Способ выявления возбудителя сыпного тифа

(51)5 С 12 0 1/04 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО.ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Учение о риккетсиях и риккетсиоэах. . М,: Медицина, 1972. Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, а именно к способам выявления возбудителя сыпного тифа - риккетсий Провачека - в исследуемом организме (человеке или экспериментальном животном). и может быть использовано при лабораторной диагностике этой фракции и в научно-исследовательской работе,Известен способ выявления возбудителя сыпного тифа в исследуемом организме путем введения взятого от него материала (крови, суспензии органов) биопробным животным, например морским свинкам или куриным эмбрионам,Однако такой способ обладает невысокой чувствительностью, частота выявления возбудителя при нем низка.Известен способ выявления возбудителя сыпного тифа с использованием естественного переносчика этой инфекции - лабораторной культуры вшей (Ребсццз пцвапцз) - путем введения материала(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЫПНОГО ТИФА(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике сыпного тифа, Сущность изобретения: материал из исследуемого организма предварительно обрабатывают антиглобулиновой сывороткой против сыпнотифозного иммуноглобулина в течение 1 ч при 37 С, Затем вводят его вшам по методу Вейгля, Оценивают интенсивность развития риккетсиоэной инфекции по проценту гибели вшей и по степени накопления возбудителя в их кишечниках. 1 табл.(крови,суспензииорганов), взятого из исследуемого организма, в кишечник этих насекомых.Для такого введения материала в кишечник вшей используют различные приемы, например метод Вейгля (введение насекомым исследуемого материала в микроклизмах), метод Пшеничнова (искусственное вскармливание через мембрану насекомых кровью, содержащей материал), метод непосредственного вскармливания на исследуемом организме (больном сыпным тифом человеке или зараженном риккетсиями Провачека животном). При попадании возбудителя сыпного тифа в кишечник вшей происходит размножение и накопление риккетсий в клетках кишечника насекомого, что сопровождается гибелью заразившихся вшей вследствие специфического поражения их кишечника риккетсиозной инфекцией.Чувствительность указанного способа выявления возбудителя оценивают по ин1730154 тенсивности развития у вшей риккетсиозной инфекции, т,е, по частоте (проценту) гибели эаразившихся насекомых от риккетсиоэной инфекции и степени накопления в их кишечнике риккетсий, что апре деляют путем микроскопии препаратов (мазков), приготовленных из кишечников вшей.Наиболее близким к предлагаемому является способ выявления возбудителя сып 10 ного тифа на вшах при заражении их по методу Вейгля материалом из исследуемого организма с последующей оценкой интенсивности развития у них риккетсиоэной инфекции. 15Недостатком известного способа также является низкая его чувствительность, что затрудняет выявление возбудителя при заболевании организма легкими формами сыпного тифа, например при повторном 20 сыпном тифе (болезни Брилля), и не позволяет выделить возбудитель в поздние сроки от начала заболевания.Цель изобретения - повышение чувствительности способа выявления возбудите ля сыпного тифа в исследуемом организме,Укаэанная цель достигается тем, что в способе выявления возбудителя сыпного тифа путем введения вшам материала из исследуемого организма этот материал пе ред введением предварительно обрабатывают антиглобулиновой сывороткой (АГС) против сыпнотифозного иммуноглобулина того же вида животного, в организме которого выявляется возбудитель. 35Для введения материала вшам используют метод Вейгля.Сущность обработки заключается в том, что исследуемый материал (кровь или суспензию органов) смешивают с АГС и пол ученную смесь инкубируют (содержат при требуемой температуре необходимое время, например 1 ч при 37 С), Затем обработанную указанным способом смесь вводят в кишечник вшей по методу Вейгля. 45Чувствительность предлагаемого способа выявления возбудителя сыпного тифа оценивают аналогично прототипу - по проценту гибели насекомых от риккетсиоэной инфекции, которым ввелй обработанный 50 АГС материал, и степени накопления в кишечнике насекомых риккетсий, что определяют путем микроскопии препаратов, приготовленных из кишечников вшей. В результате описанной обработки материала из исследуемого организма с помощью АГС предлагаемый способ выявления возбудителя сыпного тифа существенно более чувствителен в сравнении с 4прототипом (в прототипе материал вводят вшам беэ предварительной обработки АГС),П р и м е р. У животных (морских свинок) вызывали легкую бессимптомную форму сыпнотифозной инфекции путем заражения животных риккетсиями Провачека. На 10-й, 17-й, 31-й и 38-й дни забирали материал у животных - сгусток крови, мозг, внутренние органы (печень, почки, селезенку), из которых приготавливали путем гомогениэации суспензию на физиологическом растворе (иэотоническом растворе хлорида натрия),В способе выявления возбудителя сыпного тифа суспензию из указанного материала обрабатывали АГС. т.е. смешивали полученную взвесь с равным обьемом АГС против сыпнотифозного иммуноглобулина морской свинки и эту смесь инкубировали при 37 С в течение 1 ч. В качестве АГС использовали сыворотку кролика, иммунизированного сыпнотифозным иммуноглобулином морской свинки по общепринятой методике, АГС для обработки материала брали в разведении 1:40.Параллельно ставили контрольные опыты, используя прототип, при котором суспензию этого же материала зараженных морских свинок не обрабатывали АГС, а лишь смешивали с равным обьемом физиологического раствора для уравновешивания концентрации возбудителя в сравнении с предлагаемым способом и затем полученную смесь инкубировали при 37 С в течение 1 ч.Обработанный указанным выше способом материал после инкубации вводили вшам лабораторной культуры по методу Вейгля, определяя затем чувствительность предлагаемого способа в сравнении с прототипом по проценту гибели вшей от риккетсиозной инфекции и по степени накопления в их кишечниках возбудителя сыпного тифа при микроскопии препаратов из кишечников насекомых,В таблице приведены сравнительные данные о чувствительности предлагаемого способа выявления возбудителя сыпного тифа и прототипа.Приведенный в таблице пример характеризует чувствительность предлагаемого способа выявления возбудителя сыпного тифа при легкой бессимптомной форме сыпнотифозной инфекции. Полученные данные показывают, что предлагаемый способ обладает существенно более высокой чувствительностью в сравнении с прототипом. Так, при использовании предлагаемого способа развитие риккетсиоэной инфекции у вшей при введении им материала животного на 10-й и 17-й дни заболевания наблюдалось у1730154 Выявление возбудителя сыпного тифа на вшах лабораторной культуры при заражении их по методу Вейгля материалом морских свинок с экспериментальной сыпнотифозной инфекциейОпыт Процент гибели вшей при введении им материала животноГо, ВзятОГО наМатериал 38-й ень 10-й ень 17-й ень 31-й ень и и об аботке мате иала АГС и е агаемый спсоб ие воэб ителя Выявлен 51(+) О 124Кровь. МозгОрганы Кровь МозгО ганы об аботки АГС возб ителя без Выявление и ототип 0 0 0 О.0 1 (+) 0 0 0 О 0 1 (+) 0 20 1(+) 2+Мозг Кровь Органы Кровь Мозг О ганы р и м е ч а н и е. 8 скобках дана оценка интенсивности накопления риккетсий примикроскопии препаратов из кишечников зараженных вшей:+ - минимальное;- максимальное накопление риккетсий.Составитель Н.КлимчукТехред М.Моргентал Корректор В. Гирняк Редактор А.Лежнина Заказ 1489 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 2 - 57 ь насекомых, в контрольных опытах этот показатель находился в пределах 1- 2. При исследовании материала животных на 31-й день развитие риккетсиозной инфекции в предлагаемом способе отмечено у 1-5 вшей, в контрольном опыте этот показатель существенно ниже - заражение отмечено лишь у 1 насекомых после введения суспензии мозга животного. Еще более существенное различие в чувствительности предлагаемого способа наблюдалось при введении вшам материала животного, полученного на 38-й день: здесь с использованием предлагаемого способа возбудитель был выделен - развитие риккетсиозной инфекции наблюдалось у 2-5 вшей, в контрольном опыте развития риккетсиозной инфекции у вшей не было отмечено.При микроскопии препаратов из кишечников вшей, погибших от риккетсиозной инфекции, при обработке АГС степень накопления риккетсий выше (достигает оценки два-три плюса (, , в опытах без обработки АГС этот показатель ниже(один, реже два плюса (+, . Приведенные в таблице данные свидетельствуют о существенно более высокой чувствительности способа выявления возбудителя сыпного 5 тифа в сравнении с прототипом.Эффективность способа заключается вего большей производительности (при его использовании частота выявления возбудителя выше) в сравнении с известными спо собами, что может быть использовано как впрактической работе, так и в научно-исследовательской работе, открывая новый подход к изучению вопросов персистенции возбудителя сыпного тифа.15 Формула изобретенияСпособ выявления возбудителя сыпного тифа путем введения вшам материала иэ исследуемого организма с последующей оценкой полученных результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышениячувствительности способа, материал перед введением обрабатывают антиглобулиновой сывороткой против сыпнотифозного иммуноглобулина, гомологичного исследуемому 25 организма, в течение 1 ч при 370 С.