Способ выбора донора при аллотрансплантации почки

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК й 33/53 5)5 СУДАРСТВЕНЪЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И СТКРЪТИЯМ И ГКНТ СССР ОПИСАН И К АВТОРСКОМУ СВ ИЗОБРЕТЕНИЯТЕЛЬСТВУ. ъИзобретение относится к медицине, в отмывают один раз средой 199 и разводят частности ктрансплантационной иммуноло-; . до концентрации 4 х 10 клеток в 1 мл. К 0,2 гии, и касается прогнозироьания криза от-, мл суспензии лимфоцитов (конечная.конторжения для снижения частоты центрация 2,6 х 10 клеток/мл) приливают 2 -6отторжения трансплантата вследствие пре,5 мкг конканавалина А в 0,1 мл среды 199 сенсибилизации реципиента к дойорским (конечная концентрация 6,6-.8,3 мкг/мл), ин- НЕА-антигенам. кубируют 50-60 мин при 370 С. ОбработанЦелью изобретения является повыше- ные конканавалином А клетки закапывают.в ние точности выбора донора. лунки с сывороткой реципиента для постаСпособ осуществляют следующим обра- новки микролимфоцитоксического теста. зом. Поставнока реакции, По 1 мкл сыворотВыделение клеток из селезенки. Селе- ки реципиента закапывают в лунку планшезенку донора измельчают ножницами, ку- та Терасаки под вазелиновое масло. 1 мкл сочки селезенки опускают в гомогенизатор суспензии лимфоцитов (концентрация клесо средой 199 и осторожно выдавливают ток 2-3 х 10 /мл) закапывают в лунки. инку 6клетки пестиком. Далее клетки помещают бируот 30-40 мин при комнатной во флако со средой 199, суспензия огстаи- температуре, в лунки добавляют 5 мкл свевается несколько минут для осаждения жеразмороженногокомплемента.кролика и крупных конгломератов, оставшуюся сус- инкубируют один час, закапывают. в лунки пензию наносят на градиентфиколл - верог- . по 3 мкл 5-ного водного раствора эозина, рафина и центрифугируют 35 мин при 400 ц. через 2 мин останавливают реакцию 5 мкл Клетки "облачка", собранные из интерфазы, 40 ф-ного нейтрального формалина, Чтение(54) СПОСОБ ВЫБОРА ДОНОРА ПРИ АЛЛОТРАНСПЛАНТАЦИИ ПОЧКИ(57) Изобретение относится к медицине,преимущественно к трансплантационнойиммунологии, и может быть использованопри выборе донора при аллотранспланта 2.ции почки. Целью изобретения является повышение точности выбора донора. Цель достигается за счет того, что смешивают сыворотку крови реципиента с лимфоцитами донора в концентрации 2,.6106/мл, которые предварительно инкубируются с конканавалином А в дозе 6,6-8,3 мкгlмл на 4 10 ф лимфоцитов при температуре 37 С в течение 50-60 мин, инкубируют, добавляют комплект сыворотки кролика, инкубируют и определяют количество мертвых клеток окрашиванием их водным раствором эозина. Способпозволяет повысить точность прогнозирования криза отторжения на 30 и, следовательно, повысить точность выбора донора.реакции осуществляют при помощи инвертированного микроскопа. Реакцию оцени. вают как положительную, если количествомертвых клеток в опыте было на 100 выше,чем в контроле.П р и м е р 1. Реципиен 1 Д., донор Т,Аллотрансплантация почки 4.02.88, Выбордонора по известному способу- рекомендована аллотрансплантация.Определение по предлагаемому способу.Выделение клеток из селезенки. Селезенку донора измельчают ножницами, кусочки селезенки опускают в гомогенизаторсо средой 199 и осторожно выдавливаютклетки пестиком. Далее клетки помещаютво флакон со средой 199, суспензия отстаивается несколько минут для осаждениякрупных конгломератов, оставшуюся суспензию клеток наносят на градиент фиколл; верографина и центрифугируют 35 минпри 4009. Клетки "облачка", собранные изинтерфазы, отмывают один раз средой 199и разводят до концентрации 4 х 10 клетокна 1 мл, К 0,2 мл суспензии лимфоцитов(конечная концентрация 8,3 мкг/мл), инкубируют 60 мин при 37 С, Обработанныеконканавалином А клетки закапывают в лунки с сывороткой реципиента для постановкиперекрестной пробы,Постановка реакции. По 1 мкл сыворотки реципиента закапывают в лунку планшета Терасаки под ваэелиновое масло,Суспензию лимфоцитов раскапывают по 1мкл в лунку, инкубируют 30 - 40 мин при комнатной температуре. В лунку добавляют 5мкл свежеразмороженного комплементакролика и.инкубируют один час, закапываютв лунки 3 мкл 5%-ного водного раствораэозина, через 2 мин закапывают 5 мкл 40%ного нейтрального формалина для остановки реакции. Чтение реакции осуществляютпри помощи инвертированного микроскопа: проба оказалась положительной, так какколичество мертвых клеток в лунках с сыво.роткой реципиента составило 500 , а в лунках без сыворотки (контроль) 5%,Заключение, Проба положительная -операция не рекомендована. Однако, поскольку способ на стадии проверки, аллотрансплантация проведена 4.02,88 попоказаниям известного способа. Биопсиятрансплантата на четвертый день показалакриз отторжения и 1,03.88 аллотрансплантат удалили.П р и м е р 2. Реципиент Я., донор К.Аллотрансплантация 1.09.87. Выбор донора по известному способу - рекомендована аллотранеплантация.Определение по предлагаемому способу,Выделение клеток из селезенки. Селезенку донора измельчают ножницами, кусочки селезенки опускают в гомогенизатор со средой 199 и осторожно выдавливаютклетки пестиком, Далее клетки помещают 10 во флакон со средой 199, суспензия остаивается несколько минут для осаждения крупных конгломератов, оставшуюся суспензию наносят на градиент фиколл - верографина и центрифугируют 35 мин при 4009.15 Клетки "облачка", собранные из интерфазы.отмывают один раз средой 199 и разводят до концентрации 4 х 10 клеток в 1 мл. К 0,2 мл суспензии лимфоцитов (конечная концентрация 2,6 х 10 клеток/мл) приливают 20 2,5 мкг конканавалина А в 0,1 мл среды 199(конечная концентрация 8,3 мкг/мл), инкубируют 60 мин при 37 С, Обработанные конканавалином А клетки закапывают в лунки с сывороткой реципиента для постановки 25 перекрестной пробы.Постановка реакции. По 1 мкл сыворотки реципиента закапывают в лунку планшета Терасаки под вазелиновое масло. 1 мкл суспензии лимфоцитов закапывают в лунки, 30 инкубируют 30-40 мин при комнатной температуре. В лунки добавляют 5 мкл свеже- размороженного комплемента кролика и инкубируют один час, закапывают в лунки по 3 мкл 50 -ного водного раствора эозина.35 через 2 мин останавливают реакцию 5 мкл40%-ного нейтрального формалина. Чтение реакции осуществляют при помощи инвертированного микроскопа; сыворотка реципиента не проявляет цитотоксического 40 эффекта (все клетки живые).Заключение. Проба отрицательная- пересадка рекомендована. Через полтора года почка функционирует.П р и м е р 3. Реципиент 3 донор К.45. Аллотрансплантация почки 18,04,87, Выбордонора по известному способу - рекомендо. вана аллотрансплантация.Определение по предлагаемому способу.50 Выделение клеток из селезенки. Селезенку донора измельчают ножницами, кусочки селезенки опускают в гомогенизатор,.со средой 199 и осторожно выдавливают клетки пестиком. Далее клетки помещают 55 во флакон со средой 199, суспензия отстаивается несколько минут для осаждения крупных конгломератов, оставшуюся суспензию клеток наносят на градиент фиколл - верографина и центрифугируют 35 мин при 4009. Клетки "облачка", собранные из1725124 сравнению с серопозитивными реципиентами (количество удаленных трансплантатов составляло 40,6 и 70,8 соответственно). Таким образом, больные, имеющие антидонорские.антитела составляют группу риска (51,8), которую позволяет выявить предлагаемый метод. Сравнивая результаты аллотрансплантации у больных, имеющих антитела к донорским клеткам, обработанным конканавалином А, с результатами пересадки, проведенной со.гласно результатам реакции известного способа (у всех 56 исследованных больных реакция - была отрицательная), отмечено улучшение результатов аллотрансплантации на 17 (статистически не достоверное),При сравнении данных по результатам выживаемости пересаженной почки в зависимости от результатов. микролимфоцитотоксического теста по предлагаемому способу и данных по группе больных с положительными реакциями, которые по известному способу: были оценены как отрицательные, т.е. рекомендовалась аллотрансплантация почки, которая и была осуществлена, установлено; что в 71 случаев произошло отторжение пересаженной почки, что является доказательством специфичности предлагаемого способа, так как в этой группе реципиентов не была рекомендована пересадка, поскольку реакция была оценена как положительная,формула изобретения Способ выбора донора при аллотрансплантации почки, включающий постановку микролимфототоксического теста при смешивании лимфоцитов донора и сыворотки крови реципиента с последующим учетом результатов реакции, о т л и ч а ю щ и.й с я тем, что, с целью повышения точности способа, лимфоциты донора.в конечной концентрации 2,6 10 клеток/мл. предварительно инкубируют в присутствии конкана валина А в конечной концентрации 6,6-8.6 мкг/мл в течение 50-60 мин при 37 ОС. Составитель П,БонарцевТехред М.Моргентал Корректор О.Ципле Редактор И.Горная Производственно-издательский комбинат "Патент",.г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 Заказ 1172 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5