Способ определения антиоксидантной активности липидов крови

СНИХщмципщатк 33 А 9) О 1) СПУБ ЛИК ИЕ ИЗ АВТОРСН(21 (22 (46 й хиенДАН хи- уми позо именн иоксидан еских жи скси т быт костеи, для опр тивности обретени кращение деления анти липидов кров ользовано дантнои Цель ности и- повышение тремени определ ия.Способбразом.Пельнуюором цитр ляется следующ с табилизируютия, разделяюттем центрифугили эритроцит асткровь с ата натр оциты пу ю крови со смесь о спирта плаз- ироваму и эритрния. Порц смешивают пропилово в гептана и изо- :1 (по обьему),ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ПЮТ СССР(71) Институт физико-органическмии АН БССР и Минский государстный медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИТНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИПИДОВ КРОВИ(57) Изобретение относится к биомии и предназначено для оценкимарной окислительной стабильноспидов крови, Цель изобретения -вышение точности и сокращение вр ение относится к биохимии, способам определения анной активности биологиС 01 И 33/49 33/92 ни определения, Способ заключается встабилизации крови цитратом натрия,разделении плазмы и эритроцитов центрифугированием, экстрагировании липидов из плазмы или эритроцитов смесью гептана и изопропилового спирта,отделении гептанового экстракта,его сушке сульфатом натрия, внесениив экстракт раствора азобисизобутиронитрила в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию ингибитора вэкстракте 0,0095-0,0105 мг/мл, насыщении кислородом и определении количества поглощенного кислорода с последующим расчетом периода индукциии скорости скисления Изобретениепозволяет сократить время анализа в2 раза и повысить точность определения в 2-5 раз. 2 табл. центрийугируют и выдерживают для раслоения фаз, Гептановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, К1,5 мл гептанового экстракта, эквивалентного 0,03 мл плазмы, добавляют 0,5 мл раствора азобисизобутиронитрила (АИБН) в гептане концентрацией 0,038-0,042 мг/мл, что обеспечиает в итоге концентрацию инициа в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мл, Раствор насыщают кислородом, термостатируют при 600,2 фС и измеряют количество поглощенного кислорода во вре мени Й) манометрически, Кинетическую кривую поглощения кислорода пред ставляют в координатах (О,) -(ь)1 Ь,при этом кривая трансформируется вломаную линию, .состоящую из двухучастков, По тангенсу угла наклоналевого участка ломаной находят величину обратной максимальной скорости5окисления (7 ок )Перпендикуляр, опущенный,из точкиизлома на ось абсцисс, отсекает наней отрезок, численно. равный обратной, величине. периода индукции Ярнзначениям 7 и ьА определяют 7ли ьиндОтличительной особенностью способа является то, что азобисизобутиронитрил вводят в гептановый экстракт 1и в виде раствора в гептане в количестве, обеспечивающем концентрациюинициатора в экстракте 0,00950,0105 мг/мл. Это позволяет сократить время анализа в 2 раза и повысить. точность определения с 2-10 до0,9-1,4 Х,П р и м е р 1. 1,5 мл экстрактаплазмы крови донора (регистрационныйномер Минской станции переливаниякрови 0200047) смешивают с 0,5 мл раствора АИБН в гептане концентрацией0,034 и 0,038 мг/мл, что обеспечивает в итоГе концентрацию инициаторав экстракте 0,0085 и 0,0095 мг/мл.Насыщают пробу кислородом, термостатируют при 6010,2 ОС 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода во времени при указанной темпе 6.ратуре, Графически определяют ьцпд=34,5+0,8 и 30,2+0,4 мин, 7 п =6,9 3;+0,5 и 7,21 О,З мм /мин соответственнодля концентраций инициаторов 00085и 0,0095 мг/мл.Таким образом,при концентрацииАИБН менее 0,0095 мг/мп увеличивается40длительность определения антиокислительной активности липидов в среднем на. 14 Х и возрастает ошибка анализа (с 1,3 до 2,3 для периода индукции).П р и м е р 2. 1,5 мл экстрактаплазмы крови донора (регистрационныйномер Минской станции переливаниякрови 0200047) смешивают с 0,5 млраствора АИБН в гептане концентрацией 0,042 и 0,046 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептановом экстракте 0,0105 и0,0115 мг/мп.Насьицают пробу кислородом, термо"статируют при 6010,2 фС 1 мин и изме 55ряют количество поглощенного кислородаво времени при указанной температуре,Графически определяют Ь ряд=27, 110,3сь и 26,410,9 мин, 7 =7,4+0,4 и 7,5 1М:0,7 мм /мин соответственно для концентраций инициаторов 0,0105 и0,0115 мг/мл.Как видно из приведенных данных,.увеличение концентрации инициатора(более 0,0.105 мг/мл) приводит к возрастанию ошибки определениянд и7 ок(с 1,1 до 3,4 Х для периода индукции и с 5,4 до 9,3 для скорости окисления),Использованием в предлагаемомспособе указанных граничных значенийконцентраций инициатора (0,00950,0105 мг/мл) достигается ускорениеаналйза при повьппении точности измерения,Кроме того, в пределах указанныхзначений АИБН возможно получениевоспроизводимых результатов, сравнимых в различных сериях экспериментаи получаемых разными исследователями, АИБН в гептане концентрацией0,042 мг/мл обеспечивает в итогеконцентрацию инициатора в гептановомэкстракте 0,0105 мг/мл.Насьпцают пробу кислородом, термостатируют при бО+0,2 С 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода по времени при указанной температуре. Графически определяютСн,==27, 1+0,3 мини 7 щ=7,4+0,4 мм /мин,П р и м е р ы З-б, Проводят опыты аналогично примеру 2 за тем исключением, что используют кровь доноров возрастной группы 29-39 лет и конечную концентрацию инициатора в экстракте 0,01 мг/мл,Результаты определения антиоксидантной активности липидов плазмы доноров приведены в табл. 1, а статической обработки этих данных - в табл, 2 (хБх).Из приведенных данных видно, чтопо предлагаемому способу индукционный период сокращается в 1,96 раза,а скорость окисления возрастает в8,15 раэ по сравнению с известным,что приводит в целом к значительномусокращению времени определения антиоксидантной активности,Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает сокращение времениопределения антиоксидантной активности липидов крови и повьппение точности метода,1644033 Формула изобретения Таблица 1 Л( ын ОК юммз /мин Пример. Доноры Регистрационный Воз- Полномер 14 инской растстанции переливания крови 7,3 ф 0,4 28,6+0,4 020047 31 1 фужской 37,710,5 4,6+0,3 29 5,0+0,3 4,2+0,2 27,4+0,3 21,8 ф 0,2 29,8+0,3 39 5,4+0,2 38 Т аблица 2 Показатели по способу Параметры предлагаемому известному 2906 Й 2865,300,49 57,0+4,00,650,11 1, 15+0, 20(от 2 до 10) ькП р и м е ч а н и е: Результаты, полученные по предлагаемому способу, сравнивают с данными, установленными по известному способу у мужчин анало 1гичной возрастной группы. Составитель Н,ГуляеваТехред Л,Олийнык Корректор М,Самборская Редактор В.Гунько Заказ, 1237 Тираж 437 Подписное% ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Способ определения антиоксидантной активности липидов крови путем стабилизации крови, разделения плазмы и эритроцитов, экстрагирования липидов смесью гептана и изопропанола, отделения гептанового экстракта, его сушки, внесения в него азобисизобутиронитрила в органическом раство 020015 020016 041896 015847 О6, минЪ ф "ф" /минОшибка одиночногоизмерения:ЬИНрителе, насыщения экстракта кислородом и определения количества поглощенного кислорода с последукицим расчетом периода индукции и скорости окисления, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности исокращения времени определения, азобисизобутиронитрил растворяют в гептане и используют в конечной концентрации в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мп.