Способ обнаружения гиперурикемии

СОЮЭ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 8 О 2870 А 01 й 33/52 511 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯКЕМИИИзобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для обнаружения гиперурикемии при подагре и хронических нефритах. Целью иэобре и снижение травм Указанная це агностику гиперу тем определения больного и при зн слезе свыше 120 гиперурикемии,Предлагаемь мает не более 15 10 мин на провед реактивов 5 мин,3 мин на регистр Способ осущй способ по времин; 2 мин на взение реакции (ратермостатированацию показанийествляют следующ ни заниие слезы, ливание е 5 мин), рибора, им обраме ят эом.(5 б) Апауз 1, 19 осударственный медицинтения является ускорение атичности способа.ль достигается тем, что дирикемии осуществляют пумочевой кислоты в слезе ачении мочевой кислоты вмкмоль/л судят о наличии(57) Использование: медицина, клиническая биохимия. Сущность изобретения: к слезкой жидкости добавляют реагент, состоящий из 3,5-дихлор-гидроксилбенэолсульфоновой кислоты, уриназы, пероксидаэы и 4-аминоантипирина, инкубируютсмесь втечение 5 мин притемпературе 37 С и определяют уровень мочевой кислоты путем спектрофотометрии при 520 нм и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии, Положительный эффект: способ атравматичен, использование способа позволяет в течение 15 мин определить наличие гиперурикемии. У больного глазной пипеткой берут каплю слезы (0,03 мл) после поднесения к носу ватки, смоченной 10"-,ь нашатырным спиртом. Для определения мочевой кисло- ОО ты использовали специфичный, фермента- С) тивный метод. Оноснован на Я расщеплении мочевой кислоты уриказой ("О до аллантоина, углекислого газа, перекиси ьводорода с последующей индикаторной реакцией. Под действием пероксидазы из перекиси с амина-антипирином и 3,5- дихлор-гидроксибензолсульфоновой кислотой образуются хромоген, соляная Ы кислота и вода.Опытная проба, К 0,02 мл слезы добавить 1 мл рабочего раствора. Смешать, инкубировать 5 мин при 37 С в термостате. Измерить зкстинкцию в кювете на спектрофотометре при длине волны 520 нм против холостой пробы. Окраска стабильна 30 мин. Рабочий раствор готовят следующим образом; к 25 мл 150 ммольл фосфатного буфе. ра, рН 7 с 3,5-дихлор-гидроксибензолсульфоновой кислотой (2 ммоль/л)добавляют уриказу (100 ед/л), пероксидазу (200 ед/л), 4-аминоантипирин (0,25ммол ь л).Холостую пробу обрабатывают также,как опытную, но вместо слезы берут 0,02 млфизиологического раствора.Калибровочную пробу обрабатываюткак опытную, но вместо слезы берут 0,02 млстандартного(476 мкмоль/л) раствора мочевой кислоты. Измеряют при тех же условияхпротив холостой пробы.Еоп .Расчет вели по формуле: А = Е и, гдеКА - количество мочевой кислоты, мкмольл;Еоп - зкстинкция опытной пробы; Ек - экстинкция калибровочной пробы; и - 476мкмоль/л.Установлено,-что в слезе здорового человека содержится 62,9+ 5,5 мкмоль/л мочевой кислоты. Колебания у отдельных лицбыли от 28 до 90 мкмоль/л,В сыворотке крови здоровых людей содержание мочевой кислоты 351,5 + 10,9мкмоль/л, Колебания у отдельных лиц от245 до 418 мкмольл. Средний коэффициентслеза/кровь = 0,18.У больных с гиперурикемией (при подагре, заболеваниях почек) в слезе содержится191,6 + 22,3 мкмоль/л мочевой кислоты.Максимум содержания мочевой кислоты уобследуемых больных составил 305 ммкмольл, минимум 121 мкмоль/л.В сыворотке крови больных с гиперурикемией содержание мочевой кислоты 663,0+47,8 мкмольл, Максимум в сыворотке 884,минимум 514 мкмоль/л мочевой кислоты,Средний коэффициент слеза/кровь убольных 0,29. При статистической обработке разница между содержанием мочевой кислоты в слезе здоровых людей ибольных с гиперурикемией высоко досто.верна (Р0,001).При повышении мочевой кислоты в слезе выше 120 мкмоль/л диагностирировалигиперури кеми юДанные подтверждены клиническими илабораторными испытаниями на 16 здоровых людях, 5 больных подагрой и 16 больных хроническим нефритом на базенефрологического и кардиологического отделений МСЧ М 9 г. Перми с 23 июня 1989года по 24 июля 1990 года,П р и м е р 1. Здоровый человек У. 42. Анализ слезы от 19 декабря 1989 г.Мочевая кислота 69 мкмоль/л.50 ЗЗ мл/ч.Из биохимического анализа крови: белок 79,4 г/л; мочевина 25,7 ммоль/л; креатинин 0,47 ммоль/л; мочевая кислота 514 мкмоль/л.Анализ мочи: моча мутная, реакция кислая. Белок 3,3 г/л; эпителиальные клетки 5-7; лейкоциты 8-10; эритроциты 20-30.Анализ слезы от 26 сентября 1989 года.Мочевая кислота 181 мкмольл,Анализ крови от 19 декабря 1989 г,Мочевая кислота 324 мкмоль/л.У обследуемого содержание мочевойкислоты в слезе и крови в норме.5 П риме р 2. Больной Т.,46 лет.Г 1 оступил в нефрологическое отделениес жалобами на боли в пояснице, головнуюболь, боли в области первого плюснефалангового сустава, Диагноз при поступлении:10 мочекаменная болезнь, симптоматическаягипертензия. Состояние больного удовлет"ворительное, кожа бледная. Границы сердца в пределах нормы, тоны сердцаритмичные. Артериальное давление15 170/100. Дыхание везикулярное. Животмягкий, безболезненный, Почки не пальпируются, Симптом Пастернацкого положителен с обеих сторон.Из биохимического анализа крови: мо 20 чевина 9,5 мкмоль/л, мочевая кислота 784мкмоль/л,Анализ слезы; мочевая кислота 236мкмоль/л, что свидетельствует о наличиигиперурикемии,25 Анализ мочи: цвет соломенножелтый, .мутная, реакция кислая. Удельный вес 1012;белок 0,33 г/л; лейкоциты 20-25; цилиндрыгиалиновые 2 - 3; зернистые 2-4; эпителиальные клетки 7 - 8. Ураты ,30 Таким образом, у больного повышено вкрови содержание мочевой кислоты, мочевины, в слезе повышено содержание мочевой кислоты.Окончательный диагноз: Мочекаменная35 болезнь, симптоматическая гипертенэия.Подагрический артрит первого плюснефалангового сустава.П р и м е р 3, Больная П 27 лет,Поступила в нефрологическое отделе 40 ние с жалобами на головную боль, слабость,быструю утомляемость. Состояние удовлетворительное, кожные покровы бледные, сухие. Лицо пастозное. Тоны сердцаритмичные, артериальное давление 150/90.45 Дыхание везикулярное, живот мягкий, безболезненный.Обояний анализ крови; эритроциты3,1 101/л; гемоглобин 102 г/л; цветнойпоказатель 1; лейкоциты 6,010 Iл; СО 21802870 Составитель Н. ТерехинаТехред М.Моргентал Корректор М. Максимишинец Редактор С. Кулакова Заказ 862 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Таким образом, у больной анемия, увеличено содержание мочевины, креатинина, мочевой кислоты в крови, увеличено содержание мочевой кислоты в слезе.Окончательный диагноз: хронический гломерулонефрит, гипертонический вариант, обострение, Хроническая почечная недостаточность 2-3 степени.Содержание мочевой кислоты в слезе повышено у больных только при наличии гиперурикемии. При повышении мочевой кислоты в слезе свыше 120 мкмоль/л диагностируем гиперурикемию.Предлагаемый способ диагностики гиперурикемии значительно быстрее и проще известного способа, легко переносится больными, атравматичен. Особую ценность представляет при использовании в динамике заболевания. Способ прост, надежен и доступен для использования в рядовых клиника-биохимических лабораториях.Формула изобретения Способ обнаружения гиперурикемии, 5 включающий определение в биологическойжидкости уровня мочевой кислоты путем добавления к пробе реагента, состоящего иэ 3,5-дихлор-гидроксибензолсульфоновой кислоты, уриказы, пероксидаэы и 4-амино антипирина, инкубации смеси в течение 5мин при 37 С с последующей спектрофотометрией при 520 нм, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и снижения травматичности способа, уровень мочевой 15 кислоты определяют в слезной жидкости ипри значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии,