Штамм бактерий bacillus suвтilis как тест-культура для испытания алюминиевых сплавов на биостойкость

ОЮЗ СОВЕТСКИХ ЦИАЛИСТИЧЕСКИ ПУБЛИН(19) (11) 8//1; 125 зо х логи палоче ценных тупыми к цами ры 0 ца соеди 0,8 х 2 -ьцые, под и, ко я опр цепи. Разетки грамп лоы кости м именноЦель кте ВКМВрактеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРТР:Н 0/ :ИДТЛСТ(56) Паньков И.М. и др. Влияние микроорганизмов, выделенных из мест обрастаний водорослевого культиватора на коррозию металлов, Изв.Сиб.отд. АН СССР, 1973, )1 5, 1, с. 80-86.Лучина М.А. Участие железомарганцевых микроорганизмов в коррозии стальных конструкций гидроэлектростанций. - В кн.: Обрастание и биокоррозия в водной среде. М.; Наука, 1981, с, 142-14 7. етение относится к биотехнокасается нового штамма бактеорый может быть использован деления бактериальной стойталлических материалов, а алюминиевых сплавов.изобретения - новый штаммобладающий более высокой коррозионнои активностью.Штамм выделен из продуктов корро зии алюминиевого сплава ДТ, отоб ранных с силового элемента конструк ции техники, эксплуатировавшейся в гропическом районе,Полученный штамм В.яцЬг.11 дз 1647 Д (27 Б) имеет следующие ха стики.Морфолого-культуральные признаки, осле 24 ч инкубации на мясо-пептоном агаре (МПА) при 30 С вегетативИ)4 С 12 И 1/20, С 12 О //(С 12 Х 1/20, С 12(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАСП,1,% БЦВТ 11,18 КАК ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ ИСПЫТАНИЯАЛЮМИНИЕВЫХ СПЛАВОВ НА БИОСТОЙКОСТЬ(57) Изобретение касается биотехнологии, а именно нового штамма бактерий, который может быть использовандля определения бактериальной стойкости алюминиевых сплавов. Цельюизобретения является новый штаммбактерий Вас. зиЬС).1).з ВКМ В(27 Б), обладающий более высокойкоррозионной активностью. Штамм выделен из продуктов коррозии алюминиевого сплава ДТ и способен в течение 60 сут при 22-24 С осуществлятна 50 Е деструкцию материала, 1 табл. ые клетки имеют форму пря вижные. ЮВ клетках, выращенных на МПА+2 Е ( Д глюкозы, внутриклеточцые гранулы, не- ф окрашиваемые фуксином, не обнаружены. (,фКапсулы у клеток на обнаружены.Образуют эллипсовидные споры, по одной в клетке, занимающие центрально в терминальн положение (среда МПА, 30 С, возраст культуры 7 сут). Спорангий не раздут. Размеры спор 0,8 - 0,9 х 2,1 - 2,3 мкм.ЬПри нагревании до 80 С в течение 10 мин споры сохраняют способность к прорастанию.На МГА (48 ч. инкубации при 30 С) культура образует плоские колонии, 14 79508круглые ипи неиравипьной Формы, грязно-белого цвета, непрозрачные. Край колоний нечеткий, поверхность матовая, структура в центре зернистая,5 консистенция мягкая, Диаметр колоний 8 - 12 мм. Обратная сторона колоний также грязно-белого цвета, Флуоресценция не обнаружена, пигментов в среду не выделяют. 1 ОНа картофельном агаре через 48 ч инкубации при 30"С поверхность колоний становится складчатой, коричневатого цветаПри росте в мясо-пептонном бульо не МПБ (30 С, инкубация 48 ч) на поверхности образуют толстую складчатую пленку грязно-белого цвета, вызывают помутнение среды и изменение рН от 7,0 до 6,0. Выпадения осадка 20 и роста по стенке пробирки не наблюдалось.Физиолого-биохимические признаки.Гетеротрофы, аэробы, Температурныйоптимум 30 - 35 С, минимум 5 С, максимум 55 С. Активно растут при рН5,5 - 8,5 (оптимум 7,0).В МПБ с 77.-ной Г 1 аС 1 вызывают помутнение раствора, Усваивают глюкозуи ксилоэу с образованием кислоты, а 30газ не образуют. Маннит и арабиноэуусваивают очень слабо. Активно используют цитрат, в меньшей степенипропинат,Нитраты восстанавливают до нитритов. Каталаэо-положительны. РеакцияВогес-Проскауэра положительная. Насреде с триптофаном индол не образуют,Крахмал и каэеин гидролизуют. Желатину разжижают (мешковидное разжижение). Тирозин не разлагают. Уреазнаяактивность выражена слабо, Фенилаланиндезаминазу не образуют. Лецитиназной активностью не обладают.1Вызывают коррозию изделия из алю миниевых сплавов при непосредственном контакте с ними. Наибольшая коррозионная активность проявляется при культивировании на среде БСА (1 ч Г 1 ПА + 1 ч СА) при 22 - 24 ОС.50Антагонистические свойства по отношению к другим культурам, выделенным в тех же условиях, отсутствуют,Хранение штамма осуществляют в лиофильно-высушенном состоянии в стерильных ампулах. Непродолжительное время (до 4 мес. без пересева) может храниться в холодильнике в пробирках с агариэованной средой. Культура не является патогенной.П р и м е р 1. Выделение штамма.0,1 г измельченных в ступке продуктов коррозии алюминиевого сплава,содержащих споры штамма В. здЬ 111 зВКМВД, переносят с соблюдениемстерильности в чашку Петри с застывшим МПА и тщательно растирают шпателем. Затем этим же шпателем протирают поверхность МПА последовательно во2-й, 3-й и 4-й чашкахЧашки закрывают крышками и инкубируют в термостате при 30 С в течение 2 - 3 сут.Обычно в первых двух чашках после инкубации наблюдают сплошной рост микроорганизмов, тогда йак в последующих - изолированные колонии,Для получения чистой культуры используют метод Коха. Часть бактериальной массы из изолированной колониипереносят микробиологической петлейна поверхность МПА в чашке Петри,распределяют шпателем по поверхностиМПА во 2-й, 3-й и 4-й чашках, какэто описано выше, иинкубируют при30 С в течение 2 - 3 сут, Пересевповторяют 1-2 раза, Полученную культуру проверяют на чистоту путем визуальной оценки, микроскопированияи посевом на сусло-агар (СА) с последующей инкубацией при 30 С в течение 10-12 сут. (для выявления микологических загрязнений), Чистую культуру переносят в пробирку со скошенной средой МПА и инкубируют 23 сут при 30 С,Полученную культуру используютдля заражения питательной среды приоценке бактериальной стойкости алюминиевых сплавов.1П р и м е р 2. Оценка бактериальной стойкости алюминиевых сплавов.Испытания проводят контактным методом, сущность которого состоит ввыдерживании образцов металлов на поверхности агаризованной среды, инокулированной тест-культурой.Расплавленную среду БСА разливают в чашки Петри и дают застыть.Чашки со средой слегка подсушиваютдля удаления конденсационной воды.На поверхность среды в каждую чашкупомещают небольшое количество (1 микробиологическую петлю бактериальноймассы В.зцЬ 11 дв ВКМВД за 23-суточной культуры и растирают шпа.телем. Культуру инкубируют при 22 -24 С. Через 2 - 3 сут, когда в чаш14 79508 10 15 20 тест-культуры повышает достоверностьоценки бактериальной стойкости алюминиевых сплавов. 25 Формула изобретения Штамм бактерий Вас 111 ця яцЪд 1 дя ВКМВкак тест-культура для испытания алюминиевых сплавов на биостойкость. ШтаммВ.яцЪ 1111 я В КМВ74 7 ПВКМВ28 42,2 60,0 46,7 44,4 66,7 48,9 51,1 33,3 26,7 6,7 24,4 31,1 20,0 24,4 Составитель 3. ФалунинаРедактор М. Недолуженко Техред М.Ходанич Корректор И, Муска Заказ 2504/25 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101 ках наблюдается сплошной рост бактерий, на их поверхность кладут образцы иэ алюминиевого сплава. размером130 х 15 х 2 мм. Образцы предварительнообрабатывают следующим образом: двухкратно промывают в ацетоне, высушивают н воздухе, затем протирают ватнымтампоном, смоченным этиловым спиртом,и фламбируют (несколько раз обжигают над пламенем горелки). Количество образцов должно быть не менее 5 ч.Контролем служат такие же образцы,помещенные на поверхность стерильнойсреды БСА,Чашки помещают в эксикатор, в котором поддерживается влажность 96983 за счет налитой на дно эксикатора стерильной дистиллированной водыдля предотвращения высыхания среды. Продолжительность экспозиции опытных и контрольных образцов 60 сут, при 22 - 24 С. По окончании испытаний образцы извлекают из чашек Петри и дезинфицируют в 57-ном растворе фенола или формальдегида в течение 3 ч. Затеи образцы с помощью скальпеля очищают от продуктов коррозии, промывают в этиловом спирте, высушивают и проводят исследование их поверхности на профилографе. Бактериостойкость материала обратно пропорциональна площади пораженной поверхности образцовВ таблице представлены в сравнении результаты испытаний на бактериостойкость образцов из алюминиевого сплава ДТ с использованием в качестве тест-культур штаммов В,яцЪ 11 я ВКМВ 1647 Д и В,яцЪС 11 я ВКМВ.Испытания показали, что при использовании в качестве тест-культуры предлагаемого штамма площадь пораженной поверхности образцов за тот же промежуток времени возрастала в 2 ра" за и более, а первые очаги коррозии появлялись на 7 - 10 сут раньше, что подтверждает его большую активность. Контрольные образцы коррозии не подвергались.ИспользОвание активного штамма В;яцЪТ 1 я ВКМВ7 П в качестве