Способ диагностики инфаркта миокарда

СОЮЭ СОВЕТСНИХОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИК 1)500 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ СТ ватель-. Шуратов следовая87. АРКТА к медиц инфаркт ся к медицине, и а кта миосуществляют ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ,И ОТНЯТИЯПРИ ГНЯТ СССР Н АВТОРСКОМУ С 8 И(56) Лабораторные методы ив клинике. М,: Медицина, 1(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИМИОКАРДА(57) Изобретение относитсяне, а именно к диагностике Изобретение относита именно к диагностике Ф ркарда.Целью изобретения является повьппение специФичности диагностики инфаркта миокардаСпособ о следующим образом.Полученные с помощью гибридомнойтехнологии моноклональные антителапротив митохондриальиой креатинфосфокииазы (КФКмит) сорбируют на полистироловом планшете и инкубируют ссывороткой крови. пациентов. Содержание КФКиит определяют по калибровоч-,ной кривой с помощью стандартных приемов иммунофермеитного анализа (ИФА).На основании количественного показателя содержания КФКмит в сывороткекрови ставят диагноз о наличии инфаркта миокарда (ИМ),миокарда. Цель изобретения заключаетсяв повьнпении специфичности диагностикиинфаркта миокарда. Сущность изобретения состоит в том, что с помощью иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против митохондриальной креатинфосфокиназы определяют ее содержание в сывороткекрови, и при величине концентрацииФермента свьппе 100 нг/мл диагностируютинфракт миокарда, что позволяет повысить специфичность диагностики инфаркта миокарда за счет исключениязаболеваний, не связанных с сердечнососудистой патологией. Способ иллюстрируется примерами.П р и м е р .1. В 96-луночные план ,шеты из полистирола вносят по 0,3 мкг моноклональных антител в 200 мл фосфатно-буферного физиологического раствора (ФБфР) в лунку и выдержи-. вают 18 ч при 4 С, затем раствор сли-вают и планшет промывают 4 раза ФБФР, содержащим .0,057 Твин.(ФБФРТ), заливают на 30 мин ФБФРТ, содержащим 0,17 человеческого сывороточного аль бумина, после чего планшеты готовы к непосредственному тестированию. Пробы сывороток крови или очищенный препарат КФКмит, используемый для построения калибровочной кривой, вносят по 200 мкл. в лунку и инкубируют 1 ч при 37 С, после инкубации реакционную смесь сливают и 4 раза промывают ФБФРТ, после чего в лунки вносят конъюгат (КФКмит, конъюгиро 1582131ванная методом пернодатного окисления С пероксидазой хрена) и ннкубнруют 1 ч при 37 С добавляют шщикаторный раствор, в состав которого5 входит перекись водорода и хромоген - ортофенплендиамин, и определяют ин" тенсивность окраски при длине волны 492 нм. Количество КФКмит в тестируемой пробе обратно пропорционально 10 интенсивности окраски. Чувствительность метода составляет не менее 1 О нг/мл.Для построения калибровочной кривой в лунки вносят сыворотку, полу ченную от группы здоровых доноров.На этом фоне титруется КФКмит таким образом, чтобы охватить диапазон от 1000 до 0 нг/мл.Для каждой калибровочной или не известной пробы рассчитывают В/Во, где В - средняя интенсивность окраски в пробах, содержащих калибровочные или неизвестные образцы; В - средняя интенсивность окраски в пробах, содер.25 жащих 0 нг/мл КФКмит.Для определения содержания КФКмитв тестируемых пробах строят граФикзависимости В/В от концентрации30оКФКмнт в координатах 1 оц 11-1 о 8 (осьординат 1 одз.С В/В= 1 п ( / ),В/Воь ось абсцисс - логарифмическая. Концентрацию КФКмит в неизвестных пробах оп ределяют на основании значений 1 о 81 В/В, на калибровочном графике.При определении содержания КФКмитв сыворотке крови здоровых доноров и фпациентов, перенесших ИМ.,были полученырезультаты, представленные в таблице.В пробах У 1-5 сыворотки крови здоровых доноров 1 о 81 = 2,768 + 0,239, 45 в пробах 0 6-11 сыворотки крови пациентов, перенесших ИМ эа 24-48 ч до определения, 1 о 81 С = 1,270+0,160, концентрация КФК равняется 7 и 130 нг/мл соответственно, если брать среднее значение, определенное по калибровочному графику. В качестве граничных значений содержания КФКмит у здоровых доноров и пациентов, перенесших ИМ, установлены показатели до 50 и свьппе 100 нг/мл соответственно, При значеНиях, близких к граничным, необходимо повторение опыта и привлечение результатов других методов диагностики.Номер пробы 1 о 81 С 3,20 2,47 2,77 2,67 2,73 1,33 1,31 1,33 1,27 0,934 1,45 0,025 Ое 022 0,014 0,007 0,061 0,028 0,034 0,028 0,027 0,035 0,008 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 О 11 0,442 0,424 0,433 0,430 0,432 0,364 0,362 0,364 0;359 О,.Й 5 0,374 П р и м е ч а н и е. В - средняя по четырем параллельным измерениям оптическая плотность, ух - статистиче - ская ошибка среднейв/в,1 о 81 С = 1 п0 Формула изобретения Способ диагностики инфаркта миокарда, включающий определение содержания, креатинфосфокиназы в сыворотке крови человека, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повьппения специфичности диагностики, в сыворотке крови определяют содержание митохондриальной креатинфосфокиназы с помощью П р и и е р 2, Способ определения содержания КФКмит в сыворотке крови осуществляют аналогично примеру 1 . Тестируют сыворотку пациентов с ножевым ранением, желудочным кровотечением, нарушением сердечного ритма, артериальной гипертонией, бронхиальной астмой и при инфаркте миокарда через 72 ч после развития некроза. Во 1всех случаях содержание КФКмит не отличалось от ее содержания в сыворотках крови контрольной группы, состав,ленной из здоровых доноров.Таким образом, повьппение специфичности способа диагностики инфаркта миокарда достигается за счет количественного определения именно КФКмит в сыворотке крови человека, тогда как 1изменения активности других форм креатинфосфокиназы, регистрируемые при диагностике инфаркта миокарда известным способом, могут быть обусловлены , заболеваниями, не связанными с сердечно-сосудистой патологией.5 15821316иммуноферментного анализа с примене- и при концентрации фермента свыше нием моноклональных антител против 100 нгlмп диагностируютинфаркт миомитохондриальной креатиифосфокиназы карда,Составитель А. СкуратРедактор А. Маковская Техред П.олийнык Корректор В.ГирнякЗаказ 2086 Тирах 511 Подписное РцИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 1 О 1