Штамм микроскопического гриба aspergillus теrrеus продуцент фосфопротеин фосфатазы

(51)5 С 12 И 1/14 9 1 б ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Авторское свидетельство СССР Р 1182078, кл. С 12 И 9/00, 1984. (54) ШТМР 1 11 ИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА АБРЕКС 111 Л)Б ТЕККЕЦБ - ПРОДУЦЕНТ ФОСФОПРОТЕИН ФОСФАТАЗЫ(57) Изобретение относится к ферментной биотехнологии и может быть использовано для получения Фермента фосфопротеин Фосфатазы, применяемого в пищевои промышленности и как полуфабрикат в клинической и экспериментальной медицине и фармакологической промышленности, а также препаративной Изобретение относится к Фермент -ной микробиологической промышленностии представляет собой новый штамммикроскопического гриба, который может быть использован для полученияФермента Фосфопротеин фосфатазы, применяемого в пищевой промышленностии как полуфабрикат в клинической иэкспериментальной медицине и фармакологической промышленности, а такжепрепаративной биохимии,Целью изобретения является выделение штамма микроскопического гриба,обладающего способностью к биосинтезу фосфопротеин фосфатазы в погруженной культуре и замена источников сырья биохимии. Цель изобретения - выделение штамма микроскопического гриба,обладающего способностью к биосинтезу Фосфопротеин фосфатазы в погруженной культуре и замена источниковсырья животного происхождения на микробиологическое. Штамм Аярегя 111 цягеггеця ВКПИ Гполучен путем рассева и является моноконидиальным вариантом исходной культуры, Штамм является облигатным аэробом, термотолерантом с короткой лаг-фазой, быстрым закислением культуральной жидкости (24 ч рН 3,5 при исходном рН среды 6,7), что предохраняет его прикультивировании от бактериальной инфекции. Активность фосфопротеин фосфатазы в культуральной жидкости620-690 ед/мл, удельная активностьфермента в препарате 180-197 ед/мгбелка. животного происхождения на микробиоло- ф гиче ское. ВилШтамм микроскопического гриба е Ая р егя 111 цяе ггеця выделен из почв ( степного участка Приокского террас- його заповедника. Предлагаемый штамм АярегВ 11 ця Сеггеця ВКПИ Рполучен путем рассева и является моноконидиальным вариантом исходной культуры.Культивирование Аярегр 111 ця геггеця шт.87- 19 проводили глубинным способом на питательной среде, содержащей углеводы, минеральный и органический азот и микроэлементы. Выращивание осуществляли в течение 66-72 ч при 35 С. Культуральную жидкость отде 1551732ляли от мицелия с помощью фильтрования. Фильтрат высушивали лиофильно,За единицу активности фосфопротеинфосфатазы принимали такое количествофермента, при действии которого насубстрат в стандартных условиях образуется 1 мкмоль фосфора.Активность фосфопротеин фосфатазыв культуральной жидкости 620-690 ед/мл 10удельная активность фермента в препарате 180-197 ед/мг белка,Морфологические признаки, Мицелий,выращенный на агаризованной средеЧапека-Лакса, имеет в диаметре 2-3 мкм,15слабасептированный, мелкозернистый,Конидиенасцы длинные Ф 4,8-7,4 мкм,конидиальные головки большей частьюне радиального строения, стеригмыдвурядные, конидии в цепочках, навершине конидиальной головки образуютхохолок. Головка конидиеносца в 917,6-12,4 мкм, конидии в И 2,2-2,5 мкм,поверхность гладкая, Колония к 4-мсуткам при 30 С быстро растет и дастигает в Ф 27-30 мм, приподнята надсубстратом, бежевого цвета, кольцеобразно имеющего разные оттенки, сильная радиальная складчатость. С обратной стороны колония белая с лимонножелтой пигментацией, сильная радиальная складчатость. Интенсивное спороношение начинается на 4-5-е суткираста.Культуральные признаки. На синтетической агаризованной среде Чапека35 культура при 30 С растет быстро, колонии через 24 ч роста имеют в диаметре 2-3 мм, Мицелий белый, пушистый, Через 48 ч роста диаметр колонии достигает 20 мм. Мицелий сильно приподнят над субстратом. Центр колонии имеет кратерообразную вершину слабо- палевого цвета, Остальная часть колонии белоснежная, края неровные, бес цветные. С обратной стороны колония складчатая, в центре светло-желтая, к краю бежевая, сам край бесцветный.На 3-и сутки диаметр колонии достигает 27-30 мм. Центральная часть ко 50 лонии сильно поднята над субстратом, морщинистая, светло-желтого цвета, напоминает "плато" диаметром 17 мм, Вокруг "плато" кольцом белая, пушистая культура с зубчатымн краями, слегка морщинистая, шириной 3-4 мм, затем бесцветная полоса культуры шириной 2-3 мм с неровными краями. Обратная сторона колонии: центральная часть -складчато - морщинистая, желтого цвета,остальная часть - колонии слаба-бежевая, сильная складчатость. На 4-е сутки роста никаких культуральных изменений не произошло.оПри 40 С на той же среде через 24 чроста колонии достигают в диаметре5 мм. Белый, пушистый мицелий слегкаприподнят над субстратом. Через 48 чроста диаметр колонии достигает 5052 мм. Колония сильно приподнята надсубстратом, ярко выраженная радиальная складчатость, вершина кратерообразная, Внутри кратера светло-желтаяокраска, по краю кратер бежевый, остальная часть колонии белая илисветло-палевая. С обратной стороныколония радиально крупноскладчатаяв диаметре 10-12 мм с желтой пигментацией, па краям - палевая; края колонии неровные, колония плотная, войлочная,На 3-и сутки роста диаметр колонии37-38 мм, колония приподнята надсубстратом; центральная часть светлобежевого цвета с обильным количеством конидий, затем идет эона шириной2 мм светло-палевого цвета, переходящая в зону белого цвета, край бесцветный, неровный, сильная радиальнаяскладчатость. Обратная сторона колонии более менее равномерного лимонного цвета с переходом в белый по краям колонии, сильная радиальная складчатость.На 4-е сутки роста диаметр колониидостигает 44-52 мм, Приподнятостьколонии над субстратом исчезла. Радиальная складчатость еще более усилилась. Центр колонии темно-бежевый,Окраска колонии меняется кольцеобразно; центр диаметром 15 мм темна-бежевый, первое кольцо толщиной 7 ммравномерно светло-бежевое, второекольцо толщиной 7 мм равномерно светло-бежевое, второе кольцо толщиной3 мм желто-бежевое, третье кольцотолщиной 4 мм светло-бурого цвета,четвертое кольцо толщиной 3 мм белого цвета.В последующие 10 сут характер колоний не изменился.При углубленном культивированиина сусле 8 Б через 20-24 ч роста притемпературе в интервале 30-40 С обнаружены клетки типа экзоспор, шаровидной формы с четкой оболочкой диаметром 3-6 мм, которые не исчезли в проФормула изобретения Штамм микроскопического гриба30 Лзрегдг 11 из геггеиз ВКПИ Рпродуцент фосфопротеин фосфатазы,Составитель И. ПриваловаТехред Л,Сердюкова Корректор О, Кравцова Редактор Н. Рогулич Подписное Заказ 308 Тираж 493 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 5 15цессе культивирования. При глубинномкультивировании культура склонна кобразованию пиллет.Отношение к углеродному питанию: ассимилирует крахмал, глюкозу, мальтоэу, сахароэу, лактозу, галактоэу.Отношение к азотному питанию; растет на нитратах, аммонийных неорганических солях, органических источникахазота.Отношение к кислороду: облигатныйаэро 6.Отношение к температуре; термотолерант, температурный оптимум роста30 40 ьС.Отношение к кислотности среды:растет при рН 3,0-7,0, рН оптимум3,5-6, О,П р и м е р, В колбу емкостью750 мл наливают 100 мл питательнойсреды следующего состава, Е: крахмалкукурузный 3 ВВК 0 15 МАКО, 0 1КС 1 0 1; ИН Ю О 1; (ИН )БО 01;ИаС 1 0,3; вода - остальноеЗатем засевают конидиалъной суспен.эней А.Геггецз шт,87-19, Культивироование проводят при 35 С, в условияхаэрации на качалке при 180 об/минв течение 72 ч. Активность ферментафосфопротеин фосфатазы 689,8 ед/мл,51732 6Таким оораэом, выделенный штаммобладает способностью синтезироватьфосфопротеин фосфатаэу (К,Ф.3.1,3.16), 5образование которой ранее не отмечалось у микроорганизмов. Гриб А,Теггецз шт,87-19 представляет собой новую культуру со стойкими морфологическими и биохимйческими признакамии свойствамиИспользование предлагаемого штамма дает возможность получать новыйфермент фосфопротеин фосфатазу длятехнической микробиологии. Микроорганизм является облигатным аэробом,термотолерантом с короткой лаг-фазой,быстрым закислением культуральнойжидкости (24 ч рН 3,5 при исходномрН среды 6,7), что предохраняет его 20 при культивировании от бактериальнойинфекции. Склонность к образованиюпиллет ускоряет процесс отделениябиомасСы от культуральной жидкости.Весь этот комплекс свойств делает 25 микроорганизм очень технологичньк,