Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов

.801 56419 1)5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И (ИНОБЫТИЯПРИ П 1 НТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕВТОРСКОМУ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВУ тательную среду, в которую добавляют лейкоцитарный человеческий интерферон в разведении 1/60-1/40. Посевосуществляют локально на поверхности среды, После инкубирования культуру инактивируют и наслаивают питательную среду, в которой суспендируют тест-культуру СогупеЪасег 1 цшхегоз 1 з ГИСК В 181. После повторнойинкубации посевов изучают локализацию колоний тест-культуры, Если исследуемая культура обладает антиинтер.фероновой активностью, то вокруг колоний вырастают колонии тест-культуры. венныи Р 0 бретение тноситсягии и мож еди- быть цинскои микробно использовано при пределении биологмикроорганизмов. ческои активности Исследуемую культ у высев на п пептонном бульоне раст номерной взвеси. На мя зобр микр ие относится к ме логии и может быт в виде рпептонном исп агаре образу нии диаметрофизиолого Развивает ет гладкием 1 мм.-биохимичесся как в аэусловиях,еско ные колоопределении биологмикроорганизмов,ано приивности Фч 4 Ь 4 ь е признаки осуществления способа бных, так и тимум роста т штамм который 181 ризнака культуры использ 1 пш хегозз 4060 под номером ГИСК уется следующими естве тест огупеЬас 1:е епонированхарактери в анаэробны22-37 С.Расщепля арозу альУ зу, л улез очев глюкозу, галакт не ферментиру декстр ахмал,Культурально-морфологические при гликоген. На кровяном агаре зоны гемолиза не образует. Чувствителен к эритр тетрациклину, пенициллиВеличина клеток суточной культурына обычном мясопептонном агаре 1,52,00,3-0,5 мк, Грамположительны,располагаются при росте. частоколоми под углом друг к другу. Тело палочки окрашивается неравномерно, по кон-цам располагаются круглые зерна, окрашиваемые более интенсивно. Хорошорастет без добавления сыворотки на .простых питательных средах. На мясо" омицину,ну,н к препарату ч итарного интерф- 1/64 разведеникого лейкоцитар лове- рона: препа ого вствит ского леикоМПК/512, МБ та человече терферона..093.1 (088.8)Б ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИИНТИВНОСТИ МИКРООРГАНИ 12 Ч 1/02 (С 12 Ц 1/0212 К 1;15),К 1,5 -ному питательному агару добавляют препарат человеческого лейкоцитарного интерферона в разведении51/60-1/40 и разливают в чашки Петри.После застывания среды и ее подсушивания на поверхность наносят петлейв виде отдельных "пятачков" суточнуюагаровую культуру исследуемых штаммов. Чашки инкубируют сутки при 37 С,после чего выросшие колонии бактерийубивают парами хлороформа в течение20-25 мин, а затем на "пятачки" культур разливают слой питательного агара(3-4 мл) с 0,2 мл 1 млн. взвеси суточной агаровой культуры СогупеЬасйехыш хегозз, 4060. Затем повторно инкубируют чашки 24 ч при 37 С.20Учет опыта проводится по наличиюроста С. хегозхв. Тест-культура вырастает вокруг колоний тех атаммов, которые нейтрализовали внесенный в питательную среду человеческий лейкоцитар.25ный интерферон.Способ иллюстрируется следующимипримерами.П р и м е р 1. Оценивают нирулентность изогенных вариантов бактерийшигелл Флекснера с наличием и отсутствием антиинтерфероновой активности,С этой целью инбредных мышей заражаютвнутрибрюшинно в дозе 5.10 исследуемых бактерий на мьппь. В результатев опыте со штаммом, у которого опреде.ляется антиинтерферононая активность,иэ десяти мышей погибает на третьисутки 5 мышей, на пятые сутки - еще4 мыши. Летальность составляет 907 40В опыте со штаммом, у которого антиинтерферононая активность не определяется, погибает 1 мышь на пятые сутки эксперимента. Летальность составляет 10 Е.45Таким образом, наличие антиинтерфероновой активности у бактерий отражает их нирулентные свойства,/П р и м е р 2. На иэогенных вариантах шигелл Флекснера с наличием иотсутствием антиинтерферононой активности определяют персистирующие свойства бактерий.С этой целью инбредных мышей по25 шт. н каждой группе внутрибрюшинно55заражают исследуемыми штаммами микроорганизмов н дозе 5 10 микробныхклеток на мьппь. Начиная с четвертого дня мьппей забивают по 2 шт. из каждой партии через каждые три дня иделают нысевы из печени и селезенкина бактоагар Плоскирева с подсчетомвыросших колоний.Результаты опыта показывают,.чтоштамм, обладающий антиинтерфероновойактивностью, задерживается в организме мышей в два раза дольше, чем изогенный вариант этого штамма, не обладающий данным свойством,П р и м е р 3. У пациента И, определена бактериурия 10 тыс. КОЕ(штамм Е.со 1 Ь ). Проведенное исследование на наличие у ныделенного штамма антиинтерфероновой активности дало отрицательный результат. Полноеклиническое обследование и дальнейшее наблюдение позволили сделать заключение, что пациент здоров,Наличие бактериурии в данном случае расценено как контаминация мочи"транзиторной" (непатогенной) микрофлорой без антиинтерфероновой активности.П р и м е р 4, Больная К. Бактериурия 10 тыс. КОЕ (возбудитель Е. со 11). У возбудителя выявлена антиинтерферононая активность. На основании клинических признаков и бактериологического исследования поставлен диагноз: латентный пиелонефрит. На четвертый день пребывания н стационаре присоединилась вторичная вирусная инфекция с клиникой острого бронхита, протекавшего длительно, н тяжелой форме. На протяжении всего периода лечения сохранялась стабильная бактериурия: 0-20 тыс.КОЕ (возбудитель Е. со 1 Ц с антиинтерферононой активностью, Воэникнонение ослож,нений в данном случае расценено как случай возникшего иммунодефицита на фоне латентного пиелонефрита, вызванного возбудителем с наличием антипнтерферононой активности.Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет выявить и изучить свойство бактерий, по которому возможно проводить идентификацию патогенных бактерий, оценку вирулентных и персистентных свойств бактерий, возникновение и прогнозирование осложнений вирусной (бактериальной) природы на фоне разнившегося иммунодефицитного состояния (по интерферону) макроорганиэма.1 О Составитель Г. СмирноваРедактор А. Маковская Техред Л.ОЛийнык Корректор Э, Лончакова Заказ 1139 Тираж 483 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, ЖРаушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 5 15649Формула изобретенияСпособ определения антиинтерферонорой активности микроорганизмов, заключающийся в том, что исследуемую культуру микроорганизмов выращивают на питательной среде в присутствии человеческого лейкоцитарного интерферонав разведении 1/60-1/40,1 6выросшую культуру инактинируют, напосев наслаивают второй слой питательной среды, содержащей взвесь тесткультуры СогупеЬасгег.шп хегоззГИСК 9 181, посев инкубируют и определяют антиинтерфероновую активностьмикроорганизмов по наличию ростатест-культуры вокруг колоний испытуемой культуры.