Способ получения пептона

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК з 1)з С 12 М 1/2 2 ГОСУДАРСТВЕН 1 ЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ЛИСАНИЕ ИЗОБР А 8 ТОРСКОМУ СВИХНЕТЕ ПЬС ГВУ(56) Авторское свидетельство СССРМ 1386654, кл, С 12 И 1 ОО. 1988.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТОНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности.:ф именно к способам получения пеп;она с помощью протеиназ микробного проихождения,Изобретение относится к микробиологической промышленности. а именно к способам получения пептона с помощью протеиназ микробного происхождения,Цельизобретения - ускорение,удешевление процесса и повышение выхода целевого продукта. об осуществляют следующим образом.Для приготовления пел гона жмых мышечной ткани после эксракции аденоэинтрифосфорной кислоты (АТФ) высушивают и измельчают до порошкообрвзного состояния, суспендируют в воде. доводя рН до оптимального значения.В качестве протеолитического фермента предлагается нейтральная протеинаэа ВасИцз зцЬс 11 з (протосубтилин). Фермент характеризуется высокой скоростью гидро- лиза трудноперевариваемых белков (зла ЯО 1675326 Цель изобретения - ускорение, удешевление процесса и повышение выхода ц.левого продкта. Способ получения пеп,она предусматривает фермен 1 ативный гидролиз исход: ,го сыр я - жмь:,:а м шс ной ткани посл. извлечения ад:ноэинтрифосфорной кисло;ы термическую инакивац:ю ферментэ, отделение н рогидролизоданного остатка и распылиткльну о сушку целевого прод кта, при э-с,м,;, нсвт: .ырье предварительно иэмельча,т а ферментативный гидролиэ псюкодяиг и;:.11 УГтилином при рН 7-8 и отно цен.1 и 1 см:ента к СУбстрату 20-4 Р ПЕ/1 Ифг,ечеми.э Р" ч. причем докедэние р 4,4 с.лээ о, щсстяляют рр. ко эм аммиаа, . , 4 л 1стина и коллагена), рН-оптимум действия7,0. Для создания оптимальнь,х значении рН в реакционной смеси используют 25ный раствор аммиака, что исключает в дальн,.чем процесс нейтралэации гидрол лэа и не оказывает влияния на содержание эолы в готовом препа-.ате.Подбор фермент-субс"ратных соотношений и условий гидролиза проводят слеДующим образом.Для ускорения процесса гидролиза жмыха проводят проверку влияния темперэгуры на воемя достижения гребуемого состава гидролиза. Повышение температуры инкубационной смеси до 50 С не приводит к повышению скорости гидропиэа, а, наоборот, прйводит к быстрой термаинактивации ферментов и некоторому замедлению процесса Поэтому оптимальной температурой гидролиэа считают 37:+",С. Проведениегидролиза при температуре ниже оптимальной нецелесообразно, т,е, приводит к значительному снижению скорости реакции,Для определения оптимального фермент-субстратного соотношения проводят гидролиз суспензии измельченного жмыха в концентрации 2-20% при количестве фермента 10-40 ПЕ/100 г субстрата, Продолжительность гидролиза составляет во всех случаях 24 ч, Полученные данные представлены в табл. 1.В табл, 2 представлены качественные характеристики целевого продукта.Для получения пептона из жмыха мышечной ткани с помощью бактериальных протеиназ целесообразно использовать концентрацию фермента 20-40 ПЕ/100суспензии субстрата,Наилучшее качество гидролиээта достигается при концентрации субстрата 8- 127 ь, Именно эти концентрации и используют для определенного времени гидролиза жмыха бактериальными протеинаэами.Определение аминного азота и свободных аминокислот гидролиэатов показало, что после 12-16-часового гидролиза накопление аминного азота происходит преимущественно за счет свободных аминокислот, что ухудшает качество пептонэ, поэтому продолжительность гидролиза не должна превышать 8-10 ч. П р и м е р 1. Жмых мышечной ткани после извлечения АТФ высушивают и измельчают до порошкообразного состояния, 50 г сухого жмыха суспендируют в 450 мл воды, доводят рН раствора до 7,0 с помощью раствора аммиака, вносят нейтральную протеиназу В. зцЬИ 1 з в количестве 100 ед. (20 ПЕ на 100 мл 107 ь-ной суспензии) протеолитической активности, Гидролиз проводят 8 ч на качалке (150 об/мин) при 37 С, После окончания гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100 С в течение 30 мин, Смесь охлаждают, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин, супернатат фильтруют через 5-6- слойный марлевый фильтр при 4 - 6 С для удаления жира. Фильтр диофилиэируют, полученный препарат пептона фасуют в стеклянную посуду.П р и м е р 2, 50 жмыха мышечной ткани, подготовленного по примеру 1, суспендируют в 450 мл воды, рН 7,0 доводят раствором аммиака, Вносят нейтральную протеинаэу В, зцЬ 1 Из в количестве 150 ед, протеолитической активности (30 ПЕ на 100 мл 10-ной суспенэии), Гидролиз про 5 10 15 20 25 30 35 40 4550 55 водят 10 ч на качалке при 37 С, Полученныйгидролизат обрабатывают по 1.П р и м е р 3, 60 г измельченного жмыхасуспендируют в 450 мл воды, доводят рНраствора аммиаком, вносят нейтральнуюпротеинаэу В, звЬИ 1 з в количестве 150 едпротеолитической активности (30 ПЕ на100 мл 10% ной суспгнзии). Гидролиз пооводят на качалке в течение 8 ч при 37"СГидролиэат обрабатывают по примеру 1.П р и м е р 4, 8 кг измельченного жмыхасуспендируют в 92 л воды, доводят рН раствором аммиака до 7,0, Вносят фермент вколичестве 3000 ПЕ (20 ПЕ на 100 мл 18" ной суспензии). Гидролиэ проводят е реакторе при 37"С и работающей мешалке втечение 8 ч. После окончания гидролизафермент инактнвируют прогреванием при100 С в течение получаса, Смесь охлаждают, сепарируют при 8000 об/мин и вцгушивают на рэспылительной сушке. г 1 репаратпептона фасу от в стеклянную посуду,П о и м е р 5. 26 кг измельченногожмыха суспендируют в 190 л воды, доводятрН до 7,0 и вносят нейтральную протеиназуВ. зоЬтИ 1 з в количестве 86400 ПЕ (40 ПЕ на100 мл 12 Д-ной суспенэии). Гидоолиэ проводят в реа торе при описанных условиях втечение 10 ч. Дальнейшую обработку гидролиэата проводят по примеру 4.П р и м е р 6. 8 кг сухого жмыхасуспендируют в 60 л воды доводят рН до 7,0с помощью раствора аммиака и вносят27200 ПЕ протеиназы В, зоЬ 1 И 1 з (40 ПЕ на100 мл 12 ной суспензии), Гидролиз проводят в реакторе при описанных условиях втечение 8 ч Порошок пептона полчают посхеме примера 4,Предлагаемый способ позволяет использовать отходы производства с получением стандарт ного продукта.Формула изобретенияСпособ получения пептснэ, предусматривающий ферментативный гидролиз исходного сырья - жмыха мышечной тканипосле извлечения аденозинтрифосфорнойкислоты, термическую инактивацию фермента, отделение непрогидролизованногоостатка и распылительную сушку целевогопродукта, отл ичающийс я тем,что,сцелью ускорения, удешевления процесса иповышения выхода целевого продукта, исходное сырье предварительно измельчают,и ферментативный гидролиз проводят протосубтилином при рН 7 - 8 и соотношениифермент-субстрат 20-40 ПЕ/100 мл суспенэии в течение 8-10 ч, поичем доведение рНпри гидролиэе осуществляют 25;4-нымраствором аммиака,.Таблица 1 Продолжение табл.1 Таблица 2 ектор Э.Лончако дактор И.Дерб Техре та роиэводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 10 Заказ 2976 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5