Способ получения левана

(51)5 Р 19/04, С 212 И 1/20, С О// 1:О 1 А РЕТЕН с 1 ТОРСКОМ Ь венный ская М.и рН ахарознохимия3, вып,ССР1974 биотехолучея к биотехоба получения осит Изобретение от нологии и касаетс левана (полифрукт спона) ый м иосинтезом жет быть и мической и из са кото н в пищев х оль мышленскои областяже в медицин фармацевтиче ности, а так исследования и научнь Цель изоб ода и удеше а за счет з а мелассу,сахарозы евым исамены пищево являющуюся д за сч сахарозы, а такжея технологии биоси чнико изменен СпоскатализирующПоверхно дает благоп синтеза лев серег охутивируют и оптиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Элисашвили В.И., ЛойцяВлияние источников углеродапитательной среды на левансактивность. - Прикладная бии микробиология, 1977, т.с.1-15,Авторское свицетельствоМ 464616, кл, С 12 Р 19/04,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕВАН(57) Изобретение относитсянологии и касается способа х,ретения - повышение вывление целевого продукосуществляют следующим о разом.Штамм бактерий С 1 цсопоЬ дапз Л(ВКПМ В) куя в поверхностных условиях п 2ния левана (полифруктана) биосинтезомиз сахарозы. Цель изобретения - повышение выхода и удешевление целевогопродукта. Штамм бактерий С 1 цсопоЬасгег охудапз Л(ВКПМ В) культивируют в поверхностных условиях наоптимизированной питательной среде,содержащей мелассу, диаммонийфосфат,монокалийфосфат и дрожжевой экстрактМелассу вводят в таком количестве,чтобы концентрация сахарозы в средесоставляла 1-7 мас.7, рН исходнойсреды доводят до 5,9-6,0. Предпочтительно использовать мелассу, содержащую 1,37-1,39 Е оксида кальция.Продолжительность процесса биосинтеза 5-6 сут. Выход левана достигает 28 г/л или 93 Е. 2 табл,мальных значениях температуры на оптимизированной питательной среде, содержащей мелассу, диаммонийфосфат, монокалийфосфат и дрожжевой экстракт. Мелассу вводят в питательную среду в таком количестве, чтобы содержание сахарозы составляло 1-7 мас,Ж,Указанный состав питательной среды обеспечивает рост бактерий и биосинтез левана, Максимальный выХод целевого продукта имеет место в том случае, если рН исходной питательной среды равен 5,9-6,0. Эти значения рН соответствуют оптимальным условиямф ента левансахарозы,интез левана. ное культивирование с ятные условия для сверх а. При этом установленочто на средах с мелассой процесс биосинтеза протекает в две фазы: 1-я фаза характеризуется активным размножением бактерий, 2-я фаза является фазой активного синтеза левана и про 5 текает при отмирании бактериальныхклеток,Выход левана повышается, если используется меласса, содержащая оксидкальция. Максимальное повышение выхода имеет место при концентрацииоксида кальция в мелассе 1,37-1,397.Продолжительность процесса биосинтеза 5-6 сут. Выход левана достига 5ет 937. от теоретического,П р и м е р 1. В емкость вносятпитательную среду, содержащую, .:(ИН) НРО 0,1; КНРО 1,5; дрожжевой экстракт 0,5, и мелассу так, чтобы содержание сахарозы в среде составило 6,27. Мелассу перед введением в среду разбавляют водой в соотношении 1:1, фильтрут и стерилизуют.Затем добавлением стерильных растворов 1 н, КОН или 107. Н 2804. доводятрН среды до 5,9-6,0 и засевают средукультурой бактерий С. охуйапз Л(ВКПМ В), выращенной на дрожжевой воде с 5 Х сорбита в течение48 ч, что соответствует стационарнойфазе роста.Процесс ведут н условиях поверхноостного культивирования при 30 С в течение 5-6 сут. Затем биомассу бактерий отделяют от культуральной жидкости центрифугированнем при 7-8 тыс.об/мин в течение 7-10 мин, Жидкую фазу подвергают диализу против дистиллированной воды в течение 1 сут на40холоде и добавляют в нее активированный уголь. Смесь встряхивают 20 мин,центрифугируют при 10-12 тыс. об/мин,очищают от белковых примесей, Леванвыделяют осаждением этанолом. Дляэтого культуральную жидкость обрабатывают при перемешивании 3-кратнымколичеством этанола (по объему) ицентрифугируют в течение 15 мин при5 тыс, об/мин.Выделенный леван лиофилизуют,Выход левана определяют по фруктозе,полученной при гидролизе.П р и м е р 2, Выращивают посевнуюкультуру в колбах объемом 100 мл,55содержащих по 20 мл дрожжевой водыв течение 48 ч при 30 С. Вносят 20 млпосенной культуры в колбу с 200 млнеоптимизированной питательной среды, Таблица КонцентраВыход левана ция сахарозы, 7. 7. от теоретического г/л 5,2512,1522,0 1,5 3,1 6,2 70 78 70 Таблица 2 Продолжительность Выход левана,культивирования, г/лсут 7,013,3 18,6 20,2 23,0 28,0 1 2 3 4 6 50 Формула изобретения Способ получения левана, нключающий культивирование штамма бактерий С 1 цсопоЪасег охудапв ВКПБ Вв оптимальных условиях на питательной среде, содержащей источник сахарозы, диаммонийфосфат, монокалийфосфат и дром евой экстракт, с последующим высодержащей, ь: (НН 4) НР 04 О, 1; КНР 040,1 дрожжевой экстракт 0,3 и мелассу (концентрация сахарозы в среде7,07). Культивирование ведут без пеоремешивания в течение 6 сут при 30 С,при этом накапливается 18,0-18,3 г/ллевана, что составляет 527. от теоретическогоП р и м е р 3. Культуру для посевного материала выращивают в условиях, описанных в примере 2. Культивирование с целью биосинтеза леванаосуществляют на оптимизированной среде, состан которой приведен в примере 1. Через 5 сут в среде накапливается 28,9 г/л левана, что соответствует 937 от теоретического,Зависимость выхода левана от концентрации сахарозы в среде с мелассой приведена в табл. 1 (среда не оптимизированная), от продолжительности культинирования - в табл, 2,целевого продукта, в качестве источника сахарозы используют мелассуи вводят ее в питательную среду в Составитель Г.ГолеваРедактор Н,Рогулич Те;.ред М.Дидык Корректор Т.Малец Заказ 309 Тираж 477 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,10 5 1 делением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что с целью повышения выхода и удешевления 55 743 6количестве, соответствующем концентрации сахарозы - 1-7 мас,ь, а процессбиосинтеза ведут в условиях поверх 5костного культивирования, при этомрН исходной среды устанавливают5,9-6,0,