Способ оздоровления селекционных сортов картофеля от заражения х-вирусом

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 01 Н 1/04 ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТ ЕЛЬСТ КОМУ СВ Селекция и Колос, 1972. с вирусныых растевирусными , с. 150-182. й справочник 74 (прототип),Данный спасороцесс отбора и иует больших эконотатком его явырождения созда включает длительный спытаний (до 9 лет), тремических затрат. Недо- ляется вероятность ного сорта, т,е, сниже(21) 4786917/13. Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений,Известен способ селекции сортов картофеля на вирусоустойчивость, осуществляемый по определенной схеме, в основу которой положены следующие принципы: подбор форм. для скрещивания, одна из которых несет признак крайней устойчивости (иммунности); искусственное инфицирование гибридов вирусами с последующей их диагностикой; отбор высокоустойчивых продуктивных форм. 5 О, 1745161 А(54) СПОСОБ ОЗДОРОВЛЕНИЯ СЕЛЕКЦИОННЫХ СОРТОВ КАРТОФЕЛЯ ОТ ЗАРАЖЕНИЯ Х-ВИРУСОМ(57) Использование: сельское хозяйство, фитопатология, картофелеводство, семеноводство. Сущность изобретения: свободные от вирусов растения, устойчивые к заражению, получают путем поэтапной клоновой селекции, предусматривающей предварительный . отбор безвирусных клонов методом имму ноферментного анализа, искусственное их заражение путем натирания листьев соком растений, зараженных Х-вирусом, отбор непораженных клонов, повторное заражение путем прививки зараженных Х-вирусом черенков и повторный отбор непораженных растений. После этого полученные растения размножают; 2 табл,ние урожайности и товарных качеств клубней за счет потери вирусоустойчивости.Наиболее близким к предлагаемому является способ борьбы с вирусным вырождением картофеля, заключающийся в. освобождении посевного материала от вирусной инфекции, при котором верхушечную меристему вычленяют из этиолированных ростков, а у зеленых растений - из пазушных почек, Полученные изоляты высаживают на питательную среду с после 1 дующей пересадкой меристемы каждый на свежую среду до получения регенерантов, В течение 2 - 6 мес. меристемы регенерируют ростки, которые снимают и высаживают на новую питательную среду для ускорения и образования растений Меристемные растения многократно проверяются на предводится отбор безвирусного потомства 30(клонов). 35 40 45 уровне за счет выбраковки неустойчивых генотипов.Предлагаемый способ реализуют следующим образом,П р и м е р 1, Двести клубней сортаАдретта проращивали в сосудах при 20 С и 55в фазе 3 - 4 недельных проростков оценивали индивидуально методом иммуноферментного анализа на присутствие Х, Е, М,Я-вирусов, Отобрали 70 безвирусных растений и сразу же заразили их методом натимет обнаружения вирусов. Безвирусные растения, размноженные в культуре 1 п чего иэ пробирок, пересаживают затем в питомники размножения для получения клубневого потомства.Недостатки способа - быстрое повторное заражение оздоровленного материала вирусами, возможность утраты сортовых характеристик, повышенная чувствительность к грибным инфекциям,Цель изобретения - повышение устойчивости селекционных сортов картофеля к заражению Х-вирусом.Цель достигается тем. что культивируемый устойчивый сорт, проявляющий первые признаки вирусного вырождения, подвергают клановой селекции, осуществляемой в несколько этапов,1) Индивидуальная оценка клубней на присутствие вирусов с помощью иммуноферментного анализа, основанного на взаимодействии диагнос-.ической сыворотки (антител) с соком проверяемых растений, в котором вирусный белок является антигеном. О степени зараженности растения судят по окраске субстрата, обусловленной ферментативной активностью конъюгата (комплекса антитела с ферментом), преобразующего субстрат. На основе оценки про 2) Выращивание клонов и их оценка на вирусоустойчивость при искусственном заражении: натирании листьев соком растений, содержащих Х-вирус в высоком титре;3) Повторный отбор.и размножение устойчивых клонов на фоне тяжелой инфекции- прививок инфицированных вирусами черенков на здоровые растения; 4) Размножение и иммунодиагностика отселектированных вирусоустойчивых клонов.В отличие от известного в предлагаемом способе не используется дорогостоящая, требующая специального оборудования и недостаточно эффективная культура апикальных меристем, Способ позволяет длительное время поддерживать вирусоустойчивость исходного сорта на высоком 5 10 15 20 25 рэния соком растения, пораженного ХВК. Спустя 3 недели, методом растения достигали стадии бутонизации, повторно оценивали их на присутствие ХВК (ЭЛИЗА-тест) и отбирали устойчивые. Клубневое потомство тринадцати отобранных устойчивых к ХВК растений (77 клубней) первого этапа отбора высаживали в сосуды и проращивали при 20 С. В фазе полных всходов(3-4 недельные растения) заражали ХВК прививкой с целью отбора иммунных форм, Через 3 недели проводили иммуноферментный анализ на присутствие вируса в подвое. Иэ 77 инфицированных растений только 2 были свободны от ХВК, что составило 3% от числа испытанных клонов.Результаты сведены в табл. 1,П р и м е р 2. Аналогичную процедуру двухэтапного отбора на устойчивость к ХВК применили к сорту Лошицкий, В отличие от первого примера. опыты на сорте Лошицкий проведены в полевых условиях. В первом цикле отбора при натирэнии листьев соком больного растения устойчивость к ХВК составила 88 о(35 клонов из 40), Потомство отобранных устоичивых клонов заражали методом прививки в течение двух лет ("тяжелая инфекция") с целью отбора иммунных форм. В первый год прививок выделили 32 устойчивых клона из 81, которые вновь высадили и в фазе полных всходов прививали повторно. Методом иммуноферментного анализа провели отбор безвирусных растений (иммунных). Средний уровень устойчивости отобранных клонов составил при заражении прививкой 79 ос варьированием по семьям от 100 до 66%. Всего было выделено 257 иммунных клонов. Результаты представлены в табл,1, П р и м е р 3, Сто клубней сорта Сафир выращивали в поле и 3-4 недельные проростки инфицировали соком растения, больного ХВК, Методом иммуноферментного анализа оценивали индивидуально каждое растение. Ни в одном из испытанных клонов Х-вирус не обнаружен, Клубневое потомство анализируемых растений инфицировали прививкой в течение двух лет, после чего оценивали методом иммуноферментного анализа на присутствие ХВК, Все растения испытанных клонов были свободны от ви русных частиц, т.е, были иммунными (табл 1),Испытания на урожайность отобранны. контрастных по устойчивости клонов расте ний сорта Лошицкий проведены в течение 1989. 1990 гг. в полевых условиях на делян ках размером 12.5 м в четырехкратной по.2вторности при площади питания 70 х 70 см.17456 Таблиц 41 Способ за вменил Тип устойчивестиП ививка Натирание соком 11 поколение 1 поколение Количествоустоичиустойчивых вости расрастений тенийвт" Сорт Число рас тений.шт 7 т имунныхрастений Количествоимунныхрастений Число Растений, шт Число рас- Количествщ % иммунтвний иммунныхных рас.растений тенийшт 7718 70 устойчивыйВысокоус. тойчивыйИммунныйИмм нный Адретта ЛошицийТаблица 2 Составитель Н чДаниленТехред М,Моргентал едактор М.Янкови ректор В.Гипня Заказ 2335 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытия113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 и ГКНТ ССС оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина,Данные представлены в табл. 2, из которой видно, что двухэтапный отбор на вирусоустойчивость приводит к повышению продуктивности устойчивых клонов на ЗОот по сравнению с поражаемыми клонами.Таким образом, предлагаемый способ позволяет повышать уровень устойчивости районированных сортов, фиксировать наступление вирусного вырождения сорта, повышать продуктивность оздоровленного сорта. Формула изобретения Способ оздоровления селекционныхсортов картофеля от заражения Х-вирусом,предусматривающий получение свободных от вирусов и устойчивых к заражению растений и последующее их размножение, о тличающийся тем,что,сцельюповыше ния устойчивости сортов к заражению, свободные от вирусов растения получают поэтапной клоновой селекцией, включающей предварительный отбор безвирусных клонов методом иммуноферментного ана лиза, искусственное их заражение путем натирания листьев соком зараженных Х-вирусом растений, отбор непораженныхклонов. повторное заражение путем прививки зараженных Х-вирусом черенков и по вторный отбор непораженных растений,