Способ определения адреналина в биологическом материале

СООЗ СОВЕТСКИХСОЦИДЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН гг 91 11 1 Н 33/74 51) ВЩОЮЗНАЙ1 ЕЯИО- ТЕХНИ%ВКАЛБ 11 Б ЛИОТ ЕКА ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИ ЕЛЬСТВ 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИ ОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛ АЛИН пособ осущеэом,электродныйбуфер рН 7,6.ферментный иаэной (МАО) аадреналинаПй смесью кисл ствляется следующим осуд помещают борат Затем туда же добав епарат с моноаминоный ляю ктивностью и растропускают над реак ород, затем плотно ор едлагаемого способа заминирования адрен йствпем биоспецпфич ора с монсампиоксид основе п жит реакция длина под воздкого катализа с инкубируют смесь иммобилизованный ывают сосуд37 С, Вынимаю ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР(71) Латвийский государственный университет им. П. Стучки и Институтэволюционной физиологии и биохимииим. В.М. Сеченова АН СССР(56) Во 1 шо 1 С. В 1 о 1 оя 1 са 1 ассунтеапппез. С 11 п 1 са 1 В 1 осйеппвТту,Вет 1 хп - Нею - ЗоЖ, 1974, р . 855870 Изобретение относится к области Физико-химических методов анализа, в частности к потенциометрическому определению микроколичеств адреналина в биологическом материале, и может быть использовано в фармакологии.Цель изобретения - ускорение способа при одновременном повышении ее точности.(57) Изобретение относится к фиэикохимическим методам анализа и может быть использовано в фармакологии.Цель - ускорение способа при одновременном повышении ее точности. В электродный сосуд помещают обратный буферрН 7,6, Ферментный препарат с моноаминооксидазой и раствор адреналина,добавляют хлористый калий, инкубируют в присутствии биокатализатора смоноаминоаксидазной активностью прирН, большем или равном 12, до полного дезаминирования адреналина, Потенциометрически определяют метиламин -продукт превращения адреналина. Продолжительность способа сокращается в2-3 раза, а ошибка метода уменьшаетсяна 8,5 Е,препарат из реакционнои среды, добавляют хлорид калия до насыщения, закрывают сосуд пробкой с вмонтированным в нее рН-электродом с каплей тритона Х. Снова пропускают над реакционной смесью кислород, а затем через капилляр вводят раствор гидроксида натрия до рН 12 и выше для полного выделения метиламинч, После установ - ления постоянного потенциала регистрируют показания рН-метра и по градуировочной прямой определяют концентрацию адреналипа, Чувствительность способа составляет 5 1 О и.ной активностью (МАО), полученногоиз митохондрий:ОНносн-снвнсн +н оИЮ2 3но-(-сн-снощн,сн,1+к,о, " ОНОбразующийся при дезаминировании метиламин в присутствии насыщенного5 раствора хлорида калия можно вытеснить из реакционной среди и, таким образом, определить его количество потенциометрически. Градуировочная прямая в координатах Е (потенциал) отрицательный логарифм концентрации адреналина, полученная при полном дезаминировании адреналина показывает, что область линейной электродной Функции достигает 50 6 моль/л.П р и м е р 1, Анализ содержания адреналина в экстракте сердца морской свинки.Способ реализуют в устройстве для определения моноаминов. В электрод 30 ный сосуд помещают 1 мл 0,1 М боратного буфера рН 7,6, 2 мл экстракта и 1 мл дистиллированной воды. Затем добавляют 0,06 г Ферментного препарата с МАО активностью и пропускают над реакционной смесью кислород в35 течение 5-10 мин. Плотно закрывают сосуд и инкубируют смесь при 37 С в течение 60 мин. Далее вынимают Ферментный препарат из реакционной сре 40 ды, добавляют туда 1,2 г хлорида калия, закрывают сосуд пробкой с вмонтированным в нее рН-электродом с каплей Тритона Х. Снова пропускают над реакционной смесью кислород в течение 5-10 мин, а затем через капилляр вводят раствор гидроокиси натрия 5 М до рН 12 для полного выделения метиламина. После установления постоянного потенциала (30 мин) регистрируют показания рН-метра и по градуировочной прямой определяют концентрацию адреналинаравную 5 10 моль/л.П р и м е р 2 Анализ содержания адреналина в моче кошки.Предварительно выделяют из пробы мочи катехоламины (КА) путем адсорбции на окиси алюминия в щелочной среде, Адсорбированные норадреналин и дофамин легко окисляются кислородом,особенно в присутствии тяжелых металлов, что позволяет отдельно определить адреналин, так как адреналинокисляется только при рН 3. Приготовленный таким образом элемент используют для определения адреналина, Вэлектродный сосуд помещают 1 мл боратного буфера рН 7,6 и 1 мл элюента,добавляют 2 мл дистиллированной воды.Затем туда же добавляют 0,06 г Ферментного препарата с МАО активностью.Далее проводят операции аналогично .примеру 1, По градуировочной прямойопределяют концентраций адреналина,равную 5 10 М.П р и м е р 3. В электродный сосуд помещают 2 мл 0,1 М боратногобуфера с рН 7,6, добавляют 1,8 мл дистиллированной воды. Затем туда же добавляют 0,06 г биокатализатора с МАОактивностью и 0,2 мл раствора адреналина 0,Е (т.е, 2,5 1 О 4 моль/л).Далее проводят инкубацию аналогичнокак в примере 1. Пссле инкубации добавляют 1,2 г хлорида калия, пропускают кислород, а затем вводят растворгидроокиси натрия до установления рН2,0. Через 30 мин после полного выделения метиламина и установления постоянного потенциала регистрируют показания рН-метра и по градуировочнойпрямой определяют концентрацию адре"налина, равную 2,5 О 4 моль/л.П р и м е р 4, В электродный сосудпомещают 2 мл 0,1 М боратного буферарН 7,6, добавляют 1,8 мл дистиллированной воды, 0,06 г биокатализаторас МАО активностью и 0,2 мл раствораадреналина 0,17. (из ампулы). Далеепроводят анализ аналогично примеру 1,.за исключением установления рН среды при выделении метиламина равным12,5,По градуировочной прямой определяют концентрацию адреналина, равную2,52 10 моль/л. Таким образом, рНфсреды 12,5 обеспечивает полное выделение образовавшегося метиламина.Предлагаемый способ обладает следующими преимуществами по сравнениюс известным:продолжительность определения адреналина составляет 2-2,5 ч, в известном 5-6 ч;высокая точность определенияошибка метода составляет 1,5 Е, поизвестному способу.5 562858формула изобретения Составитель Н. ГуляеваРедактор Л. Гратилло Техред М.Дидык Корректор Л. Бескидс Заказ 1062 Тираж 510 . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж,. Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Способ определения адреналина в биологическом материале, включающий обработку исследуемой пробы с последу 5 ющим определением продукта превращения адреналина и расчетом его калиб" ровочной кривой, о т л и ч а ю щ и й " с я тем, что, с целью ускорения способа при одновременном повышении 6точности, к анализируемой пробе до" бавляют хлористый калий до насыщения, инкубируют в присутствии биокатализа" тора с моноаминоксидазной активностью при рН, большем или равном 2, .до полного дезаминирования адреналина, а в качестве продукта превращения адреналина определяют метиламин, содержание которого регистрируют потенциометрически.