Способ определения флавонолов в растениях

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК С 12 О 1/00 ВЕННЫЙ КОМИТЕТЕТЕНИЯМ И ОЧНРЫТИЯ ССР ГОСУД АРСПО ИЗОБПРИ ГКН ПИСАНИЕ ИЗОБРЕ ИЯ именла АН БССР не ен отаническогоСборник,НОВОСИ НО к б зобретени химии относится кособам определ растении, кбиологически активных веществ, чественному опред ению именно к колифлавонолов,Цель изобрьност ния - сокращроцесса,должител Сущиследующимм душно-сухого сырний пустырникач 11 озпз ЭезГ)раствора компленостями, ед/мл:ПектатлиазаПектинлиазаЦеллюлаза К иланаза ерживают при 3 Затем четыре е в те ыд атно экс ги(21) 4648077/13 (22) 07.02.89(56) Актуальные вопросы бресурсоведения в Сибири.изд-во "Наука" СО АН СССРбирск, 1976, с. 206-209.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФВ РАСТЕНИЯХ(57) Изобретение относитс ть изобретения поясняетс рами.1. 3 г образца возья 2-летних растеолосистого (1.еопцпзаливают 30 мл водноса ферментов с акти мии растений, к способам определениябиологически активных веществ, ано к количественному определению фвонолов, Целью изобретения являетсясскращение продолжительности процесса, Растительное сырье перед экстрагированием этиловым спиртом подвергают воздействию комплекса Ферментов.содержащего пектаазу, пектинлиазу,пеллюлазу и ксиланазу, Причем обработку проводят водным раствором комплекса Ферментов с активностями,ед/мл: пектатлиаза 800-1200; пектин-.лиаза 50-90; целлюлаза 0,8-1,2 ксиланаза 0,8-1,4 при 29-31 С в течение 2,0-3,0 ч. 4 табл. руют с обратным холодильником при нгревании на кипящей водяной бане(по 20 мин с каждой свежей порциейэтилового спирта, равной 30 мл). Поченные экстракты объединяют и испар ют досуха на водяной бане, В сухой остаток тотчас приливают 4 мл спирта,1,0 мл этого экстракта наносят на хроматограяическую бумагу "Ленинградскаясредняя 11. Хроматограмму с нанесенным экстрактом разгоняют в смеси уксусной,муравьиной кислоты и воды в соотношении 10:2:3 восходящим способом в течение 24 ч при комнатной температуре. Высушенную хроматограмму проявляют путем опрыскивания 10 г,-ным спиртовым раствором хлористого алюминия. Пятна флавонолов, окрашенные в желтый и желто-зелень 1 й цвет, отмечают при просвечивании в УФ-свете, вырезают, измельчают и исчерпывающе элюируют1 О а Уг к 20 30 40 95-96 Е-ным спиртом (сначала 5 мл,затем 2-3 раза по 2 мл) при нагревании на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин,Элюат доводят тем же спиртом до объема 10 мл и измеряют оптическую плотность раствора с помощью Аотоэлектроколориметра при синем светоАильтрев кюветах с толщиной слоя 2 см, Параллельно в тех же условиях хроматографируют стандартный раствор рутинадля построения калибровочного графика. Содержание Алавонолов в образцеопределяют по формуле где А - содержание Алавонолов в образце растения, мг/100 г;а - содержание Алавонолов (мг) в1 мл элюата, найденное покалибровочному графику;Р - объем экстракта образца, мл;Ч - объем нанесенного на хрома(тограмму экстракта образца,млЧ - объем элюата, мл;К - коэААициент пересчета содержания Алавонолов на 100 гсырья; Содержание Флавонолов в образце сырья пустырника волосистого, определенное согласно описанному методу, составляет 74,5 мг/100 г.П р и м е р ы 2-5Осуществляют аналогично примеру 1, за исключением того, что используют водный раствор комплекса Ферментов с различными активностями (см,табл. 1). Содержание Алавонолов (мг/100 г сырья). определенное согласно примерам 2-5, приведено в табл, 2,Таким образом, наиболее полное экстрагирование Алавонолов из растительного сырья наблюдается при использовании комплекса Аерментов (примеры 1, 3, 4) с активностями, ед/мл: Пектатлиаза 800-1200Пектинлиаза 50-90Целлюлаза,8-1,2Ксиланаза 0,8-1,4П р и м е р ы. 6-9, Осуществляютаналогично примеру 1, за исключениемтого, что обработку растительногосырья водным раствором комплекса ферментов проводят при различных температурах (см.табл. 3),Таким образом, наиболее полноеэкстрагирование флавонолов из растительного сырья наблюдается при 29-31 С(примеры 1, 7, 8), Увеличение температуры до 33 С (пример 9) не увеличивает количество Алавонолов, экстрагируемых из растительного сырья,П р и м е р ы 10-13. Осуществляютаналогично примеру 1, за исключениемтого, что обработку растительногосырья водным раствором комплекса ферментов проводят в течение различноговремени (см,табл. 4).Таким образом, наиболее полноеэкстрагирование Алавонолов наблюдается при обработке сырья в течение2-3 ч.Формула и 3 о б р е т енияСпособ определения флавонолов врастениях, предусматривающий воздействие на растительное сырье для обеспечения полноты извлечения, исчерпывающее экстрагирование этиловым спиртом и колориметрирование элюатов, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью сокращения продолжительностипроцесса, растительное сырье передэкстрагированием этиловым спиртомподвергают воздействию комплексаферментов, содержащего пектатлиазу,пектинлиазу, целлюлазу и ксиланазу,причем обработку проводят воднымраствором комплекса Аерментов с активностями, ед/мл:Пектатлиаза 800-1200Пектинлиаза, 50-90Целлюлаза 0,8-1,2Ксиланаза 0,8-1,4при 29-31 С в течение,2,0-3,0 ч.1631088 Таблица 1Подбор состава ферментного комплекса для выделения флавонолов Ферменты Активности ферментов, ед/мл, по примеру 2 (контроль) 1(оптимум) 5 (контроль) 400 1200 1,2 1,4 Таблицаог состава ферментного комплекс ависимость выхода флаво Содержание флавонолов, мг/100 г, по пример оптимум) . 4 контроль контроль 5,0 74,блица Зависимость вых авонолов от температ ья, по примеру Содержание флавонолов, мг/100 6 (контроль) 7 25 С 29 9 (контроль 33 Сопти 30 С 62,2 74,7 Таб Зависимость выхода флавонолов от длительно обработки сырья ние флавонолов, мг/1 имер сырья,10 (контроль 1 5 0 74,4 у 5. 73,9 Составитель Н. Родова,Техред Л,Сердюкова Корректор Т, Палий тор елемеш ГКНТ ССС Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,О 1 Пектатлиаза ПектинлиазаЦеллюлазаКсиланаза аказ 524НИИПИ Государст Тираж 363енного комитета13035, Москва,800 1000 50 70 0;8 1,0 0,8 1,2 1 (оптимум)2,.5 ч Подписное изобретениям и открыти Раушская .наб., д. 4/