического процесса 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У больных с поражением вещества мозга прогностически неблагоприятны в эти же сроки заболевания следующие показатели специфической иммунологической реактивности: обратный титр 1 дМ-антител 6 - 8 од 2, количество Т-лимфоцитов 500 - 600 в 1 мкл, ПТМ 25 - 30. Длительная персистенция 19 М- антител (выявление через 1 год и позже) у переболевших КЭ свидетельствует о продолжающейся персистенции вируса, что дает основание прогнозировать опасность развития хронического течения инфекции,П р и м е р 1. Больной П 34 года, поступил в клинику с диагнозом клещевой энцефалит менингеальная форма, На третий день болезни обратный титр 1 дМ-антител 8,3 1 од 2, количество Т-лимфоцитов 838 в 1 мкл, ПТМ 23,3. Иммунологические показатели на 14 день болезни: обратный титр 1 дМ-антител 6,3 ода, количество Т-лимфоцитов 450 в 1 мкл, ПТМ 29,0. Иммунологические показатели явились основанием для прогнозирования тяжелого течения КЭ в остром периоде заболевания и возможного затяжного течения инфекции, Прогноз подтвердился. У больного через месяц после острого периода развился синдром Кожевниковской эпилепсии, Чрез 7,5 мес,от начала заболевания из крови изолирован вирус КЭ. Через 1 и 2 года обратный титр 1 дМ-антител составил 5,31 од 2, количество Т-лимфоцитов 1046 в 1 мкл, ПТМ 12,9. При катамнестическом обследовании клинический диагноз: прогредиентное течение КЭ, синдром Кожевниковской эпилепсии.П р и м е р 2. Больной Л., 36 лет, поступил в клинику с диагнозом лихорадочная форма КЭ, На 4 день болезни обратный титр 1 д М-антител 6,3 ода, количество Т-лимфоцитов 1146 в 1 мкл, ПТМ 27,6, На 14 день обратный титр 1 д М-антител 5,3 1 од 2, количество Т-лимфоцитов 805 в 1 мкл, ПТМ 30,1, Длительный субфебрилитет. Через 1 год от начала заболевания - обратный титр 1 дМ- антител 4,3 одг, число Т-лимфоцитов в 1 мкл 1040, ПТМ 2,1. При катамнестическом клиническом обследовании отмечено сохранение астенического и появление у больного миелитического синдромов.П р и м е р 3. Больной Ш., 15 лет поступил в клинику с диагнозом клещевой энцефалит менингиальная форма, На 5 день болезни обратный титр 19 М-натител 8,3 ода, количество Т-лимфоцитов 406 в 1 мкл, ПТМ 17,9. К концу второй недели болезни обратный титр 1 дМ-антител 7,3 одг, количество Т-лимфоцитов 623 в 12 мкл, ПТМ 20,9. Через 1 год от начала заболевания иммунологические показатели составили соответственно;5,3 1 од 2, 1106 мкл, 13,8, Неблагоприятный1827633 прогноз подтвердился. При клиническом обследовании через 1 и 2 года у больного выявлено вялое прогредиентное течение КЭ с гипертензионным синдромом. Через 8 лет от начала заболевания из крови больного изолирован вирус.Способ апробирован при клинико-лабораторном обследовании 127 больных с различными клиническими формами заболевания, госпитализированных в Омскую областную клиническую больницу.Положительный эффект - повышение точности прогнозирования тяжести течения КЭ позволяет оптимизировать тактику лечебно-профилактических мероприятий, а следовательно, снизить частоту хронизации процесса и инвалидизации больных. Формула изобретения Обратный титр 9 М-антител ( 092)Клиническая форма Количество Т - лимфоцитов, тыс. мклПроцент торможения миграции лейкоцитовСрок обследования со дня заболевания (дни) 4 - 7 14 1 год 14 1 год 1 год 0,7 -0,6 -4 - 5 5 - 6 0,8 0,9 1,2 15 20 6 - 7 7 - 8 5 - 6 0,6 1,2 0,5 25 30 13 га Конт- роль 1,4+. 0,1 5 ПТМ ная группа (доно ры крови) Составитель Э.КветковаТехред М,Моргентал Корректор М.Андрушенко Редактор Заказ 2357 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Ра шская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Лихорадочная Формы с поражением вещества мозСпособ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита путем определе ния количества специфических 39 М-антителв крови больного, о тл и ч а ю щи й с я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно одновременно определяют количество Т-лимфоцитов и уровень ги персенсибилизации замедленного типа пореакции торможения миграции лейкоцитов, и при значении обратного титра 19 М- антител, равном 4 - 6 1 од 2, количестве Т-лимфоцитов 600 - 900 клеток в 1 мл и при 15 15 - 90торможении миграции лейкоцитовпрогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита.