Способ диагностики анкилозирующего спондилоартрита

СО 103 СОЛЕ 1 СКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19) 11 1 М 33/5 1)5 ГОСУц АР СТ 8 Е ННЫ ЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТОТКРЫТИЯМ Е ТЕНИ 21) 4 гг) 1 46) 1 12/14 щего спо - повыше ных опре м тесте м о итам ндилоарт ние точно деляют в наличие и больног ен , ате ель но- тольский нститут ге и Мински матоло медици (72) В.И А.Н.Со Е.С.Кал (53) 615 (56) Во 39.(54) СП ф цому анти опредентигена Н тесте по Матвейко яют отнА-В 27 в конкурен итов эдо ова, Л.Г.А тизма, 198 37 отипом и ольше 150 й спонди прототи тельных дОСОБ ДИАГНОСЕГО СПОНДИЛОобретение относибыть использован КИ АНКИЛОЗИТРИТАся к медицине ипри диагностике килозирующнию сложнополож Иэобретется соверики ревмстности ан(АС).Целью ие точности например на среде 199, Нерээбавл сыворотку и каждое иэ приготовленн ведений вносят в объеме 1 мкл в микрокамеры Терасаки. В каждую лу бавляют по 1 мкл инактивированной принятым методом (при 56 С в тече мин) кроличьей сыворотки и инкуб смесь при 22 С в течение часа, после каждую лунку добавляют по 1 мкл к мишеней в концентрации 2 х 10 в 1 мл.бками-мишенями служат лимфоциты периферической крови здоровых людей, выделенные с использованием градиента плотности фиколл-верографина и имеющие в фенотипе антиген Н 1 А - В 27. Инкубацию с клетками-мишенями проводят в течение часа при 22 С, После инкубации в лунки вносят по 5 мкл кроличьего комплемента (пул сывороток крови от 10 - 15 животных), после чего инкубацию повторяют при тех же услоие отно енство к медиц способов заболев о спонди не и кадив гноний, в оартриенную ых разлунки нку до- общение 30 ируют чего в леток- Клетчес эиру обрете пособа я является абораторно овышеиаги АС.Способ о ществ сл об бол осле выявл с помо ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ 2,890.91. Бюл. Мчно-исследоии и перелинский инсти.Левин, Е,Повей, И.П,Тия и И,В,Кош375(088,8)просы ревма лимфоцитотоксического теста по Терасаки антигена НМ - В 27, проводят количественное его определение в сыворотке крови. На первом этапе исследования определяют наибольшее разведение анти-НМ-В 27 тест- сыворотки, вызывающее гибель не менее 80 клеток-мишеней. Для этого готовят ряд разведений тест-сыворотки, например 1,5-, 2-, 3-, 4-кратные на изотоническом растворе,анкилоэирую изобретения стики. У бол токсическо фенотип с ли вороткой к з ке больного количество а токсическом В 27 антиген Н 1 А - В 27 фе равном или б 1684683 А лимфоциН 1.А - В 27о и тест-сыу 3 м всыворотосительное лимфоцитоции с НМ - ровых лиц с ри его количестве, диагностируют анартрит, По сравнем количество агнозов снижаетсявиях Г 10 э)вер 1 е 11 ии всех и)01 едур клетки - мишени окрашивают 1% ным раствором т 1;ицанового синего в течение 10 мин и подсчитывают число мертвых окрашенных клеток под микроскопом Все методические приемы, использованные в настоящем способе. включая температурный режим, время инкубации. концентрацию клеток, оценку реакции, описаны в классической методике Терзсаки и являются общепринятыми.После окрашивания отмечаю лунки, в которых обнаружено не менее 80% мертвых клегок, Наибольшее разведение тест-сыворотки. вызывающее гибель не менее 80 клеток-мишеней, обозначают как "К",Одновременно к тем же разведениям тест-сыворотки вместо инактивированной кроличьей сыворотки добавляют по 1 мкл исследуемой сыворотки крови пациента. Дальнейшие процедуры не отличаются от приведенных выше После окрашивания клеток мишеней определяют наибольшее разведение тест-сыворотки вызывающее ибель не мене 80 клеток-мишеней после цреинкубации ее с исследуемой сывороткой цациента и обозначают его как К .В ряде случаев исследуемая сыворотка пациента полностью нейтрализует актив ность тест-сыворотки (как ее разведений, так и цельной), цо не дает воэможности оцределить К. В этих глучаях исследуемую сыворотку пациента разводят в 2. 4, 8 и 16 раз и тестируют каждое разведение описанным выше способом Отмечают наименьшее разведение (обозначаемое как "С") исследуемой сыворотки пациента, при ин. кубации которого с ест-сывороткой может быть выявлена ибель не менее 80% клеток. мишеней (К)После определения всех указанных параметров относительное количество растворимого антигена Н 1.А- В 27 в мл сыворотки определяют цо формулеР =1000 С ( 1)где Р - количество растворимого антигена в 1 мл исследуемои сыворотки пациента;1000 коэффициент приведения ре зультатов к 1 мл,С наименьшее разведение исследуемой сыворотки цациента, цри инкубации которой с тест-сывороткой может быть выявлена ибель не менее 80% клеток-мишеней;К наибольшее разведение тест-сыворогки, вызывающее гибель не менее 80% клеток-мишеней после преинкубации ее синактивированной кроличьей сывороткой;К наибольшее разведение тест-сыворотки вызывающее гибель не менее 80 5 клеток-мишенеи после преинкубации ее сисследуемой сывороткой пациентаИзобретение иллюстрируют следующими примерами,П р и м е р 1. Больной Х 35 лет,муж,10 Жалобы при поступлении; боли в левом локтевом и коленном суставах, в правом тазобедренном суставе, в шейном отделегозвоночника, Ограничение движений в позвоночнике и во всех суставах нижних ко 15 нечностей, Объективно при поступлении;затруднения при ходьбе, щадит правую ногу, Болезненность и ограничение движенийв коленном и правом тазобедренном суставах, ограничение активных движений до20 почти полного в позвоночнике. Положительные симптомы Шобера и Отто, Умереннаяригидность грудной клетки, Рентгенологические исследования: илеосакральные сочленения не просматриваются, деформация25 обоих тазобедренных суставов за счет сужения суставной щели субхондрального склероза, краевых разрастаний и узур. Ротацияправого бедра кнутри, Остеоартроз коленных суставов Грудной отдел позвоночника30 картина бамбуковой палки", Лабораторные исследования гемоглобин - 125 г/л,СОЭ мм/ч, лейкоциты -11,5 х 10 /л, эоэинофилы 3 , палочкоядерные нейтрофилы3 , сегментоядерные нейтрофилы - 60%,35 лимфоциты - 30 ,моноциты - 4, СРП -2+, общий белок - 79 г/л, альбумин - 56"-,ь,а - 5,1 . а 2 - 9,1, /7 11,4%,у - 18,4 6.Ревматоидный фактор - отранти - ДНК антитела - 5 г/л.40 Методом тканевого типирования цо Терасаки в фенотипе обследуемого выявленантиген Н А-В 27,Количественное определение антигенаНГ А В 27 в сыворотке крови пациента анти 45 Н.А- В 27 проводят как описано выше. Вко рови больного содержание растворимогоантигена Н А-.В 27 было равно 2000.Клинический диагноз: АС, периферическая форма, 1 ст, активности, медленно про 50 рессирующее течение, 1 Ч стадия,функциональная недостаточность 111 степени.П р и м е р 2, Больная Ш, 44 лжен.оленостопных суставах и мелких суставахкистей рук, боли в области крестцово-подвздошных сочленений, скованность по утрам общая слабость Обьективно припоступлении отечность, болезненность при1684683 Следовательно, уровень антигена Н АВ 21 в сыворотке крови свидетельствует об отсутствии у данной больной АС, Клиниколабораторное обследовэние больной подтвердило достоверность диагноза ревматоидный артрит,Таким образом, использование предлагаемого изобретения в лабораторной диагностике АС позволяет существенно повысить ее эффективность зэ счет увеличения точности диагностики. По срэвнению с протОтипом увеличивается точность диагностики, Тэк, по прототипу количество ложно- положительных диагнозов составляет 44 (иэ 56 обследованных 25 были здоровыми), э по предлагаемому способу иэ 56 обследованных точный диагноз был установлен в 100;6. движениях в голеностопных суставах, В коленных суставах определяется хруст, треск, при пэльпэции - баллотирование надколенника, движения ограничены, иэ-за болезненности, В области крестцово-подвздошных 5 сочленений при пальпации отмечается болезненность. Боли при движениях в суставах кистей рук, больше справа, Рентгенологические исследования: в коленных суставах резко сужена суставная щель, 10 имеются костные разрастания до 3 мм, сустэвные концы костей склерозированы, В пястно-зэпястных суставах некоторое сужение суставных щелей, В голеностоп.- ных, крестцово-подвздошных, тэзобедрен ных суставах патологии не выявлено, Лэборэторные исследования; гемоглобин - 110 г/л, СОЭ - 56 мм/ч, лейкоциты - 6,6 х 10 /л, эозинофилы - 5 фпэлочкоядер 9ные нейтрофилы - 6, сегментоядерные 20 нейтрофилы - 59, лимфоциты - 230, моноциты - 1 фД, СРП - 3+, общий белок - 70 г/л, альбумин - 43, а 1 - 9, а 2 - 13, ф - 15 ь, у - 207 ь. Ревмэтоидный фактор: реакция Ваалера-Роуэе 1:128, лэтекс-тест 25 1:320, ДРФ 1:320.У больной выявлен антиген Н А - В 27.В то же время при количественном определении энтигена Н А-В 21 в сыворотке крови обнаружено только 500 УЕ этого эн тигенэ.Клинический диагноз: Ревматоидный артрит, полиартрит серопозитивный,ст. активности, медленно прогрессирующее течение, стадия , вторичный артроз колен ных суставов. Формула изобретения Способ диагностики энкилозирующего спондилоартрита, включающий забор крови, выделение лимфоцитов, определение Н А - В 27 фенотипэ в лимфоцитотоксическом тесте с тест-сывороткой к антигену Н А - В 27, о т л и ч э ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности диагностики у больного, содержащего Н А-В 27 фенотип. дополнительно из крови выделяют сыворотку, определяют в ней относительное количество Н А-В 27 антигена нэ 1 мл сыворотки в лимфоцитотоксическом тесте с тест-сывороткой и лимфоцитэми здоровых лиц, содержащих Н А-В 27 антиген, и при величине, равной или выше 1,500, диагностируют энкилозирующий спондилоартрит. Составитель В, ЛитовченкоРедактор А. Маковская Техред М,Моргентэл Корректор М. Кучерявая Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 3503 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035. Москва, Ж, Рэушскэя нэб 4/5