Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови

(19) ( 5 А С 01 И 33 5 ЯЯд.";Я ИСАНИЕ ИЗОБВЕТЕНИЯ я,А.Дид ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ . С ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНР Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт биохимии им. А.В,Палладина и Киевский медицинский инсттут им. А.А.Богомольца(56) Патент США Мф 4210420,кл. С 01 И 33/16, 1980.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯРАСТВОРИМОГО ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ КРО(57) Изобретение может быть использовано при диагностике заболеваний,связанных с патологией системы гемостаза. Цель изобретения - повышениеточности и чувствительности способа.К цитратной плазме прибавляют раствор протаминсульфата на фосфатном буфере. Смесь перемешивают, инкубируюти центрифугируют. Осадок растворяютв уксусной кислоте, спектрофотометрируют и определяют содержание растворимого фибрина в плазме крови, Дляосаждения используют отечественныйпрепарат. 1 табл.5 2где К=2,86, что учитывает отношениеэкстинкции белка в осадке кэкстинкции фибрина;Ч - объем взятой в тест плазмьц Ч - объем спектрофотометрированногораствора;ьЕЕаео-Е, - разница экстинкций растворапри длинах волн 280 и 320 нм;2 = коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде равен 15,00,при Ч=0,5; Ч =3,0 и 6 Е=О, 120 С=16,8 мг%.П р и м е р 2. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения к плазме прибавляют 0,5 мл 0,8%-ного раствора протаминсульфата (конечная концентрация протаминсуль" Фата равна 0,4%), а осадок растворяют в 3 мл 3,0%-ной уксусной кислотыС - 2 - ьЕ 142,86=15,6 мг%.ЬЕ Ч 1000х " Ч 28 П р и м е р 1. В коническую пробирку объемом 10-12 мл вносят 0,5 мл патологической плазмы термостатируют 35о2-3 мин при 25 С и прибавляют равный объем 1%-ного раствора протаминсульфатав 0,06 М Фосфатного буфера, рН 7,4, П =О, 15, =25 С. Конечная концентрация протаминсульфата равна 40 0,5%. Смесь тщательно перемешивают иовыдерживают 30 мин при 25 С, после чего осадок отделяют центрифугированием при 2,5 тыс. Об/мин в течение 15 мин и дважды промывают Физиологи ческим раствором с последующим центрифугированием. После последнего центрифугирования пробирки переворачивают вверх дном на фильтровальную бумагу и дают стечь несколько минут, 50 Полученный осадок растворяют в 3 мл 1,5%-ной уксусной кислоты и полученный раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 НМ с поправкой на мут" ность при 320 нм, Количество фибрина 55 рассчитывают по формуле пЕ Ч 1000С (мг%)= - .У:Ч К ф 1 135411Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-лабораторной диагностике, и может быть использовано при диагностике заболеваний, связан 5 ных с патологией системы гемостаза.Целью изобретения является повышение точности и чувствительности способа за счет изменения концентрации раствора протаминсульфата, добавляемого к плазме крови, и введения поправочного коэффициента при расчете количества растворимого фибрина.Способ осуществляют слецующим Образом, 15К аликвоте свежевзятой бестромбоцитарной цитратной плазмы прибавляют равный объем раствора протаминсульфата (на фосфатном буфере) до конечной концентрации последнего 0,4-0,6%. Смесь тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин при 25 С, Осадок отделяют центрифугированием, дважды промывают физиологическим раствором и растВоряют В 1,5-5%-НОЙ уксусной кислоте, 25 раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 мм с поправкой на мутность при 320 нм.Расчет растворимого фибрина проводят по Формуле, исходя из соотношения зО фибрина к осадку 1:(2,8-3,0). П р и м е р 3, Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения прибавляют 0,5 мо 1,2% протаминсульфата (конечная концентрация равна 0,6%), а осадок растворяют в 3 мл 5%-ной уксусной кислоты.ЬЕ Ч 1000С = --- -= Е 133 33=17 4 мг%.Е Ч 3,0 и П р и м е р 4, В этом примере проводят сравнительное определение количестна растворимого Фибрина в модельных смесях предлагаемым и известнымспосбоами. Моделью служит донорскаяплазма с внесенным известным количеством фибрина. Известный способ воспроизводят с применением препаратапротаминсульфата Фирмы Брпа".В предлагаемом способе для осажденияприменяют отечественный препарат Хабаровского Фармакологического завода.Данные, полученные обоими способами,приведены в таблице,1 Как видно из таблицы, известный способ обладает слабой чувствительностью. В пробах же с высоким содержанием растворимого фибрина результаты, полученные этим способом, значительно превьппают внесенное количество фибрина, Это объясняется тем, что в осадке, наряду с Фибрином, обнаруживается значительное количество Фибриногена, что подтверждают экспе13541 Внесенное количество фибрина,мкг/мл Известный способ редлагаемый способ Количество Ошибка,оличество Ошибка,ибрина, Хкг/мл фибрина, 7мкг/мл 36 200 1 272 0,6 195 198 30 150 100 4,0 90 10 104 100 50 10,0 100 12,0 28 Составитель В.ГудошниковРедактор А.Ворович Техред Л.Олийнык Корректор С,Черни Заказ 5688/40 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проект актная 4 риментальные данные, полученные с помощью электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия восстановленных дитиотриэтолом протаминсульфат 5 ных осадков. Формула изобретения Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови, включающий осаждение протаминсульфатом, промывку комплекса фибриноген" фибрин с последующим растворением 154его и спектрофотометрическим анализом, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности ичувствительности способа, осаждениепроводят при соотношении объемов плазмы к протаминсульфату 1:1 до конечной концентрации последнего 0,4-0,67.,дважды промытый комплекс растворяютв 1,5-5 Е-ном растворе уксусной кислоты и после фотометрирования количество растворимого фибрина определяютиз соотношения фибрина к осадку 1: