Способ дифференциальной диагностики острого инфаркта миокарда и стенокардии

(5)5 6 01 й 1/26 ПИСА РЕТЕНИ ГОСУДАРСТВЕН.ЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(56) Клебанов Г.И. и др. Гетерогенность рецепторного аппарата полиморфно-ядерныхлейкоцитов крови. - В кн.: Биологическиемембраны, 1977, 4, 10, 1084-1091. Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для диагностики острого инфаркта миокарда и стенокардии.Цель изобретения - повышение точности способа диагностики острога инфаркта миокарда и стенокардии.Способ осуществляется следующим образом.Иэ венозной крови в количестве 10 мл выделяют нейтрофилы на градиенте плотности верографинафиколла. Для этого кровь, отобранную с гча-солью этилендиаминтетрауксусной кислотой, разводят в 4 раза 0.9 фб-ным раствором йаО и наслаивают на раствор верографинфиколла (б " 1,077- 1,078 г/смз) по 7 мл в каждую, пробирку и центрифугируют 40 мин при 400 д. После центрифугирования образуется осадок эритроцитов и гранулоцитов. Нейтрофилы располагаются пленкой на поверхности осадка. 5 Ц 1704011 А 1(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОГО ИНФАРКТА МИОКАРДА И СТЕНОКАРДИИ(57) Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и кардиологии. Целью является повышение точности дифференциальной диагностики. Цель достигается тем, что исследуют нейтрофилы крови, в которых определяют интенсивность свечения кепов" мембран клеток и при интенсивности этого свечения от 0,009 ус.ед. и ниже определяют острый инфаркт, а при интенсивности свечения от 0,010-0,014 усл,ед, - стенокардию. Способ позволяет равно провести диагностику ИБС и скорректировать псследующее лечение. я получения взвеси гранулоцитое удаля ют верофи колл, а осадок, содержа щ.1 и эритроциты и гранулоцитц, разводят в 1 мл физиологического раствора. Содержимое пробирок объединяют и переносят в силиконированные пробирки, где осаждают эритроциты 10-ным раствором желатина (конечная концентрация желатина - 1 ). В течение 45-60 мин при 37 С эритроциты лизируют 0.836-ным раствором МН 4 С 1. После перемешивания осадка фракции, содержащей гранулоциты с десятикратным объем раствора МН 4 С 1, центрифугируют ее 5 - 10 мин при 400 9, Процедуру повторяют несколько раэ до полного освобождения гранулоцитов от эритроцитов, Проверяют жизнеспособность клеток по трипановому синему и подсчитывают в камере ГоряеваВыделенные клетки доводят до рабОчей концентрации 2,0-2,5 10 кл/мл и инкубируют с люминесцентными коньюгатами кроличьих иммуноглобулинов против иммуноглобули 1704011нов человека в течение 15 мин при 37 С. Отмывают двукратно в среде 199 и делают препараты, которые просматривают с помощью люминесцентного микроскопа ЛМИ 2 с использованием объектива хб 0(водная иммерсия) и окуляра х 8.Подсчитывают на мазке 50 нейтрофилов и среди них выделяют следующие морфологические варианты или типы свечения: ринг (г 1 п 9) - кольцо флюоресценции, видимое в ультрафиолетовом свете, демонстрирует равномерность распределения меченых комплексов на клеточной поверхности. пэтч (ратсп) - нарушается равномерность свечения клеточной поверхности, образуются разрывы кольца с появлением зон с усиленным или ослабленным свечением; кэп (сар) или шапочка - процесс перераспределения в плоскости мембраны заканчивается объединением мелких комплексов в массивный агрегат, который принято называть колпачком,Иэ перечисленных трех морфологических форм выбирают для анализа толькоклетки с кэпами как наиболее демонстративные по типу свечения мембраны.Интенсивность свечения выбранныхклеток измеряют в условных единицах, показания снимаются с фотоэлектронного умножителя, установленного на микроскопе.Подсчитывают интенсивность свечениякаждой клети следующим образом: регистрируют показания ФУ единичной клетки ивычитают иэ него значение интенсивностисвечения фона -участка "чистого поля", расположенного рядом с этой клеткой.Рассчитывают среднее арифметическоезначение интенсивности свечения анализируемых клеток, В том случае, если величина рассчитываемого показателяйаходится в диапазоне 0,009 усл.ед. и ниже, то ставится диагноз острый инфарктмиокарда; диапазон 0,010 - 0.014 усл.ед, -стенокардия, значение интенсивности свечения нейтрофилов 0,014 усл. ед, и вышехарактерны для здоровых лиц.П р и м е р 1. Больной Ш., 55 лет,поступил в клиническое отделение кардиологии с диагнозом - подозрение на инфарктмиокарда. Клинические данные соответствовали классической картине острого инфаркта миокарда; наличие выраженногоС олевого синдрома, симптомов недостаточности кровообращения (сердечная астма)существенное снижение уровня артериального давления (95/55 мм рт.ст.),Забор крови был произведен в первыесутки с момента поступления больного вклинику. По представленному способу оп 5101520 Дальнейшее наблюдение эа состоянием больного показало, что произошло длительное и существенное снижение длительности и интенсивности приступов боли в области сердца, уровень АД за время наблюдения был стабильным (130/180 мм рт.ст.). Лабораторно-биохимические методы исследования позволили исключить наличие у больного острой ишемии миокарда, ЭКГ не отражала признаков нарушения коронарного кровообращения, гиперферментемия отсутстввовала,Результаты ЭКГ с дозированной физической нагрузкой, толерантность 75 Вт х 3 мин, причина прекращения пробы-типичный приступ стенокардии, смещение сегмента Т в двух отведениях на 1 мм, Совокупность вышеизложенных данных позволила клиницистам определить диагноз как ИБС, стенокардия напряжения И функциональный класс.Способ позволяет корректно судить о состоянии рецепторного аппарата нейтрофилов эа счет о енки функционально активных его компонентов на поверхности клеток. При этом отработаны количественные критерии, позволяющие проводить дифференциальную диагностику острого инфаркта миокарда и стенокардии. Использование данного метода позволит адекватно судить об эффективности фармакорегуляции синтеза рецепторов, кэппинге, сбросе их или интернализации. Контролирование и коррекция этих процессов принципиально необходимы при реализации современных методов терапии, предлагаемых молекулярной иммунологией. 25 30 35 40 45 50 55 Формула изобретенияСпособ дифференциальной диагностики острого инфаркта миокарда стенокардии путем иммунофлуоресцентного исследования полиморфно-ядерных лейкоцитов крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью реде ена интенсивность свечения кзпов - 0,007 усл. ед. что позволило поставить диагноз - острый инфаркт миокарда.П ри м е р 2. Больной 6.,50 лет, поступил в клинику кардиологии с интенсивными болевыми приступами за грудиной с иррадиацией в левое плечо и лопатку. Боли держались в течение 6 ч до момента купирования их фармакологическими средствами.Исследование пробы, взятой в первые сутки с момента поступления больногов клинику, на определение функционального состояния рецепторного аппарата нейтрофилов показали значения интенсивности свечения капов 0,012 усл.едчто позволило предположить у больного наличие стенокардии.1704011 Составитель Л.СтебаеваТехред М.Моргентал Корректор С.Черни Редактор Е.Папп Заказ 56 ТиражПодписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб,. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина. 101 повышения точности способа, исследуют нейтрофилы, в которых определяют интенсивность свечения "касоа" мембран клеток и при свечении 0,009 усл.ед. и ниже диагносцируют острый инфаркт, а при свечении 0,01(НЭ,014 усл. ед. - стенокардию.