Способ определения хлорофоса и прозерина

(19) И 2831 01 И 27 48 с 30 ЦДЯ- "ДЧ 1(ф ТЕНИ ЛБЛ О ел ЕЛЬСТВ 5 62.И носится к аналити нно к Способам ко чественно и прозерина, и мо при определен я к аналитик способамения хлоробретение относихимии, а имениственного опредпрозерина.ь изобретенияповышение чувсЬР ОО ческ олич фося упрощение анатвительности оп ределе ского оперина исе электрохимиче лорофоса и проз ферментный элек нэстеразы (ХЭ), путем включения В спосо еления,Р п трод на иммоби зуется но ол лен лизованнои. из нитрата ванием акти гф ионов Са Определе торов ХЭ осиспользо вия на Х целлюлозы ХЭвируюшего дей нгиб 1 ие субстратов ковано на элек мичес ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЧИРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕН АВТОРСКОМУ СВИД(21) 4485080/31-2 (22) 11.07.88 (46) 07.05.90. Бюл (71) Казанский го верситетим. В.И. (72) Г.К.Будников Э.П.Медянцева и И (53) 253.543 (088 (56) Будчиков Г.К мия хелатов метал дах. - М.: Наука,Уэбб Л. Ингиби метаболизма. - М. (54) СПОСОБ ОПРЕД ПРОЗЕРИНА.8)и др. Электрохилов в неводных сре, с. 24. торы ферментов иМир, 1966, с. 8 ЕЛЕНИЯ ХЛОРОФОСА еделения хлорофосажет быть использоваи фосфорорганически инсектицидов в объектах медицины и окружающей среды. Целью изобретения является упрощение анализа и повыше ние чувствительности анализа. Цель достигается электрохимическим определением хлорофоса и прозерина с применением ферментного электрода на основе холинэстеразы, иммобилизованной путем включения в пленки из нитрата целлюлозы, и использованием активирующего действия на хоглинэстеразу ионов Са . Вольтамперо грамму регистрируют в интервале потенциалов (-0,1) - (-О,8) В, Концен рацию хлорофоса или прозерина определяют по высоте пика при потенциале -0,55 + 0,05 В. Нижняя граница оп ределяемых содержащий ингибиторов-гсоставляет 9 10 М для хлорофоса и 210 М для прозерина. 1 табл. кой активности одного из продуктов гидролиза субстрата, специфичного к ХЭ-бутирилтиохолиниодида (БТХИ), Продукт гидролиза БТХИ-тиол способен образовывать меркаптид ртути, который восстанавливается на ртутном капель- ном и амальгамированном серебряном электродах.На вольтамперограммах БТХИ на стационарном ртутном электроде с серебряной подложкой наблюдается небольшой пик при потенциале -0,55 +0,05 В относительно насьцценного каломельного электрода, который бшстро растет по высоте в присутствии ХЭ, При введении в исследуемый растворг+ионов Са в к 1 личестве 1 О20 3 10 9 моль/л пик при потенциале -0,55 В относительно насыщенного каломельного электрода резко возрастает, так как вблизи активного центра ХЭ имеется а.нионная группа; которая препятствует взаимодействию фермента с субстратом. При связывании этой группы ионами Са в данной области Концентрации условия для образования комплекса Михаэлиса становятся Наиболее благоприятными.Лктивирующее действие проявляют Ионы Иа 9 М 82; Мп 9. однако максимальный активирующий эффект на ХЭ ока 5 ;бывают ионы Са в приведенной области Концентраций.Высота пика уменьшается в присутствии ингибиторов ХЭ и зависит от Концентрации ингибитора в ячейке.Измерение осуществляют следующим образом.Ферментный электрод и электрод сравнения погружают в анализируемый раствор, содержащий буферный боратный раствор рН 9,05 и раствор БТХИ.о Раствор термостатируют при 25 С, продувают током водорода или аргона,и снимают вольтамперограммы в интерва,пе потенциалов (-0,1) в ,(+0,8) В. Минимальный объем анализируемого раствора составляет 4-5 мл,Использование ферментного электрода с иммобилизованной ХЭ позволяет многократно использовать дорогостоя. Щий фермент, что доказывает экономическую рентабельность предлагаемого способа определений, использование активирующего действия ионов Са2 Л значительно повышает чувствительность анализа. Нижняя граница определяемых концентраций для хлорофоса составляет 9 10моль/л для прозерина2 .10 чф моль/л.П р и м е р. Определение концент45 рации хлорофоса и прозерина для (5 О - 910 ") моль/л хлорофоса и (1 10-нВ мерную колбу на 5 мл вводят 2,5 мл бидистиллированной воды, 1 мл 150 стандартного раствора БТХИ с концентрацией 0,005 г/мл, добавляют 0,06 лил 0,84 М раствора СаС 129 добавляют от 1 мкл (маленькие объемы отмеряли микрошприцом на 10 мкл) до 0,5 мп стандартного раствора ингиби 55 тора с концентрацией 10 моль/л 9 до водят боратным буферным раствором до метки, перемешивают и переносят в электролитическую ячейку с насыщенным каломельным и ферментным электродами, Удаляют кислород продуванием в течение 15 мин (время достижения равйовесия реакции гидролиза должно быть постоянным во всех определениях) аргоном или электролитичес. ки генерированным водородом. Снимают вольтамперограммы в интервале потенциалов (-0,1)-(-0,8) В при скорости наложения потенциала 1 В/с при непрерывном режиме полкризации с треугольной разверткой потенциала. Измеряют высоту катодного пика .при потенциале -0,55 В. Строят градуировочную прямую, выражающую зависимость высоты катодного пика от десятичного логарифма концентрации ингибитора. Неизвестную концентрацию ингибитора находят по градуировочному графику, который описывается уравнением У = -(0,72+0,07)х - ( 1 952+0 63), г = О, 9952 для хлоро фоса и уравнением У = -(1,84+0,08)х- -(3,95+0,58), г = 0,9983 для прозе- рина.В таблице приведены результаты определения хлорофоса и прозерина,Способ количественного определения хлорофоса и прозерина может быть использован и для определения боль - 3 ших концентраций ингибитора (10 10 ) моль/л по градуировочным графикам У = -(0,40+0,01)х-(0,36+ +0,07); г = 0,9944 для хлорофоса и- ( 19064.0903)х (0930+0901) 9 г0,9960 для прозерина, В этом случае можно не добавлять ионы Сагл Ошибка определения не превышает 8 Е,Способ позволяет на несколькопорядков снизить нижнюю границу определяемых содержаний ингибиторов (до 9 10 моль/л для хлорофоса и-2до 210 моль/л для прозерина) и11упростить процедуру определения.Данным способом можно определить содержание ингибиторов ХЭ в объектах окружающей среды.Формула изобретенияСпособ определения хлорофоса ипрозерина, заключающийся в оценкестепени ингибировання хлорофосом ипрозерином ферментативной реакциигидролиза субстра 1 а холинзстеразы 9о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью увеличения чувствительности1562831 раствор ионов кальция в количестве 1 1 О - 3 10моль/л и регистрируют вольтамперограмму в интервале потенциалов (-0,1)-("0,8) В, а концентрацию хлорофоса или прозернна определяют по высоте пика при потенциале - ,-0,55+0,05 В. Ингибитор Введено С;, Найдено С моль/л моль/л, х р 10 Хлорофос Прозерин Составитель Т.НиколаеваРедактор Н,Лазаренко Техред М,Ходанич Коррект ректоМ.Шарохин Заказ 106 1 Тираж 509.ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТНТ СССР113035,.Москва, Ж, .Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент , г.ужгород, ул. Гагар11 31Гага нна 1 О 1с определения н упрощения анализа, висследуемый раствор специфичногосубстрата холинэстеразы - бутирилтиохолиниодида опускают ферментный элек трод ,на основе,иммобилнзованной путем включения в пленку из нитратацеллюлозы холинэстеразы, добавляют 1,00 100,500,60101,00 109,5.101,00 100,40.101,00 101,50 101,00 108.,0010 1,00"1 О 1,50 10 1,00 10 7 0,1010 2,00 10 9,00 10 1,00 10 2,00 100,80 10 1,00 10 2.00 10 1 5" 10 3,4 4,2 4,3 5,0 19., 0 25,0 4,5 9,0 17,0 22,0 25,0 26,0