Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr, используемый в качестве тест-культуры для идентификации гемолизина типа ii подтипа холерных вибрионов

(54 Е 1 Т КУЛ НА ОНО (57 ско поль ен ио оситс 1 едиц Изо кой мщии и може решении т быть иссон оми и х о ольз ОВ ано лерныхЦел брио зобр ения - пол бриона эль ние штар про ного в его ге л сливин тип уциа т м пассированияиона эльтор 149содержащихНа этих средахран клон с ване лизируюций уцируюций гемосрле ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ 1(56)Кз.сйап 1 яоп К,: е а 1, Нешо 1 уя 1 п ;РгойцсЫоп апй с 1 оп 1 п 8 оГ Тюо Нешо 1 увж йеТеппдпапя йгош с 1 аяяса 1 чкЬгко сЬо 1 егае, - 1, 1 п 2 ес 1 оп апс 1 1 щпцпз.су, 1986, Ботт., р.415-420. ИТА 121 БАКТЕРИЙ 71 ВК 10 СНО 1,ЕКАЕ К, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ- ТУРЫ ДЛЯ 1 ЩЕНТИФИКАЦИИ ГЕИОЛИЗИИПА 11 ПОДТИПАХОЛЕРНЫХ ВИБРИИзобретение относится к медицин- микробиологии и может быть исзовано при решении таксономии тамм получен пут штамма холерного виб на питательных среда 1,5% эритроцитов овц методом селекции ото данными свойствлми - эритроцигы овцы, про 2 холерных вибрионов, Цель изобретения - получение штамма холерного вибриона эльтор, продуцирующего гемолизин типа 11 подтипа /, штамм получен путем селекции холерного вибриона эльтор на питательных средах, содержащих эритроциты различных видов животных. Нтамм депонирован под номером И 1 Р 81, Итамм холерного вибриона эльтор К 11 Р 81 не лизирует эритроциты овцы и человека, однако имеет выраженную литическую активность по отношению к эритроцитам морской свинки. Для обнаружения гемолизина штамм 21 Р 81 выращивают на мясопептонном бульоне н течение 18- 20 ч при 37 С и ставят пробу по Грейо Ф гу, которую зачитывают через 30 мин, При наличии в исследуемом материале гемолизина типа 11 подтипа /Ъ наступает ливис эритроцитов морской свинки.й лизин, активный по отношению к эрптроцитам морской свинки. Птамм ЛЪг 1 о СЬо 1 егае е 1 ог 149 Н 1 у +Суре 11 яцЬСуре 3 депонирован под номером КМ Кф 81 и характеризуется следующими ;.ризнаками.Культурально-морфологические признаки. В мазках - вибрионы, в поле пазово-контрастного микроскопа типичная для вибрионов подвижность.Прототрой,На жидких и плотных питательныхедах образуется типичный для хорного вибриона рост: на 1%-ной гептонной воде, диААузное помутнение1 б 02865 Формула и з о б р е т е н и яШтамм бактерии ЧдЬгхо СЬо 1 егаее 1 ог 1 И Р 81, используемый в качестве тест-культуры для щентификации гемолизина типа 11 подтипахолерных вибрионов,на поверхности нежная голубая пленка, на щелочном агаре - крупице,круглые с ровными краями, плоские,прозрачные в проходящем свете колонии,Биохимические свойства.5Штамм разлагает глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, маннозу,сахарозу, маннит, крахмал - образованием кислоты без газа. Продуцируетацетилметилкарбинол, индол. Декарбоксилирует лизин, орнитин. Не расщепляет арабинозу, не дегидролизируетаргининНе образует сероводород.Обладает протеолитической активностью,1Серологические свойства.Штамм агглютинируется О холернойсывороткой до титра, сывороткой Огавадо титра, с Инаба сывороткой не дает полохительных результатов. 20Фагочув ствительно сть,Лизируется фагом Эльтор до. титра,фагами:ЦФ 3,4,5 до ДРТ, относитсяк 10 фаготипу по Дрожевкиной-Арутюнову, не лизпруется фагом С. 25Чувствительность к антибиотикам,МЗК тетрациклина 0,015 мкг/мл.Растет на полимиксине - 30 ед/мл.Реакция гемагглютинации полохительная.Реакция Фогес-Проскауэра положитель 30ная. Вирулентность для кроликов-сосунков, Обуславливает холерогеннуюреакцию в дозе 10 м.к,Способ, условия хранения и состав среды для хранения штамма агарИартена, рН 7,2,посев уколом, сох 35раняют под вазелиновым маслом прикомнатной температуре.П р и м е р 1. Для выявления продукции гемолизина штамм КИ Р 81 (149)выращивают на мясопептонном бульоне,рН 7,2, в течение 18 ч при 37 С, который в дальнейшем используют для постановки пробы по Грейгу, титрованияв лунках полистироловых пластин или 45наносят пятнами на пластинки агара,содержащие 1,5% эритроцитов морскойсвинки. В пробе по Грейгу используют1%-ную взвесь эритроцитов морскойсвинки, а в.лунки пластин вносят поодной капле 2,5% этих же эритроцитов,Указанные объекты для тестированиягемолизина ставят в термастат при37 ф на 30 мин и зачитывают результатпо наступившему гемолизу эричроцитов.55Дпя определения активности гемолизина полученную культуру центрифугируют при 8000 об/мин н в надосадочной жидкости определяют наличие гемолизина и его титр с помощью 1%-ной взвеси эритроцитов морской свинки на физиологическом растворе, Гемолизин обуславливает лизис эритроцитов морской свинки при 37 С в течение 30 мин. Титр гемолизина 1;800,Полученный гемолизин, продуцируемый штаммом, фильтруется через керамические свечи, лизирует эритроциты морской свинки в течение 30 мин при 37 ОС как в.жидких (1%-ные взвеси эритроцитов), так и на плотных (1,5%- ные взвеси эритроцитов) питательных средах, Не разрушает эритроциты человека и овцы.П р и м е р 2. Исследуемый штамм холерного вибриона эльтор высевают на плотные питательные среды, содержащие 1,5% эритроцитов овцы, и: после пнкубации в течение 18-20 ч при 37 С отбирают колонию, не образующую зоны лизиса, Параллельно высевают тест-культуру - штамм 149. Далее с обеими культурами ставят пробу по Грейгу с 1%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Наличие лизиса эритроцитов морской свинки и отсутствие лизиса с эритроцитами овцы свидетельствует о наличии у штамма гемолизина типа 11 подтипа. При исследовании штаммов классического биовара этап высева на плотные среды с эритроцитами овцы исключается, поскольку холерные вибрионы классического биовара продуцируют гемолизин типа 11 подтипа , с этими культурами непосредственно ставят пробу по Грейгу с эритроцитами морской свинки. В качестве контроля используют штамм 149.Использование штамма позволяет проводить идентификацию холерных вибрионов по тесту образования гемолизина соответствующего типа. Кроме того, штамм может быть использован как носитель стабильного маркера при изучении структуры гена холерного вибриона.