Способ определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях

(71) Нижегородский науский институт гигиены тваний(56) Гадаскина И,Д., Филния и определение промческих ядов в организ154 в 1. ЕНИЯ МУРАВЬИОГИЧЕСКИХ ЖИД(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛ НОЙ КИСЛОТЫ В БИОЛ КОСТЯХ(57) Использование: ме ный анализ, аналитич ность изобретения:мур безбелкового субстрата тилляции с нагреванием давлении, 1 табл,лабораторимия, Сущкислоту из путем дис- мосферном но-исследовательуда и профзаболеицин ская вьин удаля при ов В.А. Превращешленных органие. - Л., 1971, с. отре гонка в емя пределенираживание ие величива ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ Изобретение относится к области медицины и биохимии и предназначено для определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях - крови, моче.Известен способ количественного определения муравьиной кислоты и ее производных, включающий обработку анализируемой пробы избытком уксусного ангидрида в присутствии кислого катализатора (серной или хлорной кислоты) с последующим волюмометрическим измерением выделившейся при этом окиси углерода. Недостатком способа является длительность процесса,Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ фотометрического определения муравьиной кислоты, основанный на извлечении ее из анализируемой пробы, восстановлении до формальдегида и дальнейшем определении по реакции с хромотроповой кислотой. Извлечение муравьиной кислоты из анализируемой жидкости проводится путем вакуумной дистилляции при пониженной температуре в среде сухого льда. Стадия дистилляции протекает со скоростью 0,5 - 1 мл/ч, Кроме того, если в пробе имеются растворенные газы, которые мешают о ю,т буется повторное эамо от пробы, что еще больш у ет р анализа.Недостатком способа является его длительность.Цель изобретения - ускорение способа определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях.Поставленная цель достигается тем, что определение муравьиной кислоты в анализируемой биологической жидкости проводят фотокалориметрически, пробу предварительно подкисляют 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и центрифугируют, после чего отгоняют кислоту из безбелкового фильтрата с нагреванием при атмосферном давлении.Способ осуществляется следующим образом; при анализе крови в центрифужную пробирку вносят 4 мл 20 О-ной трихлоруксусной кислоты, затем 0,5 - 1 мл анализируемой крови в 2 мл дистиллированной воды, центрифугируют в течение 5 мин, центрифугат сливают в аппарат для перегонки, отгоняют около 5 мл жидкости, затем в кубдобавляют 1 мл дистиллированной воды иеще отгоняют до 6 мл дистиллята. 3,5 млдистиллята переносят в пробирку с 100 мгмагниевой стружки, добавляют 0,5 мл соляной кислоты в 10 приемов порциями по 0,05 5мл в течение 10 мин, Затем приливают 3,5мл хромотропной кислоты, кипятят на водяной бане 30 мин, добавляютдистиллированную воду до 9 мл и фотоколориметрируют вкювете с толщиной слоя 20 мм при длине 10волны 570 мкм,При анализе мочи 2 мл пробы вносят вперегонный аппарат, добавляют 2 мл 20 Дной трихлоруксусной кислоты и 3 мл дистиллированной воды; дальнейший анализ 15аналогичен анализу крови,Для построения градуировочного графика готовят серию стандартных растворовмуравьиной кислоты в 0,01 н.соляной кислоте в интервале концентраций 1 - 10 мкг/мл. 20Каждый раствор подвергают анализу, включая две стадии обработки пробы.Существенным отличием сйособа является отгон ка кислоты из подкисленного безбелкового фильтрата с нагреванием при 25атмосферном давлении,Приводятся данные, показывающие,что точность предлагаемого способа не уступает известному,Сравнение предлагаемого способа с известным проводили в области нижней границы концентраций в градуировочномграфике, а именно на растворе муравьинойкислоты с концентрацией 1 мкг/мл, приготовленном на моче контрольных крыс. 35Раствор указанной концентрации анализировали обоими предлагаемым и известным способами.В таблице приведены статически обработанные результаты. 40Из сравнения обоих способов следует,что точность анализа растворов муравьинойкислоты с концентрацией, равной нижнемуа пределу обнаружения ее в биологическихжидкостях(1 мкг-/мл) практически одинакова в обоих случаях.Предлагаемый способ был примененпри токсикологических исследованиях поизучению ингаляционного воздействия метилметакрилата на организм белых крыс, 50Известно, что метаболитами метилметакриловой кислоты в организме является метанол и метакриловая кислота. Метанолокисляется до муравьиной кислоты.П р и м е р 1. 6 белых крыс подвергали 55ингаляционному воздействию метилметакриалата (ММА) (концентрация ММА в затравочной камере 12400 мгl м ). Через 3 ч после начала затравки у всех крыс была отобрана и проанализирована кровь на содержание муравьиной кислоты по предлагаемому способу, Одновременно была проанализирована кровь 6 контрольных крыс, не подвергавшихся воздействию ММА. Содержание муравьиной кислоты в крови затравленных крыс, мкг/мл: 19,0; 28,7; 18,6; 29,9;22,5; 28,7. Содержание муравьиной кислоты в крови контрольных крыс, мкг/мл; 25,0;30,0; 10,6; 31,6; 21,4; 12,7,На выполнение анализа 12 проб крови на содержание муравьиной кислоты было затрачено 6 ч, т,е. в среднем на один анализ по предлагаемому способу затрачивается 25-30 мин, в то время, как на один анализ муравьиной кислоты по известному способу - не менее 4 ч.П р и м е р 2. У 6 крыс, подвергшихся трехчасовому воздействию ММА в условиях, аналогичных примеру 1, была собрана суточная моча. Одновременно собиралась суточная моча контрольных крыс, Моча каждой крысы была проанализирована на содержание муравьиной кислоты по предлагаемому и известному способам, Содержание муравьиной кислоты в моче затравленных крыс, мкг/мл: 7,3; 19,5; 43,6;34,7, 25,8; 18,7. Содержание муравьиной кислоты в моче контрольных крыс, мкг/мл: отс 0,91; отс., 4,7; 0,6; 2,35, Следует отметить, что 12 проб мочи были проанализированы в течение 6 ч (25 - 30 мин на один анализ) по предлагаемому способу. По известному способу на проведение 1 анализа было затрачено не менее 4 ч,Таким образом, предлагаемый способ извлечения муравьиной кислоты из биологических жидкостей значительно сокращает время анализа, не ухудшая его качества. Предлагаемый способ может быть применен при анализе биологических жидкостей на содержание муравьиной кислоты. Формула изобретения Способ определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях путем взятия пробы, осаждения белка, центрифугирования, удаления кислоты из безбелкового субстрата с последующей фотометрией, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа, удаление кислоты проводят путем дистилляции с нагреванием при атмосферном давлении,1735781 Редак тор О.кравцова апп г, Ужгород, ул.Гагарина, 10 зводственно-издательский комбинат "Пат з 1813 ВНИИПИ Госуд Составитель Н.ТерениТехред М. Моргентал Тираж Подписноевенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5