Способ прижизненного определения содержания крови в органах животных

к медицине, а ния гемодина(2 ) 4855884/14 (2 ) 04,06.90 (4 ) 30.08.93, Бюл, М. 32 (7 ) Киевский государственный университет и . Т, Г. Шевченко (7 ) П, И, Янчук и В. А. Цыбенко (7 ) Киевский государственный университет и . Т. Г. Шевченко (5 ) Меапсег Я. Сопзрагатче змйез оп йе и цгоЬоггпопа соптго о 1 гезз 1 апсе апс с растапсе Ьоос чеззез и йе сат, - Аста Р узо, Ясапс 1, 1960, ч. 50, зцрр. 176- р. 1 82.Бернштейн В, А. К методике определен я кровенаполнения тканей,Физиологичес ий журнал СССР. 1964, т, 50, М 5, с. 6 0642.Науменко А. И. и Скотников В. В. Основэлектроплетизмографии. Л.: Медицина, 1 75, 216 с.Цыбенко В. А., Янчук П. И., Симоненко П Н. Применение импедансной плетизмогр фии для изучения депонирующей функц и печени в остром опыте,изиологический журнал, 1984, т. 30, М 6, с. 756-768, (51) СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ КРОВИ В ОРГАНАХ ЖИВОТНЫХ (5 ) Изобретение относитсяименно к способам исследова мики, и может быть использовано для определения абсолютного количества крови в различных органах животных в процессе их жизнедеятельности,. Целью предложенного спосоЬа является повышение информационного качества и безопасности проводимости исследований, Сущность изобретения: предварительно определяют объем крови, содержащейся в органе или ткани, по разности концентрации гемоглобина в цельной и вымытой из данного органа или ткани крови и затем методом импедансной плетизмографии (реографии) получают данные, на основании которь 1 е строят график зависимости удельного сопротивления исследуемого органа от его кровенаполнения. В последствии у животного измеряют лишь электрическое сопротивление участка органа с помощью реографа и расстояние между регистрирующими электродами, на основании чего рассчитывается удельное сопротивление органа, а его кровенаполнение определяется по графику зависимости этих показателей, полученному в предварительных опытах. Положительный эффект; изобретение обеспечивает количественное определение объема крови, содержащейся в органах исследуемых животных при их жизни, что повышает научную информативность проводимых исследоваии,2 илфор- превной импеения нс- ого Изобретение относится к мед именно к способам исследования ге м ки, и может быть использовано д д ления абсолютного количества р зличных органах животных в про ж знедеятельности. цине, а модиная опрекрови в ессе их Цель изобретенимационного качестваделения абсолютногорганах животных путнамике) регистрацииной плетизмографии я - повышен прижизненн содержани ем непреры с помощью сопротивлоргана и послэдующего определения искомого показателя в любой необходимь 1 й момент времени проводимого эксперимента, а также повышение безопасности исследований ввиду неиспользования при реализации данного способа радиоактивных веществ.Поставленная цель достигается тем, что благодаря использованию в предварительной серии опытов двух известных решений, а именно: способа определения обьема содержащейся в органе крови по величине разведения и концентрации гемоглобина и способа прижизненной регистрации изменений кровенаполнения органа в относительных единицах меодом импедансной плетизмографии 1 реографии), основанном на регистрации изменений полного электрического сопротивлении исследуемого органа или ткэни, удается получить данные, на сновании которых строится график зависиглости удельного сопротивления исследуемого органа от его кровенаполнения. В последствии у живого животного непрерывна изглеряе 1 ся и регистрируется лишь элек-рическае сопротивление участка органа с ,амощью реаграфд, модифицированного нами для записи медленных колебаний постоянная составляющая т 0,3 с), и измерягпся расстояние мекду регистрирующими э ектродами, на основании чего рассчитывастся удельное сопротивление органа в любой момент регистрацил, а его кровенапапнение при этом определяется по графику зависимости этих показателей, полученному в предварительных опытах. Сопоставительный анализ заявляемого репения с прототигом показывает, что заявляемый способ отличается от известного гем, чта позволяет получать количественнук оценку обьема содеожащейся в органах крови непрерывно в ходе эксперимента, а не дискретно через определенные промеутки времени), как это имеет место у прототипа, гто повышает информационное качества проводимых исследований.Применение в заявляемом решении методлческих подходов совершенно отличающихся по своей сути от используемых в прототипе и не допускающих применение радиоактивных веществ позволяет повысить безопасность исследований, Подтверждением правомерности данного вывода служит также то, что применение каждого отдельно взятого из двух используемых нами в заявляемом способе известных решений не может реализовать цель изобретения. И только введение в него этих двух решений в вышеизложенной последовательности дает возмакность проявить новое свойство заявляемому решению, а именно: определять содержание крови в органах непрерывно в процессе эксперимента или жизни исследуемого животного в абсолютных единицах (мл/кг).5На чертеже представлены графики зависимости удельного сопротивления органаот его кровенаполнения для печени (фиг, 1)и для селезенки (фиг. 2).Заявляемый способ прижизненного определения абсолютного содержания кровив органах животных реализован следующимобразом. В предварительной серии острыхопытов на наркотизированных животных15 регистрировали электрическое сопротивление участка печени между наложенными ннее электродами одинакового диаметра спомощью реографа. Измеряли расстояниемежду электродами. По диаметру электро 20 дов вычисляли их площадь. Зная полное сопротивление участка печени междуэлектродами, расстояние между ними и площадь электрода, находили удельное сопротивление исследуемого органа;25 Я ЯР =вгде: Р - удельное сопротивление печени,Й - полное сопротивление данного участка органа,30 5 - площадь электрода,- расстояние между электродами,По окончании опыта, пережав одновременно все сосуды печени, извлекали ее снаходящейся в ней кровью из организма35 животного, взвешивали, помещали в емкость и перфузировали известным объемомфизиологического раствора, вымывая такимобразом содержащуюся в органе кровь, Сопоставляли оптическую плотность перфузач4 а та из отмытой печени с оптическойплотностью цельной крови, взятой передперфузией из сосудов исследуемого органа.Содержание крови в печени рассчитывалипо формулеЭ ООгде: О - обьем крови содержащейся в печени,Эп - экстинкция перфузата.Оп - объем перфузата,Э - экстинкция крови животного.Зная обьем.крови, содержащейся в печени и ее массу, рассчитывали кровенаполнение органа, приведенное к его массе:55КН =Могде; КН - кровенаполнение органа,0 - обьем крови содержащейся в нем,Мо - масса органа.1838785 По графику зависимости удельного со- Используя график зависимости (фиг, 1отивления печени от ее кровенаполне- заявляемого способа), определяли кровенаКорреляционный анализ выявил достоверную обратную зависимость между у ельным сопротивлением печени и ее кров наполнением. Коэффициент корреляции и и этом составил -0,972 (р 0,01), 5На основании полученных данных пос роен график зависимости удельного сопротивления печени от ее кровенаполнения (иг, 1). Теперь для прижизненного определ ния содержания крови в печени достаточ н лишь измерить сопротивление ее участка с помощью реографа и расстояние между э ектродами, диаметр которых известен, на о новании чего рассчитать удельное сопрот вление данного органа и по представлен н му графику зависимости определить его к овенаполнение.Во второй предварительной серии остр х. опытов на наркотизированных живот ых регистрировали электрическое 20 с противление участка селезенки между нал женными на нее электродами пр помощи р ографа, Дальнейшее определение проводили как в серии опытов с исследованием печени. 25Проведенный на основании полученн х данных корреаляционный анализ также в явил достоверную обратную зависимость м жду удельным сопротивлением селезенк и ее кровенаполнением (коэффициент 30 к рреляции - 0,984; р 0,01).На фиг. 2 представлен график зависим сти удельного сопротивления селезенки о ее кровенаполнения, предоставляющий в зможность как и в вышеизложенном при м ре с печенью, зная лишь удельное электр ческое сопротивление органа, о ределить его кровенаполнение при жизн, исследуемого живоного.Конкретные примеры выполнения изо бетения сданными подостижению цели по принятым показателям.П риме р 1, Востромопыте М.131 у н ркотизированной этаминалом натрия (35 м /кг) собаки с помощью реографа прижиз н нно измеряли электрическое сопротивлен е (В) участка печени между наложенными н нее электродами и расстояние между ним , Диаметр стандартных электродов 2 с, площадь каждого из них (Я) - 3,14 см, 50г расстояние между ними 2,1 см, электрическ е сопротивление между ними 118 . Ом, 3 ая эти параметры, находили удельное сои отивление печени (Р): Й Я 118 Ом 3,14 см 176 О -- 76 м см ния, представлечному на фиг, 1 описания заявляемого способа, определяли крове- наполнение печени подопытного животного. Оно соответствовало 26,1 мл на 100 г органа.С целью проверки степени соответствия значения искомого показателя, определенного по графику, истинному значению этого показателя проводилось его определение экспериментальным путем. Для этого по окончании опыта животное усыпляли и, пережав одновременно все сосуды печени, извлекали ее с находящейся в ней кровью ииз организма животного. После взвешивания печени (масса органа была 620 г) ее перфузировали физиологическим раствором, вымывая таким образом содержащуюся в органе кровь. Объем перфузата равнялся при этом 1000 мл, Нэ фотоэлектроколориметре определяли оптическую плотность(экстинкцию) пробы крови (Эк), зябкой из сосудов печени до перфузии, и экстинкцию перфузата (Эп) по концентрации гемоглобина, которые составили соответственно 2,4 л/ммоль см и 0,4 л/ммоль см. Зная объем перфузатэ (Оп), его экстинкцию (Эп) и экстинкцию крови (Эк), расчитывали объем содержащейся в печени крови (Ок):ЭпОп1000 мл0,4 л/ммоль см- 166,7 мл2,4 л ммоль смТак как обьем крови, содержащейся в печени(Ок), и масса органа (Мо) известны, то находили кровенаполнение печени приведенное к ее массе (КН):Ок100 166,7 мл 100 гМо 620 г= 26,7 мл 100 гСопоставление истинного значения кровенаполнения печени, полученного экспериментально, со значением этого показателя определенным по графику показало, что расхождение между ними составляет лишь 3,1%,П р и м е р 2, В хроническом опыте г 1. 15 так же, как и в вышеприведенном опыте, при жизни животного с помощью реографа измеряли электрическое сопротивление участка печени между электродами ГГ и расстояние между ними , измеренное ранее во время операции, значения которых соответственно 126 Ом и 2,8 см, Удельное сопротивление (р) печени при этом составило:й Я 126 Ом 3,14 См - 141 О Р- - =,дсм - "О" сполнение печени, которое было равным 30,6 мл/100 г.Для сравнения данного значения показателя с его истинным значением проводили, как и в предыдущем примере, экспериментальное определение кровенаполнения печени после завершения хронического эксперимента и усыпления животного. В этом опыте масса печени (Мо) составляла 765 г, объем перфузата (Ол) - 1000 мл, экстинкция пробы крови (Эк) - 2,2 л/ммоль см, экстинкция перфузата (Эп) - 0,5 л/ммоль см, Объем крови (Ок) содержащейся в печени при этом составил;Эл ОдКЭк1000 мл 0,5 л/ммоль см- 227,3 мл2,2 п 7 ммопп смОтсюда кровенаполнение печени приведенное к ее массе (КН) равно:0100 227,3 мл 100 гМо 765 г= 29,7 мпОО гРасхождение между истинным значением кровенаполнения печени и его расчетным значением. определенным по графику, составило в данном примере 2,9%.П р и м е р 3. В остром опыте М 169 у собаки, находящейся под этаминаловым наркозом, прижизненно с помощью реографа измеряли электрическое сопротивление (В) участка селезенки между наложенными на ее противоположные поверхности электродами и расстояние между ними (1). В было равным 117 Ом, 1 - 0.9 см. Удельное сопротивление ( р ) селезенка при этом составило:Я 3 117 Оч 314 ОМ 4080 .Р - 2 - ООсм По графику зависимости удельного сопротивления селезенки от ее кровенаполнения, представленному на фиг. 2, определили кровенаполнение селезенки, значение которого было равным 37,5 мл/100 г,Для проверки соответствия расчетного значения кровенаполнения селезенки его истинному значению, полученному методом вымывания крови, было проведено экспериментальное .определение объема содержащейся в селезенке крови, Для этого после окончания опыта, усыпив собаку, пережимали одновременно все сосуды селезенки и извлекали ее с содержащейся в ней кровью их организма животного. Дальнейшее определение искомого показателя проводили аналогично тому, как это проводили в примерах 1 и 2 применительно к печени, В данном опыте масса селезенки (Мо) была 109 г, 5 объем перфузата (Оп) - 400 мл, экстинкция пробы крови взятой из сосудов селезенки до ее перфузии физиологическим раствором (Эк) - 2.8 л/ммоль см, экстинкция перфузата (Эп) - 0,3 л/ммоль см. Объем крови содержа щейся в селезенке составил: ЭпОпЭк 400 мл 0,3 л/ммоль см- 42,9 мл2,Б /Щ 15 Кровенаполнение селезенки приведенное к ее массе равно: Ок.100 42,9 мл 100 гМо 109 г = 39,4 мл 1.00 гВ данном опыте расхождение между истинным значением кровенаполнения селезенки и его значением, определенным по графику, составило 4,8%,Итак, показано, что ошибка измерения в представленных конкретных примерах выполнения изобретения не превышает 5%. Средняя ошибка измерения при этом равна 3,6%. Следовательно, значения кровенаполнения печени и селезенки, полученные в 30 острых и хронических опытах экспериментально, мало отличаются от значений, опре- деленных при жизни животных расчетным путем (по графику), Это указывает на возможность использования данного способа 35 для прижизненного определения содержа- ния крови в органах животных, позволяющего улучшить научную информативность проводимых исследований и, следовательно, их качество. 40 Формула изобретения Способ прижизненного определения содержания крови в органах животных, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повыше ния информативности и безопасности определения, предварительно с помощью импедансной плетизмографии определяют удельное электрическое сопротивление исследуемого органа и устанавливают его зависимость от кровенаполнения, а затем непрерывно регистрируют сопротивление органа, и абсолютно содержание крови в нем в любой момент определяют по полученным предварительно величинам зави симости,/, Ом.гм Редактор С. Кулакова Корректор С, Патрушев аказ 2924 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 1 Составит Техред М П. Янчргентал Ю4,ФгЮ/ЮА